Реакции пероксидазы

Скорость реакции пероксидазы следует закону действующих масс, поскольку на реакцию не влияют образующиеся продукты реакции. [c.378]

ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ РЕАКЦИИ ПЕРОКСИДАЗЫ 473, [c.473]

Для определения предела чувствительности реакции пероксидазы наиболее удобно использовать окисление гваякола, ибо этот субстрат не окисляется заметно перекисью водорода, без участия катализатора. При применявшихся концентрациях реактив остается совершенно бесцветным данш носле хранения в течение нескольких дней, в отличие от пирогаллола и гидрохинона. Опыты были проведены следующим образом. [c.473]

Чувствительность реакции пероксидазы..................................472 [c.646]

О реакции пероксидазы, очищенной путем ультрафильтрования..............483 [c.646]

В то время как цианид-ионы ингибируют эту реакцию пероксидазы [5, 46, 56], окись углерода никакого ингибирующего действия не оказывает [47[, что приводит к широко распространенной точке зрения о сохранении трехвалентного состояния железа в энзиме в течение всей реакции. [c.210]

Реакция пероксидазы с перекисью водорода приводит к образованию нескольких промежуточных соединений, которые имеют характерные максимумы поглощения (табл. 2). Впервые эти [c.36]

Решение. Высокая скорость реакции при контакте перекиси водорода с открытой раной наводит на мысль, что разложение перекиси водорода катализируется какими-то химическими частицами, имеющимися в ране. Этим веществом является фремент пероксидаза. Наличие в клетках организма пероксидазы предотвращает накопление в них перекиси водорода, которая может препятствовать протеканию в клетках многих других реакций. Пероксидаза-эффективный фермент с очень высоким числом оборотов. [c.452]

Когда срезы предварительно обрабатывали солью цианистоводородной кислоты, реакция пероксидазы не происходила. Прибавление перекиси водорода к ткани не приводило к образованию лигниноподобных материалов. Это показывало, что неспособность тяговой древесины к лигнификации может вызываться различным строением предшественников лигнина на обеих сторонах стебля. Изменение клеточного метаболизма, ведущее к образованию высококристаллической целлюлозы в клеточной стенке, может не дать мест, с которыми лигнин мог бы образовать связь. По-видимому в лигнифицированных клетках лигнин ассоциирован с нецеллюлозной фракцией клеточной стенки. [c.768]

Лмеется ряд данных, позволяющих сравнить свойства пероксидазы хрена и небелковых железопорфиринов. Были определены константы скорости реакций второго порядка восстановления Ре -дейтеропорфирина до Ре " различными восстановителями при pH 7,4 [178]. По кинетическим данным не обнаружено отклонений от ожидаемого поведения для простой одностадийной реакции. Если считать, что исходный комплекс был правильно идентифицирован как комплекс Ре (а не Ре ), то это означает, что реакция идет в одну двухэлектронную стадию или 54 < 43, так что экспериментально определяемая константа скорости — 54, а не 43- Но, так как в случае пероксидазы хрена константы 54 и 43, по-видимому, различаются не более чем на два порядка, а мы рассматриваем гораздо большие различия в скоростях, можно пренебречь этим различием в константах. Зависимость скорости реакции от pH не изучена. В табл. 18 приведены данные по скоростям реакций пероксидазы хрена и железодейтеропорфирина с одними и теми же восстановителями и в сопоставимых условиях эксперимента. Как отмечено в работе [178], белок, по-видимому, слабо влияет на константы скорости 54 и (или) 43 по сравнению с тем большим эффектом белка, который наблюдается в отношении констант 35 и 53- Другими словами, белок не обладает общим свойством ускорять все реакции или влиять на субстратную специфичность путем изменения относительных скоростей реакций с различными восстановителями. Были также определены константы скорости железопротопорфирина в присутствии 0,3 М гистидина при pH 6,3— 6,5 с восстановителями лейкоформой красителя малахитового зеленого, гваяколом и пирогаллолом [219]. Константы скорости оценивали, исходя из общей каталитической активности в предположении (по аналогии с пероксидазой хрена), что лимитирующая стадия соответствует k s ( 4 в обозначениях авторов), однако нель- [c.217]

В этих реакциях пероксидаза катализирует переход кислорода от перекиси водорода к хромогенному акцептору кислорода. Такими хромофорами могут быть о-толуидин [494], о-дианизидин [502], го-мованилиновая кислота [503], 2,6-дихлорфенолиндофенол [504] и гваякол [505]. [c.172]

Поэтому каталаза, разлагающая перекись водорода с величайшей энергией, должна была бы препятствовать пероксидазе утилизировать перекись водорода для реакций окисления. В действительности, это не так. Бах и Шода показали, что реакции пероксидазы можно произвести даже в присутствии большого избытка каталазы. Если к гваяковой настойке, раствору гваякола или пирогаллола и т. п. прибавить каталазу, перекись водорода и потом пероксидазы, то окрашивания реактивов не происходит, так как в промежуток времени, протекший до прибавления нероксидазы, каталаза успела разрушить всю перекись. Но если к тем же реактивам прибавить сначала каталазы и пероксидазы, а потом уже перекиси водорода, то окрашивание получается. Отрицательный результат в первом случае и положительный во втором можно было бы объяснить тем, что при соединенном действии пероксидазы и перекиси водорода каталаза быстро разрушается. [c.83]

После того как мы установили в VIII сообщении настоящей серии , что пероксидаза и перекись водорода всегда реагируют в постоянном отношении при окислении пирогаллола, мы пытались измерить скорость реакции пероксидазы при активировании перекиси водорода, для того чтобы глубже уяснить себе механизм ее действия. Из всех окислительных процессов, которые производятся системой пероксидаза — перекись водорода , для определения скорости реакции пригодно только окислепие иодистоводородной кислоты, так как в этом случае легко следить за ходом реакции при помощи титрования гипосульфитом. Однако как ни просто выполнение этого определения, пришлось провести многочисленные предварительные опыты, прежде чем удалось установить те условия, при кото- [c.370]

Если мы желаем оценить скорость реакции пероксидазы, то нужно нринимать во внимание тот факт, что акпгвность пероксидазы падает тем скорее, чем больше концентрация пероксидазы. Поэтому результаты, полученные при различных концентрациях, сравнимы между собой только в том случае, если выбрать такие стадии реакций, в которых пероксидаза [c.373]

Метод, основанный на окислении пирогаллола, характеризует размер превращения, вызванного пероксидазой, но не скорость самой реакции, ибо при выбранных нами отношениях концентраций,— а только при этих отношениях и можно было получать количество пурпурогалина, поддающееся точному взвешиванию,— окисление пирогаллола происходит с неизмеримо большой скоростью. Поэтому мы пытались определять скорость реакции пероксидазы другим путем, а именно путем титрования иода, освобождающегося при реакции между перекисью водорода и иодистоводородной кислотой. Полученные при этом результаты сводятся в основном к следующему [c.378]

Из ЭТИХ ОПЫТОВ видно, ЧТО свободный иод оказывает задерживающее влияние на действие пероксидазы только после длительного воздействия. При кратковременном воздействии иод, наоборот, даже определенно ускоряет ее действие последний эффект возрастает вместе с концентрацией иода, хотя и не прямо пропорциопально последней. Таким образом, при условиях опытов, которых я придерживался, нарушение реакции пероксидазы не может быть приписано свободному иоду. [c.386]

Для проведения исследования о распределении перекиси водорода между субстратом и ферментами было далее необходимо определить скорость реакции, вызываемой приготовленным мною препаратом каталазы, так как только при точном знании этой скорости моишо применять сравнимые количества пероксидазы и каталазы. Обычный метод, применявшийся также и Сентером в его основном исследовании о скорости реакции каталазы, неприменим в условиях моих опытов. Оказалось, что при отборе проб жидкости пипеткой из реакционной склянки внутри пипетки происходит такое энергичное выделение кислорода, что точное измерение объема жидкости практически невозможно. Поэтому мне пришлось вернуться к методу, который уже оправдал себя при определении скорости реакции пероксидазы . [c.393]

Если приготовить тирозиназу из грибов, оксигеназа которых довольно устойчива, то препарат содержит в большей или меньшей степени неизмененную цельную фенолазу (пероксидаза - - оксигеназа). Если, наоборот, применять для приготовлеиия тирозиназы растения, оксигеназа которых легко изменяется, как это наблюдается для большинства явнобрачных, то большая часть оксигеназы разла1ается, и препарат тирозиназы содержит избыток пероксидазы, в чем легко убедиться при помощи известных реакций пероксидазы. [c.467]

В связи с некоторыми опытами (см. следующую статью), которые я провожу в настоящее время, мне пришлось возможно лучше очистить от по-еторопних примесей, в частности от минеральных солей, препарат пероксидазы, приготовленный обычным методом из хрена. Так как диализ не давал удовлетворительных результатов я попытался применить ультрафильтр для интенсивной очистки пероксидазы. Полученны11 препарат оказался чрезвычайно активным, и поэтому я считал желательным определить на нем предел чувствительности реакции пероксидазы, поскольку до сих пор по этому вопросу не имеется никаких данных. [c.472]

Совсем иным типом реакций, которые катализируются пероксидазой, является автоксидация диоксималеиновой кислоты НООСС(ОН) = = С (ОН) СООН, в которой имеется такая же способная к окислению группа, как и в аскорбиновой кислоте [5]. В отличие от обычной реакции пероксидазы с перекисями, эта система может отравляться окисью углерода, причем такое ингибирование ослабляется действием света. Поэтому кажется вероятным, что в ходе этой реакции происходит изменение валентности. Теорелл и Сведин ]П7] показали, что при пропускании кислорода через смесь пероксидазы и диоксималеиновой кислоты коричневый цвет свободной пероксидазы переходит в темнокрасный и что полосы поглощения этого красного вещества соответствуют спектру пероксидазы в присутствии избытка перекиси водорода, т. е. третьему комплексу. Per. (HgOj) III. [c.210]

Особенностью механизма действия пероксидазы в оксидазных реакциях является способность фермента в процессе каталитической реакции генерировать свободные радикалы , HOj и радикал органического субстрата. Типичным субстратом в оксидазных реакциях пероксидазы является диоксифумаровая кислота [Saunders et al., 1964]. Оксидазное окисление ДФК исследовал Чанс, используя метод остановленной струи при pH 4 [ han e, 1952]. Было показано, что для проведения реакции при 4 °С требовалось присутствие ионов марганца, однако повышение температуры способствовало протеканию реакции и в отсутствие ионов марганца. Для пероксидазы, активированной ионами марганца, Чанс определил константу взаимодействия с кислородом (10 М сек ), и показал, что образующийся комплекс ПО-О реагирует с ДФК, с константой равной 4 10 М сек . [c.33]

Таким образом, в реакциях оксидазного окисления, пероксидаза способна катализировать окисление органических соединений, среди которых могут быть и функционально активные вещества. Причем в каталитическом процессе участвует белковый компонент. Реакция сопровождается образованием продуктов свободнорадикального окисления которые приводят к образованию активных форм кислорода. При этом образующаяся перекись водорода взаимодействует с ферментом с образованием соединения I, которое инициирует пероксидазные реакции. По-видимому, в этом случае могут параллельно протекать как реакции оксидазного, так и пероксидазного окисления. Причем последние ускоряют окисление органических субстратов. Образование радикалов органических соединений может способствовать модификации функциональных групп белка, участвующих в катализе, что может приводить к инактивированию фермента, проявляемое в понижении скорости ферментативной реакции. Наличие данного процесса продемонстрировано в реакции оксидазного окисления диоксифумаровой кислоты [Березин и др., 19756]. Используя в качестве субстрата пероксидазы о-дианизидин, который окисляется только перекисью водорода и не окисляется кислородом. Показано, что в системе ДФК-ПО-О наблюдается окисление о-дианизидина, причем скорость его окисления возрастала с увеличением концентрации ДФК. Поэтому образование перекиси водорода в ходе оксидазных реакций пероксидазы является пусковым механизмом для последующего протекания пероксидазных реакций фермента. Данный механизм может быть использован организмами, находящимися в состоянии покоя или гибернации, поскольку активизация оксидазных процессов в биогенной системе может служить пусковым механизмом для покоящихся систем, обеспечивая их энергетические потребности при выходе из состояния покоя. [c.36]

Изучая реакции пероксидазы с различными донорами, Чанс показал, что доноры электронов реагируют в 50—100 раз быстрее с соединением Е,, чем с [ han e, 1952], поэтому им была предложена следующая схема [c.37]

Изучение образования свободных радикалов в каталитической реакции пероксидазы при низкой температуре показало, что свободные радикалы в системе появляются только после перехода Е, в Е [Douzov, Leterrier, 1970]. С помощью ЭПР обнаружены промежуточные свободные радикалы в пероксидазных и оксидазных реакциях пероксидазы с фенолами, нафтолами и бензолами, а также в пероксидазных реакциях метгемоглобина. [c.41]

Выявленные эффекты влияния ИУК на пероксидазное окисление аскорбиновой кислоты, гидрохинона и о-дианизидина, катализируемое пероксидазой, имеют важное биологическое значение. ИУК может регулировать пероксидазное окисление медленно окисляемого субстрата, имея специфичный участок связывания в составе дистального домена активного центра пероксидазы. По-видимому, избирательность типов ингибирования пероксидазы ИУК обусловлена специализированностью ауксина служить оксидазным субстратом фермента. При этом ИУК может изменять направленность реакций пероксидазы с одного типа на другой, меняя специфичность фермента с пероксидазного на оксидазный, превращая пероксидазу в высокоспецифичную оксигеназу, генерирующую свободные радикалы необходимость в которых может возникать у растений в процессе развития. При этом ИУК может выполнять роль триггера в реакциях окисления, катализируемых пероксидазой. Реализация действия ауксина возможно проявляется при выходе семян из состояния вынужденного покоя. В этот период в семенах резко возрастает активность пероксидазы, которая способна активировать процессы прорастания. Возможным механизмом действия фермента в этих процессах может быть его способность к генерированию свободных радикалов, необходимых на конечных этапах эмбриогенеза для активизации механизмов прорастания. [c.78]

При реакции пероксидазы с ЕОР-карбодиимидом в отсутствие о-дианизидина о степени модификации СООН-групп ЕОР-кар-бодиимидом можно судить по изменению подвижности модифицированного фермента при хроматографии на СМ-целлюло-зе. Пероксидаза, обработанная 0,01 М ЕОР-карбодиимидом при pH 5,0 в течение 1,5 ч, хроматографируется подобно нативному ферменту (рис. 49, кривая 1). Однако объем элюции пероксидазы, модифицированной 0,1 М ЕОР-карбодиимидом в тех же условиях, больше, чем нативной (рис. 49, кривая 2). [c.117]

С целью определения локализации модифицированной карбодиимидом карбоксильной группы пероксидазы, мы применили метод ингибиторного анализа с использованием сходного по строению с субстратом (о-дианизидином) ингибитора, который не участвует в окислительно-восстановительных реакциях пероксидазы, но может конкурировать за центр связывания с одним из ее субстратов [Рогожин и др., 20006]. Это позюлило исследовать субстрат связывающую площадку активного центра фермента, а также оценить степень доступности карбоксильных групп после модификации и каталитические характеристики нативной и модифицированной -толуолсульфонат 1-циклогексил-3-(2-мор-фолиноэтил) карбодиимидом пероксидазы. В качестве ингибитора использовали N-этиламид о-сульфобензоилуксусной кислоты (амид III). [c.125]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология