Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Векторы, векторные системы

    Векторная система на основе фага Р1, использующаяся для введения в клетки Е.соИ вектора с крупной вставкой (100-300 т.п.н.) с помощью электропорации. [c.550]

    Рассмотрим детали модельной структуры. В кристалле разности -X,, Vj = y — yt, Wj = z — zi являются компонентами вектора, проведенного из гo в s-тый атом ячейки (рис. 112 а). В пространстве модельной структуры они являются координатами /-го атома ячейки (рис. 112 6). Следовательно, этот /-тый атом модели находится в конце межатомного вектора г /, отложенного от начала координат элементарной ячейки модели. Таким путем строится вся модель все межатомные векторы откладываются от общего начала координат и в концах их помещаются атомы . Отсюда названия — пространство межатомных векторов, или коротко векторное пространство , векторная система , — часто применяемые для обозначения рассматриваемого построения. [c.420]


    На элементарную ячейку пространства межатомных векторов приходится атомов . Из них N помещается непосредственно в начале координат ячейки они находятся в конце векторов нулевой длины (случай 5 /) остальные Л (Л —1) связаны попарно центром инверсии в начале координат. Это понятно если в структуре кристалла существует вектор соединяющий й атом с 5-ым, то имеется и обратный вектор проведенный из 5-го атома в й. Пространство межатомных векторов всегда обладает центрами инверсии. В полном соответствии с этим структурные амплитуды отражений от векторной системы (т. е. структурные факторы) являются вещественными величинами. [c.421]

Рис. 137. Анализ векторной системы центросимметричной структуры а—смещение произвольного вектора б—смещение вектора, проходящего через центр инверсии структуры Рис. 137. <a href="/info/325626">Анализ векторной</a> системы центросимметричной структуры а—смещение произвольного вектора б—<a href="/info/92694">смещение вектора</a>, проходящего через <a href="/info/92724">центр инверсии</a> структуры
    Поскольку выделенные на первом этапе основная и инверсированная структуры смещены друг относительно друга, будут смещены и соответствующие им элементы симметрии. Это позволяет разделить отобранные максимумы на две группы, внутри каждой из которых действуют одни и те же операции симметрии, но между которыми симметрической связи нет. На рис. 138 в качестве примера рассмотрена векторная система группы атомов, связанных плоскостью симметрии первый этап анализа системы проведен на основе сопряжения в середине некоторого радиус-вектора, второй—на основе свойств симметрии структуры (рис. 138 б). [c.485]

    Как отмечается в разд. 9.6.3, в ряде случаев желательно иметь воз.можность быстро выделить провирусные последовательности из клеток млекопитающих путем молекулярного клонирования,— например, чтобы проанализировать структуру трансдуцированных последовательностей, если ретровирусный вектор использовался для удаления интронов из геномной ДНК-вставки [19]. Для решения этой задачи могут оказаться весьма полезными челночные векторные системы, облегчающие перенос рекомбинантов между животными и бактериальными клет ками. Такие векторы содержат эукариотическую область нача- [c.284]

    В настоящей главе мы надеемся дать представление о взаимодействии между агробактериями и растительными клетками, которое приводит к успешной трансформации. Предложенные методики различаются главным образом выбором векторной системы, типом эксплантата, методами селекции трансформированных тканей и регенерации трансформированных растений. В этой главе подробно описаны различные подходы к генетической трансформации растений векторами на основе агробактерий при использовании в качестве модельных систем табака, льна и моркови и рассмотрены главные факторы, которые необходимо учитывать при попытках адаптировать любую методи- [c.87]


    Смит Д.П. Нитевидные фаги в качестве клонирующих векторов // Сельскохозяйственная биология Векторные системы молекулярного клонирования. М. Мир, 1991. С. 65-90. [c.121]

    Как видим, векторная система нитевидных фагов разработана достаточно хорошо. Это обусловливает все более активное применение данных векторов для анализа нуклеотидной последовательности клонированных фрагментов ДНК, для мутагенеза клонированных генов и т. д. Все чаще векторные производные ните- [c.117]

    Векторные системы, способные интегрировать крупные вставки (>100 т. п. н.), имеют большую ценность при анализе сложных эукариотических геномов. Без таких векторов не обойтись, например, при картировании генома человека или при идентификации отдельных генов. В отличие от библиотек с небольшими вставками, в геномной библиотеке с крупными вставками скорее всего будет представлен весь генетический материал организма. Кроме того, в этом случае уменьшается число клонов, которые нужно поддерживать, и увеличивается вероятность того, что каждый из генов будет присутствовать в своем клоне. Для клонирования фрагментов ДНК размером от 100 до 300 т. п. н. был сконструирован низкокопийный плазмидный вектор на основе бактериофага Р1 — химерная конструкция, называемая искусственной хромосомой на основе фага Р1. Был создан также очень стабильный вектор, способный интегрировать вставки длиной от 150 до 300 т. п. н., на основе Р-плазмиды (F-фактора, или фактора фертильности) Е. соИ, которая представлена в клетке одной или двумя копиями, с селекционной системой la Z векторов pU . Эта конструк- [c.76]

    Если вектор представляет собой плазмиду, реплицирующуюся независимо от хромосомы, то он должен содержать сайт инициации репликации, функционирующий в хозяйской клетке. Если же вектор предназначен для встраивания в хозяйскую хромосомную ДНК, то для обеспечения рекомбинации он должен нести последовательность, комплементарную определенному участку хромосомной ДНК хозяина (хромосомный сайт интеграции). Поскольку технически многие операции с рекомбинантными ДНК сложнее проводить в клетках эукариот, чем прокариот, большинство эукариотических векторов сконструированы как челночные. Другими словами, эти векторы несут два типа сайтов инициации трансляции и два типа селективных маркерных генов, одни из которых функционируют в Es heri hia oli, а другие — в эукариотических хозяйских клетках. Такие векторные системы экспрессии разработаны для дрожжей, насекомых и клеток млекопитающих. [c.136]

    Вирусы растений — как векторы обычно мало пригодны из-за своей патогенности для растительных организмов и неспособности встраиваться в хромосомы хозяйской эукариотической клетки В настоящее время наметились подходы к изучению и оценке трех векторных систем двухцепочечной ДНК вируса мозаики цветной капусты, одноцепочечной РНК вируса погремковости табака, одноцепочечной ДНК вируса золотистой мозаики фасоли Из них лишь первая оставляет надежды на дальнейшее продвижение этой системы в сторону практической реализации пока в лабораторных условиях Не исключается возможность объединения ДНК вируса мозаики цветной капусты с Т-ДНК Ti-плазмиды из Agroba tenmn и расширить крзт растений — реципиентов такой векторной системы [c.197]

    Для того чтобы решить, какую часть рассчитать, нужно рассмотреть симметрию векторной системы. В случае пространственной группы 222 система векторов имеет симметрию Сттт. Если рассчитать функцию Патерсона для объема, ограниченного величинами следующих отрезков на ребрах векторной ячейки [/ от О до [c.160]

Рис. 136. Анализ векторной системы при помощи смещений фрагмента структуры а—построение векторной системы б—смещения вектора в—использование свойства псевдоинверсии г и 3—смещения треугольника Рис. 136. <a href="/info/325626">Анализ векторной</a> системы при помощи смещений <a href="/info/926700">фрагмента структуры</a> а—построение <a href="/info/199743">векторной системы</a> б—<a href="/info/92694">смещения вектора</a> в—<a href="/info/1578568">использование свойства</a> псевдоинверсии г и 3—смещения треугольника
    Современные векторные системы часто бывают полифункциональ-ными, совмещая несколько функций в одном векторе. Первые естественные векторные плазмиды были выделены из бактерий в последующем большинство векторов было сконструировано при помощи методов генетической инженерии в соответствии с задачами экспериментаторов (экспрессионные векторы, векторы для клонирования, векторы для трансформации). [c.36]

    В заключение следует отметить, что хотя векторы на основе вирусов редко применяются для трансформации растений, вирусные промоторы, и прежде всего промотор 35S-PHK aMV, широко используется для экспрессии чужеродных генов в других векторных системах. Промотор 35S-PHK вируса мозаики цветной капусты является сильным промотором, кроме того, он активен не только в клетках крестоцветных, но и в клетках других семейств, не проявляет тканеспецифичности и экспрессируется во всех клетках трансформированного растения. [c.57]

    Появление целого ряда различных амплифицируемых векторов, описанных в разд. 8.2, позволило расширить ассортимент клеток, используемых для амплификации генов, и не ограничиваться исходными /г/г -клетками СПО ОИКХ-ВИ. В связи с этим перед исследователем встала проблема выбора клеток и векторной системы. В качестве общего правила можно рекомендовать в первую очередь рассматривать /г/г+-систему, поскольку селекция в с /1/г -клетках СНО обеспечивает высокую частоту трансфекции, а процесс амплификации вектора наиболее полно изучен именно для этих клеток. [c.258]


    Цель настоящей главы — очертить рамки практического использования ретровирусов в качестве экспрессирующих векторов общего назначения и описать методы размножения вирусов, тестирования и инфицирования, которые являются общими для большинства процедур, описанных выше. Всех деталей специализированных экспериментов мы касаться не будем. Большинство ретровирусных векторов, описанных на сегодняшний день, ведет свое происхожедние либо от вирусов птиц, либо от вирусов лейкоза мышей (ВЛМ, МЬУ). В данной главе мы сконцентрируем внимание на векторных системах типа МЬУ и экспериментальных процедурах, связанных с использованием этих векторов. [c.274]

    ЦЫ В присутствии подходящих хелперных компонентов. Подобные векторы по сравнению с векторами других типов имеют важные преимущества — простоту, и, судя по нащему опыту, позволяют получать вирусные препараты со стабильно высоким титром и устойчивой экспрессией клонированного гена. Более сложные векторные системы могут оказаться более универсальными, однако часто их использованпе наталкивается на трудности, связанные с исстабильностью или низким уровнем экспрессии. [c.280]

    В первую очередь необходимо иметь хорошо отработанную систему хозяин — вектор. Под вектором понимается, как правило, небольшая молекула ДНК, способная к автономной репликации в определенном микроорганизме. Это может быть бактериофаг или плазмида. Естественно, необходимо иметь эффектинп1>1Й способ введения векторной и рекомбинантной молекулы в микроорганизм. Векторные молекулы должны обладать рядом свойств, позволяющих удобное введение чужеродной ДНК и ее последующую экспрессию. В настоящее время векторные системы очень хорошо разработаны для такой бактерии, как Es heri hia oli. Задача прикладной микробиологии — освоение систем хозяин — вектор для промышленных микроорганизмов бацилл, псевдомонад, актиномицетов, дрожжей и др. Успехи в этой области суммированы в обзоре Успехи микробиологии за 1983 г. [c.96]

    Выделение малых плазмид в больших количествах из . o/i — это важный этап любой серии манипуляций, имеющей целью встраивание генов в трансформирующие векторы растений. Плазмиды могут содержать ген, предназначенный для переноса, в специфичном рестрикционном фрагменте или могут быть частью векторной системы трансформации растений, например промежуточным вектором для коинтеграции с модифицированной плазмидой или бинарным вектором, способным реплицироваться в Е. oli и агробактериях. [c.42]

    Селекцию растительных клеток, трансформированных неонкогенными векторами, на фоне нетрансформированных клеток можно осуществить по их способности расти на питательной среде, содержащей антибиотики, в норме токсичные для таких клеток. Из подобных резистентных к антибиотикам тканей можно регенерировать нормальные побеги с помощью стандартных методов культуры тканей. Однако при попытках трансформировать растительные клетки неонкогенными векторными системами на основе Ti- или Ri-плазмид перед исследователем встает следующая проблема. В отличие от индукции корончатого галла или косматого корня неонкогенные трансформированные растительные клетки необходимо снабдить ростовой средой строго определенного состава, содержащей правильное соотношение фитогормонов. Такие среды специально подбирают для конкретных видов (или даже сортов) растений, чтобы поддержать образование каллуса после непродолжительного деления клеток в ответ на поранение. Обычно пораженную ткань культивируют in vitro — с этим подходом связаны различные проблемы, имеющие отношение к селекции трансформированных клеток  [c.101]

    Приступить к эксперименту по трансформации с помощью неонкогенных векторных систем следует после выбора подходящих эксплантатов и условий инокуляции и селекции, позволяющих получать резистентные к антибиотику каллусы с помощью онкогенных штаммов агробактерий и угг-помощников (описанных в разд. 2.2). Необязательно, что условия, дающие эффективную трансформацию определенного эксплантата с помощью онкогенной векторной системы, подойдут для трансформации с помощью неонкогенных векторов. Неонкогенные ткани гораздо чувствительнее к условиям культивирования, поскольку в них, очевидно, не проявляются физиологические и ростовые свойства ткани корончатых галлов и косматого корня. И в этом случае подходящие комбинации угг-систем, хозяйских штаммов агробактерий и селективных генов можно установить только эмпирически. [c.117]

    Из-за размера и сложности Ti-плазмиды для получения полноценного трансформирующего вектора требуется провести ряд генно-инженерных манипуляций. С генами, предназначенными для переноса в растительные клетки, сначала манипулируют in vitro и в зависимости от того, становятся ли они частью коннтегративной или бинарной векторной системы, их включают в состав либо простой челночной плазмиды (коинтегративная система), либо более сложной плазмиды с широким кругом хозяев (бинарная система). Плазмиду затем вводят в Е. соИ [c.195]

    Данный пример относится к генам, переносимым с помощью Ti-ллазмидной векторной системы А. tumefa iens. Впервые организация Т-ДНК в трансформированных тканях была описана Томашовым и сотрудниками [53]. Для того чтобы получить полную картину организации перенесенной ДНК, следует обработать ее несколькими рестриктазами и нанести на гель для последующего анализа по Саузерну с помощью ряда перекрывающихся проб. На гель следует нанести исходную Т-ДНК, содержащую фрагменты Т-ДНК, вырезанные из векторов, к которым добавлена ДНК из спермы лосося (или другая неслеци- [c.313]

    Интенсивные исследования последних лет принесли и продолжают приносить новые знания о механизмах, обеспечивающих высокоэффективную и высокоспецифическую экспрессию генов [15]. Эту информацию успешно используют для эффективной экспрессии рекомбинантных генов в гомологичном или гете-рологичном генетическом окружении [117]. После рассмотрения основных принципов конструирования векторов для клонирования ДНК можно перейти к обсуждению проблемы экспрессии клонированных генов в искусственных генетических системах. Именно экспрессия клонированных генов является одной из основных задач генной инженерии и биотехнологии. Действительно, функциональную роль отдельных генов и их частей в живом организме можно понять и оценить лишь на основании экспрессии этих последовательностей, т.е. по фенотипическому проявлению их потенциальных биологических возможностей. Кроме того, крупномасштабная наработка биотехнологических продуктов требует осуществления эффективной экспрессии конкретных генов в искусственно созданных условиях. Для получения полноценной экспрессии клонированных генов используют экспрессирующие векторные системы, принципы конструирования которых в настоящее время хорошо разработаны. [c.104]

    Помимо секвенирования вставок в плазмидных векторах таковое возможно и с другими векторными системами, и в литературе сообщается о быстрых и простых способах выделениях ДНК фага лямбда, пригодной для ее непосредственного двуцепочечного секвенирования ферментативным методом с использованием в качестве затравок стандартных олигонуклеотидных праймеров [Manfioletti, S hneider, 1988 Malik et al., 1990]. [c.56]

    Однако все эти векторы и векторные системы имеют существенный недостаток. Поскольку проведение подобных делеционных процедур требует использования специальных штаммов Е. oli и весьма сложной схемы их выращивания, это служит некоторым препятствием к их широкому использованию. Другими отрицательными моментами, особенно для векторов, рассчитанных на клонирование крупных фрагментов ДНК, являются некоторая нестабильность вставки, трудности в ее реориентации, вызванной необходимостью читать другую цепь ДНК. Также для большинства транспозонов характерным является сосредоточение мест их внедрения у дистального конца вставки по сравнению со значительно меньшей частотой данных событий в центральной и проксимальной частях [Ahmed, Podemski, 1997]. [c.298]

    Рассмотренные примеры со всей очевидностью демонстрируют огромные перспектршы использования векторной системы, предназначенной для клонирования и экспрессии чужеродных генов в широком спектре грамотрицательных бактерий. Важно отметить, что при создании векторов данного типа активно используются опыт и знания, накопленные в ходе разработки генно-инженерной системы Е. oli. [c.229]

    У бацилл имеется большое разнообразие а-факторов, а следовательно, специфичностей РНК-полимеразы (см. 10.3.1), поэтому особый интерес представляет выделение промоторов различных групп. Так, в векторе pPL703 были клонированы промоторные фрагменты из хромосомной ДНК В. subtilis. При анализе отобранных клонов на возможность продуцировать AT в экспоненциальной и стационарной фазах роста культуры обнаружены фрагменты, направляющие транскрипцию лишь в постэкс-поненциальной фазе. Таким образом, разработанная векторная система позволяет не только клонировать промоторные фрагменты ДНК, но и характеризовать их. [c.245]


Смотреть страницы где упоминается термин Векторы, векторные системы: [c.26]    [c.379]    [c.550]    [c.499]    [c.139]    [c.139]    [c.30]    [c.96]    [c.92]    [c.96]    [c.100]    [c.141]    [c.224]    [c.224]    [c.224]    [c.127]    [c.161]    [c.223]    [c.225]    [c.225]   
Научные основы экобиотехнологии (2006) -- [ c.241 , c.243 , c.342 ]




ПОИСК





Смотрите так же термины и статьи:

Вектор



© 2024 chem21.info Реклама на сайте