Световые кривые флуоресценции

СВЕТОВЫЕ КРИВЫЕ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ [c.480]

Влияние различных факторов на световые кривые флуоресценции [c.484]

Интерпретация световых кривых флуоресценции [c.500]

Световые кривые флуоресценции [c.515]

Связь между световыми кривыми фотосинтеза и флуоресценции [c.480]

Легко вывести выражение для световых кривых выхода флуоресценции, используя те из разобранных выше кинетических моделей, в которых световое насыщение приписывается медленному течению предварительной темновой реакции (в это определение включаются также реакции восстановления хлорофиллового комплекса после его фотохимического изменения). [c.505]

Согласно Вавилову, для каждого вещества характерна некоторая предельная длина волны за которой начинается резкое спадание выхода, т. е., иными словами, если возбуждать свечение светом длины волны, большей то доля молекул, отдающих в виде флуоресцентного излучения энергию поглощенных ими световых лучей, резко снижается. На рис. 13 приведена экспериментально полученная кривая С. И. Вавилова (сплошная линия) по оси абсцисс нанесены длины волн света, которым возбуждалась флуоресценция в каждом отдельном опыте, по оси ординат [c.29]

Схема работы этих прерывателей показана на рис. 104. Верхняя диаграмма а представляет в идеальном виде фазу первого прерывателя, т. е. пунктирная кривая изображает периодическое изменение интенсивности возбуждающего света, падающего на образец. Пунктирная кривая характеризует также изменение интенсивности обычной флуоресценции, так как она появляется и затухает за время, пренебрежимо малое по сравнению с периодом прерывания. Сплошная линия на диаграмме а показывает возрастание и затухание долгоживущей люминесценции во время светового и темнового периодов. На диаграмме б показано положение второго прерывателя в противофазе, в этом случае фотоумножитель регистрирует только долгоживущую люминесценцию за период, соответствующий средней точке темнового периода. На диаграмме в изображено положение второго прерывателя в фазе. В этом случае фотоумножитель регистрирует как обычную флуоресценцию за время /ь так и долгоживущую люминесценцию за время /3. [c.259]

Наиболее перспективны для практики массовой аналитической работы фотоэлектрические флуориметры, дающие возможность быстро и объективно определять яркость флуоресценции испытуемых веществ. Они позволяют вести измерения в светлой комнате, дают при интерполяции по калибровочным кривым более точные результаты, чем при визуальной оценке промежуточных значений эталонной шкалы, и не требуют приготовления полной серии эталонных растворов одновременно с каждой партией проб. В таких приборах свечение объекта возбуждают подходящим осветителем, излучение флуоресценции направляют на приемник света (фотоэлемент, фотосопротивление или фотоумножитель), а возникающий фототок измеряют гальванометром — непосредственно или после соответствующего усиления. Такие приборы могут быть с одним и с двумя оптическими плечами в одноплечих приборах необходима очень жесткая стабилизация питания источника возбуждения и приемника света. В двуплечих приборах требования к стабильности возбуждающего потока менее строги как и во многих фотоколориметрах, в них используется дифференциальная схема измерения с нуль-инструментом, а для уравнивания обоих световых потоков служат диафрагмы того или иного вида. [c.91]

Таким образом, в поле зрения микроскопа имеется два рода лучей зеленые (от флуоресцирующего экрана) и красные (от источника света, пропускаемые светофильтром). Плотность светофильтра 4 в красной и ультрафиолетовой частях спектра и интенсивность флуоресценции, экрана подобраны так, что при наложении световых пучков участки зрительного поля микроскопа, не занятые препаратом, оказываются светло-желтыми. При этом цвет отдельных деталей в изображении препарата определяется относительной силой поглощения соответствующих участков препарата в пропускаемых светофильтром областях спектра, т. е. их спектральными кривыми поглощения. [c.23]

Как известно, характеристические кривые, наносимые при помощи марок интенсивности, следует получать при временах экспозиции, которые пе должны значительно отличаться от времени экспозиции рабочих снимков (отношение времен, большее 5, допустимо только при применении специальных проявителей). Так как свет флуоресценции при выбранном составе раствора оказывается весьма интенсивным, то для уравнивания времен экспозиций он должен быть ослаблен путем уменьшения возбуждающего светового потока. Это полезно и в том отношении, что при слабых освещенностях флуоресцирующие растворы оказываются гораздо более стойкими. Ослабление падающего потока осуществлялось с помощью ослабителя, представляющего собой надетую на сосуд с флуоресцирующим веществом латунную трубочку, по поверхности которой были сделаны в шахматном порядке небольшие вырезы. Площадь отверстий составляла несколько процентов общей поверхности трубочки. Весьма желательно для обеспечения равномерной освещенности по всему объему люминесцирующего вещества применять матовое или молочное стекло, накладывающееся на светофильтр. Наличие такого рассеивателя, ослабляя световой поток, делает его равномерным. [c.35]

Относительные измерения световых сумм производятся методами визуальной или фотоэлектрической фотометрии одним из указанных способов с помощью термического высвечивания, исследования затухания фосфоресценции, оптического высвечивания, а также путём вычисления из кривых нарастания свечения. Абсолютные измерения световых сумм довольно сложны. Они, как и в случае определения выхода флуоресценции, сводятся к сравнительной фотометрии спектров излучения известного источника сравнения и исследуемого фосфора. [c.316]

Свет такой интенсивности возбуждает валентные электроны комплекса ДНК — Н 33258, вызывая развитие флуоресценции. Световой фильтр перед фотодетектором позволяет регистрировать эмиссию в области 4б0 15 нм. Таким образом, по интенсивности флуоресценции (по калибровочной кривой или по сравнению с образцом ДНК с известной концентрацией) можно определить концентрацию ДНК. [c.184]

Изучение опять становится заметно более плодотворным, если в качестве объекта используются пурпурные бактерии. Было найдено, что концентрация восстановителей, таких, как Hg, HgS или H S Og, сильно влияет на выход флуоресценции бактериохлорофилла в этих организмах. Это явление иллюстрируется световыми кривыми флуоресценции, приведенными на фиг. 205, 206 и 207 (фигуры взяты из работы Вассинка, Катца и Доррештейна [132] с hromatium). Кривые на фигурах представляют интенсивность флуоресценции F (не выход <р) как функцию интенсивности падающего света, с концентрацией восстановителя [HR] в качестве параметра. Фиг. 205 дает сравнение эффекта трех различных восстановителей фиг. 206 — серию измерений с тиосульфатом различной концентрации и фиг. 207 — подобную серию при различном давлении водорода. В обоих последних случаях увеличение концентрации восстановителя приводит к удлинению линейной части флуоресцентной кривой (части, которая соответствует выходу флуоресценции, получающемуся при слабом освещении). [c.371]

Еще один случай необычного влияния двуокиси углерода на световые кривые флуоресценции наблюдали на пурпурных бактериях Вассинк, Катц и Доррештейн [158]. Во-первых, эти авторы не обнаружили никакого влияния недостатка двуокиси углерода в отсутствие восстановителя (фиг. 203), т. е. в условиях, которые не могут быть воспроизведены для зеленый растений. В присутствии тиосульфата или водорода недостаток двуокиси углерода сказывался, хотя и незначительно, но вполне заметно. Данные фиг, 204, Л, полученные В присутствии тиосульфата, можно интерпретировать по аналогии [c.485]

Влияние температуры на световые кривые флуоресценции наблюдали также Вассинк и Керстен [159] при работе с диатомовыми водорослями. [c.489]

Результаты, полученные Вассинком и Керстеном при работе с Nitzs hia (см. фиг. 202), вызывают недоумение. Тот факт, что при увеличении интенсивности освещения выше 50 - 10 apzj M сек <р уменьшается, а не увеличивается, формально можно объяснить, предполагая, что накопляющаяся в этом организме во время интенсивного фотосинтеза форма хлорофиллового комплекса обладает более высоким значением А,- (т. е. более быстро рассеивает энергию), так что сумма kf-j-ki увеличивается на сильном свету, даже если kf приближается к нулю. Более трудно поддается объяснению то, что в отсутствие двуокиси углерода диатомовые водоросли сохраняют высокий выход флуоресценции на сильном свету, тогда как на первый взгляд можно было бы ожидать, что в этом случае с самого начала должно преобладать более низкое значение. Рассматривая влияние [ Og] на световые кривые флуоресценции, мы уже указывали, что экспериментальные кривые на фиг. 202 было бы легче понять, если бы вместо обозначения в отсутствие СОз стояло в отсутствие внешней СОа . [c.510]

Что касается пурпурных бактерий, то здесь, повидимому, для объяснения световых кривых флуоресценции требуются некоторые дополнительные данные. Прежде всего нуждается в объяснении низкое значение при слабом освещении (сигмообразная форма). Возможно, что это связано с происходящим при слабом фотосинтезе замещением внешних восстановителей на внутриклеточные водородные доноры. Совпадение двух кривых на фиг. 203, повидимому, указывает на то, что если фотосинтез задерживается из-за отсутствия восстановителей, то либо хлорофилл накапливается в одной и той же форме в присутствии и в отсутствие двуокиси углерода, либо две его формы (например, НХ B hI Z и X ВСЫ Z), накапливающиеся при этих условиях, имеют практически одинаковую скорость диссипации энергии, ft,-. Наоборот, при наличии восстановителей две [c.510]

Кривые, полученные на импульсной установке, можно рассматривать как графическое подтверждение уже об-сзгждавшегося процесса образования эксимера. На рис. 124 кривая р t) характеризует продолжительность светового импульса. Флуоресценция мономера [кривая м (0], как это и следует из уравнений (375)—(378), непрерывно затухает сразу же по окончании светового импульса. На начальных стадиях этого затухания флуоресценция эксимера [кривая (0] растет, достигает максимума значительно позже, чем заканчивается световой импульс, и, наконец, спадает. Таким образом, кривая /с i) отражает образопапие димеров [процесс (378), конкурирующий с процессами (379) — [c.333]

В общем, повидимому, можно считать установленным, что понижение или лолное прекращение снабжения двуокисью углерода влияет обычно на выход флуоресценции, о, в определенном интервале интенсивности освещения. Подобного эффекта не наблюдается при очень слабом освещении нет влияния, повидимому, и на очень сильном свету, однако последнее обобщение нуждается еще в экспериментальном подтверждении. У пурпурных бактерий удаление двуокиси углерода, вызывающее обычно увеличение о, производит иногда, при повышении интенсивности света, противоположный эффект (см. фиг. 204). Так как до сих пор не было выполнено систематических измерений <р для различных [СОо], то пока невозможно начертить углекислотные кривые флуоресценции f=/[ 02]. Вместо этого имеются световые кривые, показывающие интенсивность флуоресценции как функцию интенсивности света с [ Ogl в качестве параметра (обычно только для двух различных концентраций двуокиси углерода или просто в присутствии двуокиси углерода и без двуокиси углерода). Некоторые из таких кривых будут приведены в главе XXV1I1 (см. фиг. 199, 203 и 204). [c.361]

Кислород. В гл. XIII (т. I, стр. 336) мы описали ингибирующее действе избытка кислорода на фотосинтез. Световые кривые фотосинтеза и флуоресценции в присутствии и в отсутствие кислорода будут обсуждаться в гл. XXVIII. Варбург [133] был единственным исследователем, который провел систематические измерения фотосинтеза при различном давлении кислорода, позволяющие начертить кислородную кривую P = f 0 его результаты воспроизведены в т. I на фиг. 45. Кривая показывает наиболее крутое понижение скорости между О и [c.381]

У пурпурных бактерий возможны два альтернативных объяснения эффекта лимитирования скорости фотосинтеза и усиления флуоресценции, вызываемого ограниченным поступлением восстановителей (Hg, HgSgOg. ..). С одной стороны, можно рассматривать снабжение восстановителями как предварительную реакцию, медленность которой является причиной накопления измененной, более сильно флуоресцирующей формы светочувствительного комплекса X СЫ Z с другой,— используя теорию Франка, можно считать это снабжение частью завершающей реакции (удаление фотоперекисей) и объяснять его влияние на флуоресценцию образованием наркотиков при помощи накопившихся перекисей. В обоих случаях световая кривая фотосинтеза при увеличении интенсивности освещения будет приближаться к пределу, определяемому максимальной скоростью поступления восстановителя (посредством диффузии или при помощи какого-нибудь предварительного энзиматического превращения). [c.466]

Световые кривые выхода флуоресценции ф=/(/ ) являются, таким образом, линейными производными функции [ СЫ ] =/(/о). На практике в качестве независимой переменной мы используем интенсивность падающего света, / так как мы предполагаем наличие равномерного поглощения света, т. е. оптически тонкую систему, то получаем (см. уравнение (28.33)) = fe / hip. Соотношение между кривой интенсивности флуоресценции F =f (/д) и кривой выхода флуоресценции Ф = / (/J выразится следующим образом [c.505]

Все кинетические теории фотосинтеза сходятся в том, что низшая, приблизительно линейная часть световой кривой соответствует столь медленному первичному фотохимическому процессу, что нефотохимические— подготовительные и завершающие—реакции могут без задержки снабдить процесс исходными соединениями и переработать образуемые при фотореакции продукты. Может поэтому показаться, что максимальный квантовый выход, подсчитанный по предельному наклону световой кривой, должен быть равен числу квантов, действительно потребных для фотосинтеза (если пренебречь практически ничтожной частью, теряемой в виде флуоресценции). Экспериментально определяемая величина квантового выхода часто оказывается значительно ниже 0,1, и этот факт свидетельствует, что во многих случаях фотосинтетический аппарат или его часть находятся в недейственном состоянии, что ведет к потере большей части поглощенных световых квантов. В частности, в старых клеточных суспензиях максимальный квантовый выход может быть гораздо ниже, чем у здоровых молодых клеток (см. фиг. 183). Причины этого неактивного состояния до сих пор неизвестны и могут быть связаны с недостатком питания или недостатком энзиматических систем (вспомним, например, опыты Ван-Хилле по оживлению фотосинтеза постаревших культур Ohlorella) или с [c.576]

Рис. 75. Зависимость интенсивности голубой флуоресценции, возбужденной светом 219 mfx, (А) и оранжевой флуоресценции, возбужденной светом 365 игр-, от продолжительности рентгенизации фосфора Na l—Ag. Кривая В — нарастание световых сумм голубой фосфоресценции.

Паркер [143] вмонтировал флуоресцентный счетчик квантов в спектрофлуориметр для непрерывного измерения квантовой интенсивности возбуждающего света. Это позволяет непосредственно измерять исправленный спектр возбуждения, компенсировать флуктуации света лампы при измерении спектра флуоресценции и определять кривую спектральной чувствительности монохроматора флуоресценции в ультрафиолетовой области. Эти приспособления будут подробно обсуждены в разделах III, Ж, 3 и III, К, 1—3, а здесь мы рассмотрим преимущества и недостатки их применения для измерения интенсивности света. Предположим, что пучок света из монохроматора М фокусируется вогнутым зеркалом R (см. рис. 74, Б) на кювету С, в которой происходит фотохимический или фотофизический процесс. Для регулирования светового потока, падающего на кювету С, разделитель пучка В, представляющий собой прозрачную кварцевую пластинку, помещают в пучок света под углом, при этом он отражает часть света на флуоресцирующий экран F, от которого свет попадает в фотоэлемент или фотоумножитель Р. Если раствор F подобран удачно (согласно условиям, описанным выше), то сигнал фотоумножителя будет приблизительно пропорционален квантовому потоку, попадающему на С, независимо от длины волны. Слово приблизительно необходимо по нескольким причинам. Во-первых, отралотельная способность разделителя пучка изменяется с длиной волны. Во-вторых, световая волна с электрическим вектором, параллельным поверхности В, будет отражаться более эффективно, чем свет с электрическим вектором, перпендикулярным этому направлению. Если бы пучок света был совершенно неполяризован при всех длинах волн, это не имело бы никакого значения. Однако свет, выходящий из монохроматора, особенно в случае решеточных монохроматоров, заметно поляризован, а степень поляризации может меняться с длиной волны, следовательно, есть дополнительная причина для изменения полной отражательной способности разделителя пучка. [c.196]

Значительно более точные результаты получаются измерением интенсивности окраски пятна. При этом фотометрически измеряют ослабление света, проходящего через пятно светового потока. Источник света должен быть расположен перпендикулярно пятну. При нанесении на график значений изменения интенсивности потока получается колоколообразная кривая, ограниченная ею площадь характеризует количество вещества. С помощью эталонных растворов с известными концентрациями растворенного вещества можно построить соответствующую калибровочную кривую. Если носитель непрозрачный (например, алюминиевая фольга), то интенсивность окраски пятен измеряют на фотометре в отраженном свете. Аналогично этому с помощью новейших приборов (например, фирмы Камаг) можно количественно оценить флуоресценцию или гашение флуоресценции. Можно также использовать спектрофотометр РМРП фирмы Цейс. [c.98]

Мы не можем также объяснить максимум II разложением адсорбированных молекул NHg за счет световой энергии, поглощаемой твердым телом. Такой процесс возможен, так как было показано в нашей лаборатории, что флуоресценция AlgOg может быть потушена адсорбцией некоторых наров [7], но как раз в случае прочно адсорбированных наров аммиака, как это видно из цитированной выше работы, тушение не наблюдалось. Кроме того, наличие максимума II в спектральных кривых Белосельского, полученных для аминокомплекса меди и для аммиака, адсорбированного на MgO, т. е. для твердых тел, природа которых совершенно отлична от природы AljOg, доказывает, что адсорбент не является фоточувствительной компонентой. Более того, не существует указаний на то, что Al Og должна обладать максимумом поглощения, совпадающим с максимумом II. [c.345]

Уровень фотосинтетической активности клетки снижается (рис. 2O, кривая 2, рис. За, кривая I). Сравнение газообмена интактных листьев и водорослей с лшинесцентными характеристиками хлорофилла а показало, что в этот мсжиент не изменяется пигментный состав фотосинтетического аппарата, не нарушается поступление энергии от светособирающих пигментов в реакционные центры, не тормозится существенно скорость фотосинтетического электронного транспорта. Однако в это время отказывает один из гомеостатических механизмов фотосинтетического аппарата, регулирующий оптимальное распределение световой энергии между фотосистемами. В результате во время лаг-фазы фотосинтеза тормозится светоиндуцированный структурный переход тилакоидных мембран из "темнового" состояния 1 в "световое" состояние 2. Об этом свидетельствовало уменьшение светозависимого изменения спектров флуоресценции при температуре жидкого азота (рис. За, кривая 2). [c.30]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология