Лизин хроматография

Быстрое количественное определение аргинина, гистидина и лизина хроматографией на бумаге, пропитанной ионообменными смолами [1026]. [c.247]

Качественное определение аминокислот методом распределительной хроматографии на бумаге. Цель работы — определить коэффициент движения лизина и метионина для индивидуальных веществ и для их смеси (с целью разделения их на хроматограмме). [c.528]

Высокий процент в большинстве белков лизина и аргинина приводит при гидролизе трипсином к появлению сравнительно большого числа относительно мелких пептидов. Их анализируют методом пептидных карт на бумаге или в тонком слое, а также с помощью хроматографии на колонках и электрофорезом. [c.140]

Вопросу анализа аминокислот методом хроматографии на бумаге посвящено большое число работ советских и иностранных авторов. Однако почти все они связаны с разделением аминокислот белков и других биологических препаратов [61. Наша попытка применить их для анализа мелассы не дала положительных результатов, что можно объяснить мешающим действием остальных компонентов мелассы, ио отношению к которым содержание отдельных аминокислот составляет лишь 0,1—3 вес. %. Описанный в литературе метод 17, 81, состоящий в сорбции аминокислот на катионите с последующей их элюцией и идентификацией на бумаге неудобен, так как требует сложной специальной аппаратуры и чрезмерно длителен. Первой частью нашего исследования было хроматографическое разделение искусственной смеси из десяти аминокислот, приблизительно имитирующей аминокислотный состав мелассы [1, 81. Смесь включала лизин, аргинин, серии, глицин, аспарагиновую и глютаминовую кислоты, а-аланин, валин, метионин и лейцин. Растворы аминокислот готовили в 15%-ном этиловом спирте с концентрацией 0,5—1 у аминокислоты в 1 мкл. [c.212]

Высокоочищенные препараты лизина получают после фракционирования фильтрата культуральной жидкости методом ионообменной хроматографии на катионите. С этой целью лизин переводят в форму катиона [c.46]

При синтезе меченого лизина выход в расчете на вступивший в реакцию цианид-С составлял 21 или 38%. При помощи двухмерной бумажной хроматографии в продуктах реакции не было обнаружено 2-аминоадипиновой кислоты. [c.311]

Полный кислотный гидролиз ДИФ-пептида приводит к желтому ДНФ-производному Л -концевого остатка вместе со свободными аминокислотами и аминокислотами, меченными только в боковую цепь, такими продуктами как е-ДНФ-лизин и 0-ДНФ-тирозин. За исключением а-ДНФ-аргинина, сс-ДНФ- (или бис-ДИФ)производные Л -концевого остатка можно экстрагировать из подкисленного водного раствора подходящим органическим растворителем, например этилацетатом, и идентифицировать с помощью тонкослойной хроматографии. [c.266]

Ди-ДНФ-тирозин и ди-ДНФ-лизин, которые не разделяются приведенными выше системами, можно отчетливо определить методом проточной хроматографии [13] со смесью № 5. [c.420]

Фирма IBF рекомендует следующие стандартные условия для такой посадки. Активированный гель уравновешивают 0,5 М фосфатным буфером (pH 7,6) и вносят в раствор белка в том же буфере из расчета 5—10 мг белка на 1 мл геля. Можно использовать и другие-буферы, не содержащие первичных аминов, с pH в интервале 6,9— 8,5. Инкубацию проводят с перемешиванием при 4 в течение 18 ч. Если биологическая устойчивость лиганда это допускает, инкубацию можно вести и при комнатной температуре, сократив ее продолжительность. Излишек лиганда отмывают на фильтре 8—10 объеигами того же буфера. Затем осуществляют блокировку незанятых активных групп 0,1 М раствором забуференного (pH 7,5—8,5) этаноламина в течение 3 ч при 4° можно пспользовать также растворы Триса, глицина, /) у-лизина и др. Гель снова промывают 8—10 объемами того же буфера с добавлением до 0,15 М Na l, потом уравновешивают буфером для аффинной хроматографии и хранят в суспензии на холоду с добавкой 0,02% мертиолата или азида натрия. [c.381]

Наши исследования (совместно с М. Ф. Шаховой) методами хроматографии и спектрофотометрии выявили в моркови следующие биологически активные вещества каротиноиды — а- и -каротин, ликопин, полицис-ликопин, флавоксантин и тараксантин аминокислоты — лизин, орнитин, гистидин, цистеин, аспарагин, серин, треонин, пролин, метионин, тирозин, лейцин витамины группы В (холин, бетаин). [c.398]

Аналогичным образом, исходя из медной соли /(- -)-лизина, получен солянокислый /-5-уреидо-С -норлейцин (солянокислый С] -/-гомоцитруллин). При проведении реакции с исходными количествами веществ порядка 1 жмоля выход в расчете на мочевину составляет 60% т. пл. 177 178°. При бумажной хроматографии в системе фенол—вода (80 20) обнаружено одно нингидриновое пятно 0,73. [c.224]

Смесь 0,500 г этилового эфира 2-ацетамндо-2-карбэтокси-5-циан-С -5-оксивалериановой кислоты и 5 мл уксусного ангидрида кипятят с обратным холодильником в течение 1,5 часа. Затем смесь гидрируют в течение 24 час. при комнатной температуре в присутствии катализатора Адамса при давлении водорода 100 ат. Полученную смесь фильтруют, испаряют в вакууме растворитель, а оставшееся маслянистое вещество гидролизуют, нагревая его с 25 мл 6 н. соляной кислоты в течение 15 час. с обратным холодильником. Продукт реакции очищают при помощи хроматографии, как это описано при синтезе 5-оксили-зина-б-С . Выход двусолянокислой соли лизина-б-С " 0,130 г (36%). Полученную соль можно превратить в моносолянокислую соль лизина по способу, описанному выше. [c.310]

Окуда и Хори [116] выделяли лигнин спиртовым раствором едкого натра по Филиппсу (см. Брауне, 1952, стр. 108) из рисовой и пшеничной соломы, сосновой хвои, листьев дуба и японского кедра. Лигнины содержали 2,6, 0,69, 0,35, 0,67 и 0,28% азота соответственно. Гидролиз лигнинов 6 н. соляной кислотой в течение 24 ч и хроматография на бумаге гидролизатов показали присутствие аргинина, лизина, гистидина, фенилаланина, серина, треонина, лейцина, валина, глицина, аланина, пролива, глютаминовой и аспарагиновой кислот. Гидролизат лигнина из рисовой соломы содержал также метионин. [c.120]

Диколхицидил- Ь -лизин очищали трехкратным переосаждением из бикарбонатного раствора. Для анализов и приготовления натриевой соли, кроме того, его очищали хроматографией ( / 0 , активность П), вымывая примесь смесью хлороформ-спирт (95 5). Примесь на тонкослойной хроматограмме ( 0 , тот же растворитель) показала около 0.7. Окись алюминия обрабатьгоали 1-2 МаИСО , Диколхицидил-// "ЛИЗИН осаждали подкислением. Он легко растворим в спиртах и хлороформе, несколько трудней в ацетоне и диоксане, трудно в этилацетате, не растворим в эфире, бензоле, диоксане и воде. [c.253]

Р) Частичный гидролиз ДНФ-нротеина. Частичный гидролиз ДНФ-нротеина можно осуществить обычным способом, используя соляную кислоту или ферменты, причем гидролиз протекает значительно медленнее, чем в случае природных веществ. Гидролиз позволяет получить ряд важных аналитических данных. При электрофоретической или хроматографической очистке продуктов гидролиза уже по их собственной окраске обнаруживаются интересные концевые N-групны, благодаря чему, применяя двумерную хроматографию, их можно легко и точно элюировать. Разумеется, и не концевые пептидные осколки, содержащие, например, лизин, окрашиваются в желтый цвет за счет своего 8-ДНФ-остатка. В то время как отделение ДНФ-пептидов от свободных пептидов и аминокислот можно осуществить без труда (подкисленный соляной кислотой тальк адсорбирует только ДНФ-соединения [см. пункт S)]), экстракция N-концевых а-ДНФ-пептидов из кислого раствора органическими растворителями не обеспечивает достаточного отделения от не концевых ДНФ-пептидов, которые благодаря наличию уних свободных NHj-rpynn должны оставаться в водной фазе [164]. [c.415]

Известен также метод пептидных карт, позволяющий устанавливать незначительные различия в первичной структуре родственных Б. Для этого Б. частично гидролизуют специфич. протеолитич. ферментами (особенно удобен трипсин, разрывающий пептидные связи у карбонильных п)упп остатков лизина и аргинина), затем пептиды каждого Б pa дeляют электрофорезом и распределительной хроматографией При сравнении полученных пептидных карт различных Б оказывается, что все идентичные пептиды располагаются в определенных (одних и тех же) местах, за исключением пептидов, по к-рым Б отличаются друг от друга Этим методом впервые обнаружено, что при замене одного остатка глутаминовой к-ты в молекуле гемоглобина на остаток валина образуется серповидноклеточный гемоглобин, встречающийся при одном из видов анемии. Методом пептидных карт изучают генетич. аспекты эвотюционных изменений Б. и выявляют изменения Б. при различных заболеваниях. [c.121]

Разделительный эффект в двумерных опытах. Для надежной идентификации ДНФ-производных, принадлежащих к относительно большой группе нерастворимых в кислоте и экстрагируемых эфиром ДНФ-аминокислот, как правило, требуется двумерная хроматография. Для этого в первом направлении мы применяем толуол -систему Бизерте и Остё [45] (система № 1), а во втором направлении — системы № 2—5 на выбор. На рис. 165 показано разделение стандартной смеси по 2 (хз ДНФ-аминокислот при комбинации растворителей № 1 и 2. Не делятся группа лейцина, руппа валина, ди-ДНФ-лизин и ди-ДНФ-тирозин. [c.420]

Относительную чувствительность аминокислотных остатков в инсулине к "[-излучению исследовали Дрейк и его сотрудники [69]. Как указывалось ранее, интенсивное исследование инсулина особенно желательно, поскольку он является единственным белком, строение которого полностью известно. На основании результатов определений концевых групп, изучения спектров поглощения и хроматографии аминокислот на бумаге в образцах, подвергнутых облучению дозами до 40 мегафэр, были сделаны выводы 1) что цистин, тирозин, фенилаланин, пролин и гистидин обладают высокой радиочувствительностью 2) что лейцин, изолейцин, валин, лизин и аргинин заметно разрушаются при наиболее высоких дозах и 3) глицин и фенилаланин, Н-концевые аминокислоты (т. е. имеющие свободные а-аминогруппы) дезаминируются. [c.227]

Как уже отмечалось, иониты на основе целлюлозы и декстрана не обладают необходимыми механическими и ионообменными свойствами и вследствие этого их редко используют для хроматографического разделения аминокислот. Карбоксиметилцеллюлозу применяли для отделения лизина от его олигомеров и полимеров [26]. Известны попытки модификации DEAE-и QAE-сефадексов путем введения дополнительных поперечных связей и применения их для разделения цистеина и глутатиона [27]. Использование дауэкса 1-Х8 и сефадекса G-10 означает переход от ионообменной хроматографии к гелевой [28]. [c.334]

В гидролизатах коллагена и эластина содержатся десмозин и изодесмозин их разделяли в модифицированных условиях по одноколоночной [59, 60], а также по двухколоночной схемам анализа [61, 62]. Множество работ посвящено хроматографии серусодержащих аминокислот. Определены объемы выхода производных цистеина [63] и цистина, полученных после модификации белков и последующего гидролиза [64]. Найдены условия разделения производных лизина, полученных при модификации нативного белка, а также разработаны условия ускоренного анализа этих соединений [65, 66]. Метилгистидин и некоторые редкие аминокислоты разделяли на 15-сантиметровой колонке [67]. При снижении скорости потока в реакторе вдвое было достигнуто 10—20-кратное увеличение чувствительности при определении N-метиламинокислот, которые разделяли в специально разработанных условиях [68]. Триптофан и его производные разделяли на амберлите G-50 [69]. [c.349]

Ионообменную хроматографию можно применять для разделения водорастворимых ДНФ-аминокислот. Хейнрих и Бугна [12] проводили разделение на термостатированной (50 °С) колонке (длиной 15—20 см) с катионитом амберлит ШС-50 (Bio-Rex 70 Na+ —400 меш), элюируя стандартным буферным раствором (pH 5), предназначенным для работы на анализаторе аминокислот Te hni on, со скоростью 0,5 мл/мин. Оптическую плотность элюата регистрировали при К 360 нм на проточном денситометре. ДНФ-аминокислоты появлялись на выходе колонки (через 30 мин — 1 ч) в следующем порядке ос-ДНФ-ли-зин, 8-ДНФ-лизин, ДНФ-аргинин, ди-ДНФ-гистидин, ДНФ-трип-тамин, ди-ДНФ-лизин. При использовании анализатора Te hni on нижний предел определения составляет 0,01—0,05 мкмоля. [c.365]

Другим аналогичным сорбентом, фиксированным на кизельгуре, является поли-L-лизин [55]. При хроматографии на ПЛК нуклеиновых кислот (рис. 38.8) и препарата ДНК, (рис. 38.9) из Ba illus subtilis было получено воспроизводимое деление на фракции, различающиеся по нуклеотидному составу [55, 56]. Разрушение ДНК ультразвуком или тепловая денатурация практически не оказывали влияния на профиль элюирования (табл. 38.4). Хроматографию на ПЛК использовали для отделения ДНК плазмы от ДНК хромосом [89]. Тем не менее этот метод пока находит ограниченное применение. В еще большей степени это относится к другим белковым сорбентам, в частности гистонам [90—93] и протаминам (94], фиксированным на кизельгуре или иммобилизованным на целлюлозе. [c.77]

Разработан общий метод разделения антибиотиков группы стрептотрицина, заключающийся в хроматографировании на СМ-целлюлозе в градиенте концентраций хлорида натрия [47]. Этим методом было показано, что все антибиотики данной группы представляют собой смеси из шести стрептотрицинов, которые отличаются между собой числом остатков L-p-лизина. Стрептотрицины разделяли также на СМ-целлюлозе в пиридинацетатном буферном растворе и методом гель-хроматографии на сефадексе LH-20 [48, 49]. Таким путем было показано, что раце-момицины А, С, В и D идентичны стрептотрицинам F, Е, D и С [c.219]

Гель-фильтрацию на сефадексе сразу же после появления этого метода стали использовать для выделения пептидных гормонов из гипофиза. На фиг. 25 был приведен классический пример — выделение окситоцина и вазопрессина из задней доли гипофиза с помощью комплексообразования [29]. По-видимому, для разложения белковых ассоциатов совсем не обязательно применять 70%-ную муравьиную кислоту для этих целей, очевидно, вполне достаточна 0,1 М кислота [30, 31]. Лизин-вазопрессин образует димер, который может быть отделен от высших полимеров хроматографией на сефадексе 0-25 (2,2x200 см) в 1 М уксусной кислоте [32]. При обработке окситоцина 80%-ным ацетоном получают новый неактивный продукт (вероятно, изопропилиденовое производное), который можно очистить распределительной хроматографией на сефадексе 0-25 в одной из систем растворителей, указ [й-ных для окситоцина в табл. 29 [33]. Окситоциназа околоплодных вод отщепляет от гормона по меньшей [c.215]

Для хроматографии рибосомальной РНК и для выделения плазминогена ]1роизводится лизин—сефароза 4В путем связывания ь-лизина с сефарозой 4В после активации бромцианом. Концентрация связанного лизина составляет 4—5 мкмоль на 1 мл набухшего геля. Лизин—сефароза 4В поставляется в виде лио-филизованного норощка пакетах по 15 г, что эквивалентно 60 мл набухшего геля. Порошок содержит добавки для сохранения способности геля к набуханию. При хранении сухого геля при температурах <8°С не наблюдается никакой заметной потери связанного лиганда даже через 1 год хранения. [c.141]

Описано влияние витамина Ве на аминокислоты у пациентов, страдающих детской пеллагрой (Квашиоркор) [65]. В моче больных, страдающих псориазом, определено 27 аминокислот и других нингидрин-положительных соединений [66]. Выделение аминокислот во время беременности исследовали Армстронг и Яте [67] они установили, что количество треонина было увеличено в три раза, количество выделявшегося таурина увеличивалось ежедневно вплоть до восьми недель, а уровень содержания мочевины и этаноламина оставался без изменений. Позднее Браун [68] опубликовал данные по изучению аминоацидурий. Повышенное содержание цистина, орнитина, аргинина и лизина наблюдали тогда, когда раковым больным прописывали циклолейцин. Определялся почечный клиренс свободных аминокислот у подростков с помощью ускоренного метода хроматографии [c.10]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология