Бычий сывороточный альбумин молекулярный вес

Белки с определенной молекулярной массой (Да) яичный альбумин (45 000), бычий сывороточный альбумин (68 000), рибо-нуклеаза из поджелудочной железы (12 700), цитохром с (13 000). [c.107]

Для построения калибровочной кривой при определении молекулярных масс используют белки-стандарты тропонин С (18 000 Да), тропонин I (24 000 Да), тропонин Т (38 000 Да), яичный альбумин (42 000 Да) и бычий сывороточный альбумин (68 000 Да), а также стандартный набор для определения молекулярной массы белков. При электрофорезе в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия препарат миозина дает расположенную почти у старта интенсивную полосу тяжелых цепей с м. м. ок. 20 ООО Да и три слабые, но отчетливые полоски легких цепей с м. м. ок. 20 ООО Да для самой тяжелой из них и около 16 000 Да — для самой легкой. Подвижность этих полос в описанных выше условиях высока, поэтому при достаточно большой продолжительности электрофореза эти полоски могут обнаружиться почти у фронта красителя (бромфенолового синего). [c.397]

Константа седиментации для препарата бычьего сывороточного альбумина в водном растворе при 20° равна 4,29 5, коэффициент диффузии при той же температуре 6,1 10" см сек , а парциальный удельный объем 0,734 см 1г. Определите молекулярный вес этого альбумина. [c.197]

Фиг. 27. Расчет молекулярного веса бычьего сывороточного альбумина методом Ван Холда и Болдуина [8].

Наибольшей скоростью прохождения колонки обладают компоненты, не способные проникнуть в зерна гелевой фазы. Сефадексы 0-10 и 0-15 служат для фракционирования низкомолекулярных веществ, первый из них используется для веществ с молекулярным весом до 700, а второй — до 1500. Гели сефадекса 0-25 не способны поглощать, а следовательно, и задерживать перемещение по колонке веществ с молекулярным весом 3500— 4500. Этот предел для сефадекса 0-50 лежит в области значений молекулярных весов 8000—10000, а для сефадекса 0-75 эта величина достигает 40000—50000. Медленно перемещаются по колонке низкомолекулярные вещества, для которых коэффициент распределения между гелевой и жидкой фазами приближается к единице. Во многих случаях компоненты смеси при хроматографическом разделении на сефадексах следуют в порядке уменьшения их молекулярных весов. Однако наблюдается иногда и специфическое сорбционное взаимодействие разделяемых веществ с матрицей сефадекса, что влечет за собой увеличение коэффициента распределения К и снижение скорости перемещения по колонке. Так, замедление движения хроматографических зон наблюдается у основных пептидов и аминокислот в основных растворителях и кислых аминокислот и пептидов в кислых растворителях. Наблюдается также повышение степени удерживания в колонке ароматических веществ при гельфильтрации [22]. Ряд белков, таких как рибонуклеаза, лизоцим, трипсин, бычий сывороточный альбумин, в отсутствие солей также сорбируется и удерживается сефадексом при хроматографии. В связи с этим целесообразно проводить элюирование на сефадексах растворами солей или кислот. [c.202]

Иммунологи неточны и в другом они обозначают термином антиген очищенные, молекулярно гомогенные препараты (например, кристаллический бычий сывороточный альбумин), которые, будучи инъецированными, вызывают образование антител к этому веществу, и по традиции также препараты, которые представляют собой сложные смеси (например, суспензии убитых микробов) и применяются на практике для иммунизации. [c.47]

Если в уравнение (VI. 1) подставить приведенные к стандартным условиям значения з н О (гл. IV), можно рассчитать значения молекулярной массы. Рассмотрим это на примере бычьего сывороточного альбумина. Если [c.106]

Если интерференционную полосу рассматривать как кривую зависимости у от х, то этой зависимостью можно воспользоваться для графического расчета молекулярной массы по формуле (VI. 21). Эшби [8] проанализировал таким образом данные для бычьего сывороточного альбумина в буферном растворе с ОгО в следующих условиях (О = 2896,4 рад/с, V = 0,734 мл/г, р= 1,0979 г/мл и Т = 292,6 К. После измерений полученных на фотопластинке седиментационных диаграмм была построена кривая зависимости у от х (фиг. 27, Л). По наклону в разных точках этого графика получены значения ёу/йх. Наконец, была построена линейная зависимость у от у (фиг. 27, ), наклон которой был [c.118]

Ультрафильтрация обычно применяется для фракционирования макромолекул, причем большие молекулы задерживаются мембраной, тогда как небольшие молекулы (как и молекулы растворителя) должны свободно проникать через мембрану. Чтобы правильно подобрать мембрану, производители пользуются концепцией молекулярной массы отсечения или просто отсечения пропускания (см. гл. IV). Однако нужно понимать, что не только молекулярная масса определяет селективность ультрафильтрационной мембраны. Большое влияние на наблюдаемое отсечение (или в общем случае на характеристики разделения) оказывает явление концентрационной поляризации. Например, мембрана с отсечением 40 000 всегда полностью проницаема для цитохрома с (М 14400). Однако в смеси цитохрома с и бычьего сывороточного альбумина (М 67 ООО) задерживается как альбумин, так и значительная доля цитохрома с. Причина этого заключается в концентрационной поляризации. Мембрана непроницаема для молекул альбумина, которые образуют на поверхности мембраны дополнительный слой, действующий как динамическая мембрана, способная задерживать молекулы цитохрома с. Кроме того, различные типы растворенного вещества, например, глобулярные [c.294]

НАДН убихинон-оксидоредуктазный комплекс дыхательной цепи митохондрий (комплекс I — см. с. 415) катализирует реакцию окисления НАДН эндогенным убихиноном. Активность НАДН убихинон-оксидоредуктазы специфически ингибируется такими веществами, как амитал, пиерицидин, реин и ротенон. Последний ингибитор наиболее широко применяется при изучении переноса электронов в дыхательной цепи и молекулярной организации комплекса I. Ротенон обладает сильно выраженными гидрофобными свойствами и способен помимо НАДН убихинон-оксидоредуктазы взаимодействовать с гидрофобными участками многих белков, в частности бычьего сывороточного альбумина, и фосфолипидными мембранами. [c.441]

Ограниченная диффузия возникает, если молекулярная диффузия в порах матрицы затруднена из-за экранирования подхода макромолекул к прикрепленному аффинному лиганду. Экспериментально вклад этой диффузии можно определить с большим трудом, но для аффинной хроматографии на очень пористых носителях эти трудности становятся минимальными. На практике для достижения равновесных условий желательно, чтобы скорость потока была по возможности низкой. Например, при скорости потока 400 мл/ч для выделения стафилококковой нуклеазы на колонке объемом 20 мл небольшие количества нуклеазы появлялись в первом пике вместе с белковыми примесями, особенно если общая концентрация белков в образце была высока (20—30 мг/мл) [5]. Однако даже при такой высокой скорости потока нуклеаза полностью сорбировалась, если наносился менее концентрированный образец. Зависимость связывания лактатдегидрогеназы на №-(6-аминогексил)-5 -АМР — сефарозе от скорости потока пссле-дована Лоу и др. [21]. Было найдено, что увеличение скорости потока относительно мало влияет на сорбцию. При высоких скоростях потока эффективность колонки (ВЭТТ), а также связываемость р уменьшаются. Влияние скорости потока более заметно в небольших колонках, с которых часть белка с ферментативной активностью элюируется со свободным объемом. Влияния концентрации инертного белка (бычьего сывороточного альбумина) при высоких скоростях потока (67 мл/ч) также не обнаружено. [c.84]

Процесс установления равновесия иногда занимает день или больше. Поскольку при таких больших сроках возможны денатурация или бактериальное загрязнение, искажающие результаты эксперимента, разработан ряд приемов, позволяющих ускорить установление равновесия. Длительность этого процесса прямо пропорциональна квадрату высоты столба жидкости. Если оиа равна 1—3 мм, процесс установления равновесия длится в течение нескольких часов. Для ячеек с высотой столба жидкости 0,8 мм это время при седиментации сахарозы, рибонуклеазы и бычьего сывороточного альбумина равно соответственно 15, 45 и 70 мин. Однако при таких размерах снижается точность и чувствительность к гетерогенности, хотя в этом случае можно работать при больших угловых скоростях. С помощью многоканальных ячеек производится одновременное определение нескольких концентраций при одинаковой температуре. К уменьшению времени достижения равновесия приводит также такой режим вращения ротора, при котором начальное значение скорости выбирается несколько завышенным и затем постепенно снижается. Концентрацию можно измерять с помощью интерференционного метода Релея, а молекулярный вес рассчитывать, используя значение градиента концентрации в точке перегиба (т. е. средней точке на фиг. 35, Л). Для обеспечения постоянства скорости, необходимого в некоторых экспериментах по седиментационному равновесию, лучше всего использовать магнитную подвеску стального р тора в высоком вакууме. В этих условиях скорость уменьшается всего на 1 об1мин за сутки. [c.194]

Рис. 122. Электрофорез кристаллического бычьего сывороточного альбумина в диэтилбарбитуратном буферном растворе при ионной силе 0,10 и рН=8,6. Молекулярный заряд при таком рН —25

Пределы размеров молекул, исключаемых из этих гелей, были определены в опытах с большим числом различных белков (цитохром с, а-химотрип-сипогеп, карбоангидраза, яичный альбумин, бычий сывороточный альбумин, альдолаза) и отнесены к молекулярному весу гипотетического белка, подвижность которого (Л/) равнялась бы 0,9. Согласно обш ему определению подвижности, [c.136]

Щелочные боросиликатные стекла можно выщелочить кислотой и щелочью и получить системы с очень однородными по размеру порами в диапазоне 170—2500 А [2196, 219в]. Благодаря узким распределениям по размерам пор пористые частицы стекол обладают уникальными свойствами, позволяющими проводить исследование самого механизма гель-проникающей хроматографии [230], а такн е проводить фракционирование конкретных систем. Обычно можно применять смеси стекол различной степени пористости. На пористых стеклах были проведены разделения искусственных смесей вирусов растений и бычьего сывороточного альбумина [230 а], а также фракционирование образцов полистирола и нолиизобутилена молекулярного веса 10 000-3 400 ООО [2306]. [c.137]

Для этого белка (бычий сывороточный альбумин) вычисления дают молекулярную массу около 68 000. Если значения производных d jdx и d jdx (по отношению к базальной линии растворителя) определять из шлирен-диаграммы при радиальном расстоянии х, близком к середине ячейки, то уравнение будет давать значение молекулярной массы, относящееся к исходной концентрации вещества (уравнения (VI. 8) — (VI. 10)), если при этом предполагать, что примесь тяжелого агрегированного материала незначительна. [c.238]

Мур и Вард [163] изучали реакцию малеимидов с растворимым белком — бычьим сывороточным альбумином — и показали, что взаимодействие с дималеимидом приводит к постепенному увеличению молекулярного веса белка (определено методом ультрацентрифугирования). [c.414]

Важно отметить, что при измерениях параметров белковой молекулы различными способами, основанными на измерениях поступательной диффузии, характеристической вязкости, двойного лучепреломления в потоке и электрическом поле, электрофоретической подвижности, светорассеяния, осмотического давления, рентгеноструктурного анализа влажных и сухих кристаллов и др., значения молекулярных масс не дают такого существенного расхождения (для бычьего сывороточного альбумина 66000 -i- 83000), как получа Рис. 9.11. Влияние pH па разме- емые значения для отношения осей (а/Ь =1- 4 ры конфигурации молекул бы- в нейтральных растворах и в кристаллах). Столь чьего сывороточного альбумина большие расхождения неудивительны, поскольку в 0,15 М Na l. а и Ь — оси экви- вычисления основаны на предположении, что мо-валентного эллипсоида вращения лекулы белка ЯВЛЯЮТСЯ эллипсоидами вращения. [52]. Данные получены методом из- Наиболее надежно соотношения осей характери- [c.550]

Лimln может быть рассчитана подобным же образом, исходя из содержания остатков аминокислот, присутствующих в белке в небольших количествах. Например, бычий сывороточный альбумин содержит 0,58 % триптофана (молекулярная масса триптофана 204,23). Отсюда для этого белка равна 35 200, что составляет около половины действительной молекулярпой массы, равной 69 000. Часто, однако, молекулы белков вообще не содержат таких редких атомов пли аминокислотных остатков, которые можно было бы использовать для определения молекулярной массы. В этом случае целесообразно применение физических методов. [c.133]

Глиадины относятся к белкам с наименьшими зарядами в самом деле, они содержат только от 6 до 11 основных остатков на молекулу (лизин, гистидин, аргинин). С другой стороны, приблизительно от 85 до 95 % остатков глутаминовой и аспарагиновой кислот находятся в форме амидов (глутамин, аспарагин) (например, [73]). На молекулу приходится только 8—9 свободных карбоксильных групп. Для сравнения, сывороточный бычий альбумин с молекулярной массой, близкой к молекулярной массе ы-глиадинов, содержит 95 основных групп и 92 свободные карбоксильные группы на молекулу [116]. [c.186]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология