Колонки для электрофореза

Ввиду того, что различия в растворимостях полипептидов очень невелики, для выделения индивидуальных пептидов и.з смесей требуются специальные методы. К ним относятся фракционный диализ, распределительная хроматография (например, на колонке из бумажного порошка или листе бумаги), адсорбционная хроматография, ионнообменная хроматография, электрофорез и противоточное распределение по Крэйгу (т. е. распределение между двумя ограниченно смешивающимися жидкостями). Для характеристики выделенных пептидов и доказательства их однородности применяют противоточное распределение, количественный анализ аминокислотного состава и определение концевых групп полипептидной цепи. [c.383]

Эта аппаратура не могла найти массового применения ввиду своей сложности и длительности проведения исследования, что заставило исследователей искать пути упрощения и ускорения результатов анализа. После войны начала применяться методика электрофореза на различных подложках, т. е. с введением инертных, раздробленных, твердых веществ в электрофоретическую трубку (колонку) для получения более четкой границы движу- [c.137]

При электрофорезе компоненты смеси ионов на твердом носителе (напрпмер, фильтровальная бумага или колонка с наполнителем, насыщенные проводящим буферным раствором) мигрируют с различными [c.380]

Для идентификации белков, элюируемых с колонки, содержимое пробирок, соответствующее отдельным пикам на кривой элюции, объединяют, подвергают диализу, лиофилизируют и исследуют с помощью электрофореза на бумаге или в полиакриламидном геле. [c.112]

Высокий процент в большинстве белков лизина и аргинина приводит при гидролизе трипсином к появлению сравнительно большого числа относительно мелких пептидов. Их анализируют методом пептидных карт на бумаге или в тонком слое, а также с помощью хроматографии на колонках и электрофорезом. [c.140]

Очистка антигена. Цитозольную фракцию из мозга свиньи (с. 379) пропускают через колонку с иммуносорбентом (1x2 см) в фосфатном буфере (pH 7,4) и колонку промывают тем же буфером. Элюцию проводят 2 М глициновым буфером (pH 2,8), фракции нейтрализуют 2 М трис-НС1 буфером, pH 8,6 Определяют концентрацию белка, цАМФ-связывающую активность (с. 331) она не должна быть ниже 12 нмоль/мг. Проверяют чистоту полученного препарата регуляторной субъединицы (м. м.=56 ООО Да) методом электрофореза (с. 119). Таким же способом, имея моноклональные или поликлональные антитела к соответствующим антигенам, можно получить гомогенные препараты этих антигенов. [c.325]

Электрофорез в гелях- применяют гл.обр. для разделения высокомол. соед., напр, белков. Для этого обычно в виде блоков и колонок используют гели крахмала и полиакриламида. Адсорбция разделяемых в-в и электроосмос в этих материалах незначительны. [c.437]

В настоящее время разработаны более совершенные методы анализа. Наиболее широкое распространение из них получили следующие распределительная хроматография на бумаге или на колонках с целлюлозой, углем и другими адсорбентами хроматография в тонком слое адсорбента газожидкостная хроматография производных моносахаридов электрофорез на бумаге. [c.70]

Для установления качественного и количественного состава компонентов гидролизата метилированного полисахарида применяют хроматографию на бумаге, разделение на колонках с адсорбентами, электрофорез на бумаге или газожидкостную хроматографию. [c.94]

Электрофорез, процесс разделения молекул, основанный на разной скорости перемещения их в электрическом поле, проводят самыми разными способами. Очень небольшое количество раствора, содержащего смесь белков (например, белков сыворотки крови), наносят в виде тонкой полоски на лист фильтровальной бумаги или ацетата целлюлозы. Лист насыщают буфером и пропускают через него электрический ток. Напряжения в несколько сот вольт достаточно для разделения белков сыворотки в течение 1 ч. Для ускорения процесса и снижения диффузии низкомолекулярных веществ широко используют высоковольтный электрофорез. Прикладываемое напряжение составляет в этом случае 2—3 тыс. вольт. Образец постоянно охлаждают с помощью термостатируемых пластин иногда для той же цели всю систему погружают в сосуд с керосином. Электрофоретическое разделение больших количеств материала проводится в плоских лотках, заполненных крахмальным или каким-либо другим гелем. Одним из наиболее распространенных и чувствительных методов разделения белков является электрофорез в колонке, заполненной полиакриламидным гелем. Этот метод, в настоящее время сильно усовершенствованный, позволяет проводить разделение молекул одновременно и по размеру, и по электрическому заряду его называют методом электрофоретического молекулярного сита 127, 128]. [c.164]

Электрофорез в градиенте плотности. В качестве среды используют жидкость, стабилизированную добавлением глицерина, гликолей или сахарозы, создающих градиент плотности. Этой жидкостью, более тяжелой, чем фракционируемый раствор, заполняют внутреннюю трубку стеклянной охлаждаемой колонки. Дно трубки закрыто пористой стеклянной пластинкой. К обоим концам колонки присоединяют два электродных сосуда и проводят электрофорез. [c.145]

Электрофорез на колонках. Колонку заполняют суспендированным в буфере носителем. Фракционируемую смесь отрицательно заряженных веществ (что имеет место для большинства биологических материалов) наносят в колонку сверху, а положительно заряженных — снизу. Сбор фракций после электрофореза осуществляют путем последовательного элюирования буферным раствором. [c.146]

В смеси инертных комплексов миграция их под действием диффузионных электрофоретических или каких-либо других сил происходит для каждого сорта ионов с характерной скоростью. На этом основано применение хроматографии при синтезе комплексных соединений. Хроматография и электрофорез могут быть использованы при синтезе, очистке и разделении координационных соединений. Например, очистка [Сг(ННз)в] " от [Сг(ННз)б (Нр) и [Сг(ЫНз)4 (Н20)2] на ионообменной колонке с AljOg использование для синтеза хлороаквокомплексов Rh , и и т. д. высоковольтного электрофореза на бумаге. [c.195]

ТСГФ удобно использовать в качестве экономного пробного метода для выбора типа геля и скорости элюции при подготовке препаративной очистки белка гель-фильтрацией на колонке. Малое количество необходимого препарата и возможность одновременного обследования нескольких препаратов делает метод ТСГФ привлекательным и для клиники, где он может дополнить, а иногда и заменить электрофорез и электрофокусирование. [c.165]

Рассмотренный только что для обычной сефарозы, этот вариант элюции, естественно, находит применение и при использовании гидрофобизированной агарозы. В качестве примера процитируем недавно опубликованную работу по мягкой очистке HMG-белка из ядер печени на колонке со-аминобутилагарозы. Этот белок растворим в растворе сульфата аммония вплоть до концентрации, достигающей 70% от насыщения. Сначала такой концентрацией СА в нейтральном 0,01 М трис-буфере высаливали из экстракта ядер большое количество балластного белка. Затем надосадочную жидкость, содержащую около 40 мг белка, вносили на колонку размером 2 X X 30 см, уравновешенную тем же раствором СА. Элюцию вели снижающимся линейным градиентом концентрации СА в том же буфере (500 мл) со скоростью 20 мл/ч, т. е. примерно 7 мл/см -ч. Низкая скорость элюции характерна для всех опытов такого рода ввиду повышенной вязкости концентрированных солевых растворов и соответствующего снижения скорости диффузии макромолекул. Около 30% белка не садилось на колонку и удалялось при первоначальной промывке. В ходе элюции выходило четыре пика, в первом из которых методом электрофореза идентифицировали HMG-белок [ onner. omings, 1981]. [c.181]

М мочевины, 1 мМ ДТТ и 0,5% метиламина. На колонке СМ-целлюлозы (1 X 30 см) линейным градиентом концентрации Na l (О—0,4 М) смесь белков удавалось разделить примерно на 20 фракций (рис. 122). Конечно, по своему качеству это разделение уступает двумерному электрофорезу рибосомальных белков, но зато его можно вести в любом препаративном масштабе и нет проблемы элюции белков из геля. [c.311]

Иногда десорбция вещества с аффинного сорбента идет с трудом, препарат сильно разбавляется и[ имеется опасность его денатурации. В таких случаях бывает целесообразно пойти на некоторое усложнение эксперимента и вместо вымывания из колонки десорбируемого вещества добиваться его удаления за счет электрического поля, т. е. сочетать элюцию с аффинного сорбента с электрофорезом. [c.411]

Фракционирование белков сыворотки крови на КМ-целлюлозе осуществляют с помощью ступенчатого элюирования, подавая на колонку последовательно следующие растворы 0,02 М натрий-ацетатный буфер, pH 4,6 ( стартовый буфер), затем 0,05 М натрий-ацетатный буфер, pH 5,2 0,08 М натрий-ацетатный буфер, pH 6,0 0,1 М фосфатный буфер, pH 7,0 и, наконец, 0,1 М фосфатный буфер, содержащий 0,5 М Na l, pH 8,3. Каждый новый раствор подают на колонку только после того, как полностью элюируется пик, вымываемый предыдущим раствором. Скорость тока приблизительно составляет 50 мл/ч. Элюат собирают порциями по 2—3 мл. Обработку результатов см. на с. 108. Идентификацию белков осуществляют методом электрофореза на бумаге или в полиакриламидном геле (с. 112). Регенерацию КМ-целлюлозы проводят вне колонки. [c.113]

К наиболее распространенным физико-химическим методам определения молекулярной массы белков наряду с седиментационными относятся гель-хроматография (на колонках и в тонком слое), а также электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии додецилсуль-фата натрия. Использование этих методов не требует сложной аппаратуры и большого количества исследуемого материала. Получаемые результаты хорошо воспроизводятся и, как правило, коррелируют с данными, полученными другими методами. [c.116]

К 100—200 мг РНК добавляют 0,75 н. NaOH из расчета 1 мл щелочи на 100 мг препарата и проводят гидролиз при 37°С в течение 18 ч. После гидролиза суспензию охлаждают и для удаления ионов Na+ тотчас наносят на колонку (0,5x3 см), заполненную катионообменной смолой в Н+-форме. Элюат собирают, колонку промывают трижды 3 мл воды. Фракции объединяют и упаривают на роторном испарителе. Осадок растворяют в минимальном объеме воды и фракционируют рибомононуклеотиды методами электрофореза или хроматографии. [c.180]

Электрофоретическое разделение полисахаридов может быть осуществлено различными путями под действием электрического тока в растворе (электрофорез с подвижной границей в ячейке Ти-зелиуса) на полосках бумаги, на листах бумаги из стеклянного волокна, на лентах из чистого отбеленного шелка, на колонках, заполненных стеклянным порошком (зонный электрофорез). [c.48]

Для препаративного разделения полисаридов применяют колонки, наполненные стеклянным порошком, и буферный раствор 0,05 М раствор ЫагВЮт- ЮНгО). Электрофорез проводят при напряжении примерно 450 в (1,8 в/см) и силе тока 28—30 ма [34]. [c.50]

Более убедительными были работы, посвященные очистке выделенных соединенрй методами хроматографии, гельфильтрации и электрофореза. Наибольший интерес в этом отношении представляет исследование лигнинуглеводных комплексов из черного щелока, полученного при сульфатной варке древесины березы [19]. Фракционным осаждением, электрофорезом в колонках с гелем хроматографией на геле удалось показать, что основная масса растворённого лигнина не содержала связанных углеводов. Однако часть лигнина выделялась вместе с гемицеллюлозами. Попытки разделить их методами электрофореза и гельфильтрации не дали положительных результатов. В процессе разделения указанными методами углеводы перемещались с лигнином примерно в одной пропорции. Отсюда был сделан вывод о существовании лигнингемицеллюлозного комплекса в черном щелоке. [c.295]

Для проведения электрофореза на порошкообразных носителях было сконструировано большое число различных приборов. Одним из наиболее эффективных является аппарат Пората [52], в котором разделение веществ осуществляется на вертикальной термостатированной колонке, наполненной целлюлозой. После окончания процесса разделения вещества элюируют буфером и собирают при помощи автоматического коллектора фракций. [c.537]

Электрофорез. Компоненты смеси ионов на твердом носителе (например, фильтровальная бумага или колонка с наполнителем, насыгг енные проводяггщм буферным раствором) мигрируют с различ-ньгми скоростями и разделяются на зоны под действием постоянного или переменного электрического поля, прикладываемого к носителю. [c.54]

А. А. Шабанов, В. И. Горшков н Г. М. Панченков [б] совместили хроматографический метод разделения смеси ионов на ионитах с электрофорезом. Такой метод был назван ими электрохроматогра-фическим. В этом методе на слой ионита в колонке накладывается электрическое поле, направление которого может совпадать или быть противоположным направлению движения зон смеси разделяемых ионов. При электрохроматографическом разделении смеси катионов зоны в колонке, в которой на выходе находится анод, тормозятся под действием электрического поля. [c.71]

Весьма перспективными методами разделения белков (как и определения ряда физико-химических свойств) оказались разные варианты метода изоэлектрического фокусировання-изотахофореза, основанные на проведении электрофореза в поддерживающих средах (на колонке или в тонком слое) с градиентом pH. Точное местоположение на колонке каждого белка из смеси определяется значением его изоэлектрической точки, т.е. состоянием, при котором суммарный электрический заряд белковой частицы при данном значении pH равен нулю. При использовании [c.31]

Смотреть страницы где упоминается термин Колонки для электрофореза: [c.48] [c.417] [c.403] [c.54] [c.140] [c.140] [c.174] [c.211] [c.243] [c.246] [c.309] [c.309] [c.79] [c.79] [c.126] [c.145] [c.10] [c.37] [c.108] [c.142] [c.220] [c.433] [c.170]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология