Аргинин количественное определение

В настоящее время хорошо изучены реакции декарбоксилирования бактериями аспарагиновой, глютаминовой кислоты, тирозина, лизина, чис-тидина, аргинина и орнитина. Эти реакции нашли практическое применение для количественного определения соответствующих аминокислот. [c.335]

Количественное определение аргинина по Сакагучи [138] [c.129]

Быстрое количественное определение аргинина, гистидина и лизина хроматографией на бумаге, пропитанной ионообменными смолами [1026]. [c.247]

В настоящее время широко распространен достаточно точный нингидриновый метод определения аминокислот при помощи хроматографического разделения на бумаге. Однако разделение некоторых аминокислот обычной хроматографией на бумаге требует большой затраты времени например, для разделения основных аминокислот, необходимо минимум 4— 5 суток. Применение электрофоретического разделения позволило сократить время разделения лизина, аргинина и гистидина до 3 часов и за счет этого сократить общее время, необходимое для количественного анализа этих аминокислот, с 5—б дней до 6—7 часов. [c.254]

Подлежащий исследованию гидролизат обрабатывается фосфорновольфрамовой кислотой, которая осаждает количественно аминокислоты аргинин, гистидин, лизин и небольшое количество цистина. Все остальные аминокислоты, в том числе и те, которые могут служить помехой при количественном определении гистидина с помощью реакции диазотирования, остаются в растворе. Осадок тщательно промывается, гистидин и сопровождающие его аминокислоты переводятся в раствор, в котором гистидин определяется количественно с помощью колориметрического метода, основанного на реакции Паули. [c.46]

Белки дают ряд цветных реакций, обусловленных наличием определенных аминокислотных остатков нли общих химических группировок. Эти реакции широко используются для аналитических целей. Среди них широко известны нингидриновая реакция, позволяющая проводить количественное определение аминогрупп в белках, пептидах и аминокислотах, а также биуретовая реакция, применяемая для качественного и количественного определения белков и пептидов. (При нагревании белка или пептида, но не аминокислоты, с Си 01 в щелочном растворе образуется окрашенное в фиолетовый цвет комплексное соединение меди, количество которого можно определить спектрофотометрически.) Цветные реакции на отдельные аминокислоты используются для обнаружения пептидов, содержащих соответствующие аминокислотные остатки. Для идентификации гуанидиновой группы аргинина применяется реакция Сакагучи — при взаимодействии с а-нафтолом и гипохлоритом натрия гуанидины в щелочной среде дают красное окрашивание. Индольное кольцо триптофана может быть обнаружено реакцией Эрлиха — красно-фиолетовое окрашивание при реакции с п-диме-тиламинобенэальдегидом в Н 804. Реакция Паули позволяет выявить остатки гистидина и тирозина, которые в щелочных растворах реагируют с диазобеизолсульфокислотой, образуя производные, окрашенные в красный цвет. [c.32]

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АРГИНИНА, [c.254]

Этот метод с последующим качественным и количественным определением аминокислот особенно ценен при промышленном получении индивидуальных аминокислот лизина, гистидина и аргинина, так как дает возможность быстро контролировать надежность их разделения и отсутствие в каждой из индивидуальных аминокислот примесей других аминокислот. [c.254]

Нами разработана методика количественного определения аргинина, лизина и гистидина в основной фракции белкового гидролизата и аргинина в полном белковом гидролизате при помощи электрофореза на бумаге. Воспроизводимость определений 5%. [c.256]

Для количественного определения аргинина и лизина можно использовать окись алюминия (Виланд, 1942). [c.122]

Группа основных аминокислот (гистидин, лизин, аргинин), кислых аминокислот (глютаминовая и аспарагиновая кислоты), а также фенилаланин могут быть определены путем де-карбоксилирования специфическими энзима-м и (обычно бактериальными) с последующим количественным определением образующегося углекислого газа. [c.42]

Гидролиз белков кислотой обычно сопровождается разрушением (в результате окисления) большей части триптофана, окислением цистеина в цистин и некоторым распадом серина и треонина. Щелочной гидролиз имеет то преимущество перед кислотным, что триптофан в этих условиях более стабилен. Однако при щелочном гидролизе имеет место интенсивный распад серина, треонина, цистина, цистеина и аргинина. Кроме того, при щелочном гидролизе наблюдается рацемизация природных аминокислот. Гидролиз белка как кислотой, так и щелочью сопровождается дезамидированием глутамина и аспарагина. Эти амиды аминокислот и триптофан можно выделить из гидролизатов, полученных при помощи протеолитических ферментов. Однако ферментативный метод также страдает определенными недостатками в частности, гидролиз может быть неполным и сам фермент может распадаться с освобождением аминокислот. Выделение аминокислот из белков и получение их с количественным выходом представляет очень сложную задачу, которой занимались многие исследователи. Эта обширная область всесторонне рассмотрена в монографии Блока и Боллинг [98]. [c.24]

Снелл (1946) разработал микробиологический метод количественного определения состава аминокислот. Различные микроорганизмы требуют для своего роста определенные аминокислоты, и скорость роста на среде, содержащей достаточное количество всех аминокислот, кроме одной, может служить показателем количества этого компонента в испытуемой смеси. Так, содержание аргинина в гидролизате может быть определено по влиянию этого гидролизата на рост La toba illus asei количество аргинина определяют, сравнивая исследуемую пробу со стандартными образцами, содержащими различные концентрации аргинина. [c.655]

Определение сахаров в гликонротеине нуждается в подходе, несколько отличающемся от того, который используется при анализе аминокислотного состава белков. Во-первых, все методики количественного определения данного сахара требуют освобонедения моносахарида из его глпкозида либо в отдельной предварительной стадии, либо в общей части используемой аналитической процедуры. Это объясняется тем фактом, что, вообще говоря, единственными функциональными группами, присутствующими в углеводной части гликопротеинов и обнаруживаемыми физическими или химическими методами до гидролиза, являются гидроксильные группы, общие для всех типов сахаров. Конечно, имеются также карбоксильные группы сиаловых кислот, обусловливающие сильно кислотный характер гликопротеинов, содержащих остатки сиаловых кислот. С другой стороны, боковые цепи аминокислотных остатков обычно свободны, сильно отличаются по структуре и реакционной способности и многие из них могут быть обнаружены и определены количественно физическими или химическими методами. Так, измерение поглощения в ультрафиолете применяется для определения тирозина и триптофана с помощью специальных методик можно отличить цистеин от цистина, а аргинин и гистидин можно определить колориметрическими методами, причем все это выполняется на интактном белке. [c.195]

История вопроса. Применение электрофореза для отделения диаминокислот от других компонентов белкового гидролизата было опубликовано еще в 1912 г. (японский патент). Однако использование этого метода как предварительного при количественном определении аргинина, гистидина и лизина было, повидимому, введено только Куном и Дэнюэлем [393] в 1937 г. [c.42]

При действии гипохлорита или гипобромита натрия а-нафтол конденсируется с метилгуанидином, агматином, гликоцнамином, аркаином и аргинином с образованием красноокрашенных пигментов. В белках аргинин — единственная аминокислота, дающая эту реакцию, и поэтому она может применяться для качественного и количественного определения аргинина в белках. Аммиак, гистидин, тирозин и триптофан могут мешать определению. [c.163]

Образование и распространение бактериальных декарбоксилаз лизина, орнитина, тирозина, гистидина, аргинина и глутаминовой кислоты изучены довольно подробно исследована также кинетика реакций, катализируемых декарбоксилазами, и описана частичная очистка некоторых из- них. Эти исследования позволили использовать аминокислотные декарбоксилазы для целей количественного определения аминокислот. Такие определения основаны на измерении количества углекислоты, выделяющейся при действии специфической декарбоксилазы [197], или количества образующегося амина [228]. Поскольку аминокислотные декарбоксилазы обладают строгой стереоспецифичностью, они применяются также для обнаружения примеси следов L-изомеров в препаратах D-аминокислот. Кроме того, эти ферменты применяют и для получения D-аминокислот (например, D-лизина или D-глутаминовой кислоты) путем избирательного разрушения L-изомера в рацемических препаратах аминокислот (стр. 94, 95). [c.206]

В 1971 г. Герке с сотр. [135] предложил новую двухколоночную систему, позволившую устранить применение расчетного метода при количественном определении гистидина. В этой системе одна колонка была заполнена сорбентом с 0,65% этиленгликольадипата на хромосорбе W, другая — сорбентом со смесью силиконовых НЖФ (2% ОУ-17 и 1% ОУ-210) на супелкорте [135]. На сорбенте со смесью силиконовых НЖФ бутиловые эфиры N-ТФАпроизводных гистидина, аргинина, триптофана и цистина разделялись полностью. Для производных этих аминокислот была получена линейная зависимость отношения площади пика аминокисло- [c.71]

ЦИММЕРМАНА РЕАКЦИЯ — цветная реакция о-фталевого альдегида с аминокислотами, проводимая в щелочной среде с последующим подкнсленпем. Реакцию дают глицин, аланин, аспарагин, аргинин, цистин, триптофан и аммонийные соли. Окрашивание варьирует от красного до фиолетового окрашенные продукты, образующиеся из глицина и триптофана и с солями аммонпя, извлекаются хлороформом, продукты реакции др. аминокислот в хлороформ не переходят. Реакция используется для количественного определения глищша, гл. обр. после выделения его из смеси аминокислот бумажной илп колоночной хроматографией, а также для выявления пятен гл1щина на бумажных хроматограммах и обнаружения солей аммония. Предложена В. Циммерманом в 1930. [c.430]

Наряду с соответствующими производными ряда простых аминокислот получены также -( -метоксифенилазо)-бензил-оксикарбонильные производные ь-аргинина (ацилирование в смеси едкого натра с бикарбонатом натрия), р-метилового эфира ь-аспарагиновой кислоты, у-метилового эфира ь-глутамино-вой кислоты и Ы -бензил-г-гистидина [2037]. Ы -Защищенный лизин синтезирован через медный комплекс, а соответствующий метиловый эфир получен с помощью Ы-карбоксиангидрида, приготовленного из Ы -защищенного лизина и фосгена [2033]. Благодаря окраске, присущей такого рода Ы-защищенным аминокислотам и пептидам, оказывается возможным их непосредственное обнаружение и количественное определение при [c.63]

При оценке результатов, полученных при помощи всех описанных выше реакций, можно прийти к заключению, что, по крайней мере, часть гидроксилов оксиаминокислот, имидазольных колец гистидина и гуанидиновых группировок аргинина находится в белках в виде свободных реактивных групп. Количественные определения показали, однако, что в нативных белках не все свободные группы являются реактивными. Значительное количество этих групп скрыто между складками пептидных цепей и вследствие этого недоступно для воздействия различных реактивов. При денатурации белков и выпрямлении пептидных цепей ранее скрытые реакционноспособные группировки становятся доступными для реакций замещения (см. стр. 149). [c.129]

Применение динитрофенильных производных, введенных в практику Зангером [25] с целью идентификации и количественного определения концевых аминогрупп, позволяет получить ценные сведения о количестве открытых цепей в белке. Кроме того, такие меченые аминокислоты служат в качестве реперных точек при исследовании неполного гидролиза (1346). В этом отношении полезными являются также е -аминогруппы лизина. Путем неполного гидролиза, осуществляемого с помощью кислоты и различных типов ферментов, оказалось возможным разрывать длинные полипептидные цепи в различных точках и путем анализа установить единственно возможную конфигурацию. Этим способом Зангер и Таппи[99]и Зангер и Томпсон [100] определили порядок чередования аминокислот в двух типах цепей, входящих в состав инсулина (табл. 27). Такой подход к проблеме структуры белка был облегчен широким применением новейших микрометодов хроматографии на бумаге и силикагеле и ионофореза. Таким образом, оказывается, что одна из крупнейших проблем химии белка поддается изучению с помощью весьма простых и экономичных методов. Цепи в инсулине имеют различную длину, причем цепь с N-концевым фенилаланином (цепь В) состоит из 30 остатков, а соответствующая глициновая цепь (цепь А) — из 21 остатка. Порядок чередования аминокислот и их содержание даны в табл. 27. Можно отметить следующее. Цепь А не содержит лизина, гистидина, аргинина, треонина, фенилаланина и пролина все эти компоненты входят в состав цепи В, в которой, в свою очередь, совсем нет изолейцина. Не наблюдается ни регулярного чередования аминокислот, ни тенденции к чередованию полярных и неполярных групп. Три ароматические аминокислоты (фен.фен.тир.) расположены последовательно, и два остатка глутаминовой кислоты связаны с двумя остатками ци-стеина (глу.глу.цис.цис.). В обеих цепях содержится шесть цистеиновых остатков, четыре из которых расположены врозь, а только что упомянутые два — рядом друг с другом в молекуле нативного белка все они существуют в форме цистина, но какие из них расположены между пептидными цепями, а какие в самих пептидных цепях — неизвестно. Часть дикарбоновых кислот присутствует в виде амидов — четыре в цепи А и две в цепи В. [c.255]

Определение качественного и количественного аминокислотного состава белков и пептидов проводят после их гидролиза кислотой или щелочью. Оба вида гидролиза разрушают некоторые аминокислоты. При щелочном гидролизе частично разрушаются цистеин, серии, треонин и происходит частичная рацемизация некоторых аминокислот. При гидролизе соляной кислотой (5,7 н., 105—110° С), которая обычно используется при кислотном гидролизе пептидных связей, практически полностью разрушается триптофан. В связи с этим содержание триптофана в пробах обычно определяют после щелочного гидролиза или спектрофотометрическим методом Кроме того, наблюдаются значительные потери оксиаминокислот (серина, треонина, тирозина), се-русодержащих аминокислот (цистеина, метионина) и частично пролива. При этом степень разрушения аминокислот зависит от чистоты и концентрации НС1, используемой для гидролиза, а также длительности и температуры гидролиза. Следует отметить, что примеси альдегидов при кислотном гидролизе приводят к значительной потере тирозина, а также цистеина, гистидина, глутаминовой кислоты и лизина, а примеси углеводов в больших концентрациях — к разрушению аргинина. [c.123]

В учебниках биохимии обычно приводятся различные цветные реакции на белки. Большинство этих реакций свойственно отдельным аминокислотам и будет рассмотрено в гл. III. Фенольное ядро тирозина дает желтую окраску с азотной кислотой (ксанто-протеиновая реакция), красное окрашивание — с реактивом Миллона, диазореакцию и голубую окраску — с щелочными растворами фосфомолибдата. Цветные реакции, получаемые при взаимодействии белков с альдегидами, например с диметилами-нобензальдегидом (Эрлих) или с глиоксалевой кислотой (Гоп-кинс — Коле), обусловлены присутствием в молекуле белка триптофана красное окрашивание с гипохлоритом и о -нафтолом — присутствием аргинина (Сакагуши) темное окрашивание при нагревании растворов белков с щелочным раствором уксуснокислого свинца дают белки, содержащие в своей молекуле остаток цистина или цистеина. Неоднократно пытались использовать эти реакции для количественного колориметрического определения белков. Однако ясно, что интенсивность этих реакций варьирует от белка к белку и зависит от процентного состава соответствующей аминокислоты в молекуле белка. [c.17]

Все а-аминокислоты и образованные из них пептиды в большинстве случаев реагируют при комнатной температуре с азотистой кислотой количественно в течение 5 мин Вторая аминогруппа лизина (е-поло-жение) реагирует в течение 30 мин. Азот, входящий в состав пирро-лидинового, индолового и имидазолового колец, не реагирует, поэтому в результате анализа определяется только половина всего количества азота триптофана, треть количества азота гистидина и четверть количества азота аргинина. Пролин и оксипролин совсем не отщепляют азота. Гуанидиновая группировка H2N— ( = NH)—НН—, содержащаяся в гуанидине, креатине и аргинине, не реагирует с азотистой кислотой. При определении метиламина и аммиака приходится встряхивать в течеиие %—2 ч реакция с мочевиной заканчивается только через 8 ч амино- [c.711]

Метод осаждения фосфорновольфрамовой кислотой [139], применявшийся для количественного разделения таких оснований, в настоящее время вытеснен ионофорезом и ионообменной хроматографией. Большой популярностью пользуются также методы разделения оснований в виде пикратов, пикролонатов и флавианатов. Они образуют очень хорошие кристаллы [140, 141], и их состав обычно является вполне определенным. Однако применение этих солей для систематического фракционирования оснований до некоторой степени осложняется явлениями соосаж-дения (флавианаты лизина, шстидина и аргинина пикраты лизина и оксилизина) [27]. [c.118]

Кривая роста при прибавлении /(+) аргинина в данных условиях показана на рис. 16. Полученные результаты анализа приведены в табл. 10. Они находятся в превосходном согласии со значениями, полученными путем прямого выделения аргинина в виде его монофлавианата. Была получена количественная полнота определения прибавленного аргинина другие критерии надежности результатов также были удовлетворены. Таким образом метод дает надежные результаты для гидролизатов различных белков. [c.195]

Кишечная флора играет известную пололштельную роль для организма. При описании переваривания клетчатки (стр. 263) мы указывали на важную роль кишечной флоры, особенно для жвачных животных. Расщепление клетчатки сопровождается образованием в кишечнике уксусной, молочной, янтарной и других кислот, которые всасываются кишечником в кровь и используются в тканях организма. Наряду с этим, под влиянием микробов в кишечнике образуются газы — метан, водород, углекислый газ, а из серусодержащих аминокислот — сероводород. Под влиянием определенных бактерий в толстых кишках расщепляются тирозин, триптофан, цистеин, аргинин, лизин, гистидин с образованием протеиногенных аминов и других веществ. Следует подчеркнуть, что с количественной стороны бактериальное расщепление аминокислот в толстых кишках сравнительно незначительно и охватывает лишь ничтожную долю аминокислот, появляющихся в кишечнике при переваривании белков, так как аминокислоты по мере своего образования всасываются. Учитывая, однако, высокую ядовитость некоторых продуктов гниения аминокислот в толстых кишках, приходится считаться с возможностью отрицательного влияния на организм кишечной флоры, особенно в тех случаях, когда имеют место сдвиги в ее качественном и количественном составе. [c.361]

Первоначально в методе Эдмана тиогидантоины подвергали щелочному гидролизу для освобождения аминокислот, которые идентифицировали хроматографией на бумаге [129]. Аргинин и триптофан давали по два пятна, что затрудняло идентификацию. Сёквист [131] преодолел эту трудность, применив непосредственную хроматографию фТГ на бумаге и обнаруживая зоны реакцией с иодом и азидом [132]. Эдман и Сёквист [133] разработали количественный метод элюирования пятен ФТГ с последующим определением их ультрафиолетового поглощения при 270 ммк. [c.154]