Аргинин, идентификация

Вопросу анализа аминокислот методом хроматографии на бумаге посвящено большое число работ советских и иностранных авторов. Однако почти все они связаны с разделением аминокислот белков и других биологических препаратов [61. Наша попытка применить их для анализа мелассы не дала положительных результатов, что можно объяснить мешающим действием остальных компонентов мелассы, ио отношению к которым содержание отдельных аминокислот составляет лишь 0,1—3 вес. %. Описанный в литературе метод 17, 81, состоящий в сорбции аминокислот на катионите с последующей их элюцией и идентификацией на бумаге неудобен, так как требует сложной специальной аппаратуры и чрезмерно длителен. Первой частью нашего исследования было хроматографическое разделение искусственной смеси из десяти аминокислот, приблизительно имитирующей аминокислотный состав мелассы [1, 81. Смесь включала лизин, аргинин, серии, глицин, аспарагиновую и глютаминовую кислоты, а-аланин, валин, метионин и лейцин. Растворы аминокислот готовили в 15%-ном этиловом спирте с концентрацией 0,5—1 у аминокислоты в 1 мкл. [c.212]

Хотя большинство исследователей, пользуясь методом Косселя, обычно выделяют аргинин и гистидин в виде солей для их идентификации, все же в литературе приводится большое число аналитических данных, где содержание этих двух аминокислот высчитано из общего азота очищенных фракций. Эти данные обычно превышают результаты, установленные по весу чистых солей в случае аргинина на 10—15%, в случае гистидина — на 20—30% [494, 422, 643 и др.]. [c.17]

Молекулярная масса и изоэлектрическая точка - характерные параметры белка. Однако в основе точной идентификации белковой молекулы лежит определение аминокислотной последовательности. Уже на первом этапе этого процесса, включающего расщепление белка на мелкие фрагменты, можно получить значительную информацию о данном белке. В настоящее время в продаже имеются протеолитические ферменты и химические реактивы, расщепляющие белки по определенным аминокислотным остаткам (табл. 4-10). Так, фермент трипсин отщепляет остатки лизина и аргинина со стороны карбоксильных групп химический реактив бромистый циан расщепляет пептидные связи, расположенные после остатков метионина. Поскольку такие специфические ферменты и реактивы расщепляют в белковой молекуле ограниченное количество связей, при их воздействии образуется смесь больщих пептидов. Разделив эту смесь методом электрофореза или хроматографии, можно получить пептидную карту, характеризующую исследуемый белок. Такие пептидные карты называют иногда фингерпринтами (отпечатками пальцев) белка (рис. 4-53). [c.219]

Аспарагин дает реакцию с нингидрином на хроматографической бумаге, но его идентификация затруднена в тех случаях, когда рядом с ним расположены аргинин, аспарагиновая кислота, глицин, серии или некоторые другие [c.270]

Специфические реакции на отдельные аминокислоты. Наряду с нингидриновым реактивом существуют и другие реагенты, дающие цветные продукты с некоторыми аминокислотами. Это свойство избирательного окрашивания часто используют в хроматографии для идентификации отдельных аминокислот. Так, для определения соединений с гуанидиновой группой (аргинин) используют реакцию Сакагуши. Хроматограмму смачивают 0,1%-ным раствором 8-оксихинолина в ацетоне и после ее подсушивания на воздухе слегка опрыскивают из пульверизатора раствором гипобромита (1 мл брома в 500 мл 0,5 н. NaOH). Наблюдается оранжевое окрашивание. [c.131]

С. р. можно использовать для идентификации аргинина в смеси, аминокислот при проведении бумажной хроматографии. Для этого хроматограмму вначале опрыскивают 0,01 %-ным р-ром а-нафтола в 95%-ном этаноле, содержащем 5% мочевины (этот р-р перед употреблением сильно подщелачивают сухим NaOH). После просушиваш1я хроматограммы ее опрыскивают 5%-ным водным р-ром NaBrO. [c.288]

Рис. 9.7.6. Изображение пространствениого строения центральной части участка 3-структуры ОПИТ. Десять остатков аминокислоты обозначены следующими буквами С — цистеин, F — фенилаланин, I — изолейцнн, Q — глутамин, R — аргинин, Т — треонин, V — валин, Y — тирозин. Водородные связи между группами NH и СО обозначены щтриховкой. Отметим, что протоны NH л-го остатка и протоны С"Н (п - 1)-го остатка, обозначенные стрелками, расположены очень близко. Наблюдаемые NOE позволяют провести последовательную идентификацию резонансных сигналов. (Из работы [9.31].)

Расщепление полипептидной цепи на фрагменты проводят обычно при помощи протеолитических ферментов, таких, как трипсин, химотрипсин или пепсин. Эти ферменты действуют на различные участки полипептидной цепи, так как имеют повышенное сродство к различным аминокислотным остаткам. Необходимо учитывать также соседние аминокислотные остатки, т. е. пространственное окружение атакуемой пептидной связи. Оказалось, что трипсин гидролизует только те пептидные связи, в образовании которых участвует карбоксильная группа лизина или аргинина, а химотрипсин гидролизует связи по фенилаланину, триптофану и тирозину Обычно протеолитические ферменты, гидролизующие полипептидные цепи, предварительно иммобилизуют на нерастворимых матрицах для более легкого отделения их от продуктов гидролиза. Далее определяют аминокислотные последовательности каждого полипептидного фрагмента. Для этого чаще всего используют метод Эдмана, заключающийся в анализе полипептида только с Ж-конца. Концевая аминокислота при взаимодействии с фенилизотиоцианатом в щелочной среде образует стойкое соединение, которое можно отщепить от полипептида без его деградации. Фенилтиогидантоиновое (ФТГ) производное аминокислоты идентифицируется хроматографическим методом. После идентификации концевого Ж-амино-кислотного остатка метка вводится в следующий аминокислотный остаток, [c.41]

Белки дают ряд цветных реакций, обусловленных наличием определенных аминокислотных остатков нли общих химических группировок. Эти реакции широко используются для аналитических целей. Среди них широко известны нингидриновая реакция, позволяющая проводить количественное определение аминогрупп в белках, пептидах и аминокислотах, а также биуретовая реакция, применяемая для качественного и количественного определения белков и пептидов. (При нагревании белка или пептида, но не аминокислоты, с Си 01 в щелочном растворе образуется окрашенное в фиолетовый цвет комплексное соединение меди, количество которого можно определить спектрофотометрически.) Цветные реакции на отдельные аминокислоты используются для обнаружения пептидов, содержащих соответствующие аминокислотные остатки. Для идентификации гуанидиновой группы аргинина применяется реакция Сакагучи — при взаимодействии с а-нафтолом и гипохлоритом натрия гуанидины в щелочной среде дают красное окрашивание. Индольное кольцо триптофана может быть обнаружено реакцией Эрлиха — красно-фиолетовое окрашивание при реакции с п-диме-тиламинобенэальдегидом в Н 804. Реакция Паули позволяет выявить остатки гистидина и тирозина, которые в щелочных растворах реагируют с диазобеизолсульфокислотой, образуя производные, окрашенные в красный цвет. [c.32]

Общая методика разделения двадцати ФТГ-аминокислот включает хроматографию на двух колонках (/ и //) и идентификацию ФТГ-аргинина и ФТГ-гнстидина—хроматографией на бумаге. На колонку / с скоростью 15 мл/ч подают систему А, а после выхода ФТГ-фенилаланина—систему Б. [c.383]

Аргинин 1 фенилаланин ] пролин ] лейцин + изолейцин I валин лизин тирозин I аланин 1 треонин 1 глицин дженколевая кислота 1 серин лан-тионин I глутаминовая кислота аспарагиновая кислота цистин цистиновая кислота. Идентификация (порядок — в первой, фенольной, хроматограмме) [c.271]

Новая аминокислота тирозин триптофан I фенилаланин [ метионин лейцин I изолейцин валин 1 новая аминокислота пролин треонин гистидин I аланин новая аминокислота I серинI глицин аргинин лизин I глутаминовая кислота ] аспарагиновая кислота. Идентификация и определение (порядок — в первой, коллидиновой, хроматограмме) [c.271]

Эта окраска вовсе не является характерной только для аминокислот пептиды, белки н другие аминосоединения также дают ее . Однако она позволяет открывать на бумаге исключительно малые количества аминокислот и пептидов с короткой цепью. Порядок определяемых величин можно видеть по данным табл. 6, хотя абсолютные количества несколько зависят от условий опыта. Тем не менее весьма поучительно сравнить получаемые результаты. Например, можно видеть, что в случае глицина проба с нин-гидрином в 15 раз чувствительнее, чем в случае аргинина, тирозина, лизина или глутаминовой кислоты следовательно, простого взгляда на хроматограмму недостаточно для оценки относительного количества аминокислоты. Иногда при идентификации аминокислоты может помочь оттенок окраски пятна. [c.127]

Применение динитрофенильных производных, введенных в практику Зангером [25] с целью идентификации и количественного определения концевых аминогрупп, позволяет получить ценные сведения о количестве открытых цепей в белке. Кроме того, такие меченые аминокислоты служат в качестве реперных точек при исследовании неполного гидролиза (1346). В этом отношении полезными являются также е -аминогруппы лизина. Путем неполного гидролиза, осуществляемого с помощью кислоты и различных типов ферментов, оказалось возможным разрывать длинные полипептидные цепи в различных точках и путем анализа установить единственно возможную конфигурацию. Этим способом Зангер и Таппи[99]и Зангер и Томпсон [100] определили порядок чередования аминокислот в двух типах цепей, входящих в состав инсулина (табл. 27). Такой подход к проблеме структуры белка был облегчен широким применением новейших микрометодов хроматографии на бумаге и силикагеле и ионофореза. Таким образом, оказывается, что одна из крупнейших проблем химии белка поддается изучению с помощью весьма простых и экономичных методов. Цепи в инсулине имеют различную длину, причем цепь с N-концевым фенилаланином (цепь В) состоит из 30 остатков, а соответствующая глициновая цепь (цепь А) — из 21 остатка. Порядок чередования аминокислот и их содержание даны в табл. 27. Можно отметить следующее. Цепь А не содержит лизина, гистидина, аргинина, треонина, фенилаланина и пролина все эти компоненты входят в состав цепи В, в которой, в свою очередь, совсем нет изолейцина. Не наблюдается ни регулярного чередования аминокислот, ни тенденции к чередованию полярных и неполярных групп. Три ароматические аминокислоты (фен.фен.тир.) расположены последовательно, и два остатка глутаминовой кислоты связаны с двумя остатками ци-стеина (глу.глу.цис.цис.). В обеих цепях содержится шесть цистеиновых остатков, четыре из которых расположены врозь, а только что упомянутые два — рядом друг с другом в молекуле нативного белка все они существуют в форме цистина, но какие из них расположены между пептидными цепями, а какие в самих пептидных цепях — неизвестно. Часть дикарбоновых кислот присутствует в виде амидов — четыре в цепи А и две в цепи В. [c.255]

Первоначально в методе Эдмана тиогидантоины подвергали щелочному гидролизу для освобождения аминокислот, которые идентифицировали хроматографией на бумаге [129]. Аргинин и триптофан давали по два пятна, что затрудняло идентификацию. Сёквист [131] преодолел эту трудность, применив непосредственную хроматографию фТГ на бумаге и обнаруживая зоны реакцией с иодом и азидом [132]. Эдман и Сёквист [133] разработали количественный метод элюирования пятен ФТГ с последующим определением их ультрафиолетового поглощения при 270 ммк. [c.154]

Мюллер [21] исследовал осаждение нитроиндандионом протеиногенных аминов, аминокислот, бетаинов и подобных биологических веществ и нащел, что бетаин, коламин, лизин и мочевина не осаждаются, между тем как р-аланин, кадаверин, путресцин, гистамин и гистидин тотчас дают осадок, а аргинин, карнозин, креатинин, тирамин и гликоколь, хотя и дают хорошие кристаллические осадки, но образуются они несколько медленно, так что часто осадок появляется только на следующий день. Точки плавления этих солей не резки. На применение нитроиндандиона для выделения и идентификации оснований животного организма указывают также Акерман и Мауэр [22]. [c.34]

Нитроксид (N0). В течение последних пяти лет накапливаются данные о возможной роли N0 в межклеточной передаче сигнала. Начало этому направлению было положено выявлением в тканях животных биохимических систем, способных генерировать N0, используя в качестве исходного соединения аргинин, а также идентификация N0 как одного из главных факторов релаксации сосудов. [c.244]

Бактериологическое исследование. Проводится путем посева материала, взятого из уретры, петлей на твердую питательную среду в чашку Петри и уколом в пробирку с полужидкой средой того же состава. В качестве питательной среды используют триптический перевар бычьего сердца, пептон, хлорид натрия, к которому добавляют дрожжевой экстракт и пенициллин (1000 ЕД) для задержки роста бактериальной микрофлоры. Посевы инкубируют при 37°С в течение 48 ч. Микоплазма образует колонии в виде яичницы-глазуньи с врастающим в среду центром и полупрозрачной периферией. Идентификацию выделенной культуры микоплазмы проводят по ферментации углеводов, разложению аргинина и серологическим свойствам в реакции ингибиции роста культуры специфической сьшороткой и нейтрализации метаболизма аргинина той же сывороткой. М. hominis в отличие от других видов микоплазм не ферментирует углеводы и разлагает аргинин. [c.223]

Для исследования путей синтеза аминокислоты аргинин были получены мутанты четырех генов м, м2, м3, и4) и осуществлена их идентификация. Для эго1 о изучали способность мугашов к росту на средах, дополненных тем или иным промежуточным продуктом пути синтеза аргинина (А, В или С). Результаты этого эксперимента представлены в табл. 40. [c.66]

Идентификация функциональных групп активного центра аденилатциклазы до сих пор фактически не проводилась. Необратимое ингибирование аденилатциклазы было показано только с помощью неспецифических реагентов, модифицирующих аргинин,— 2,3-бутандиона и фенилглиоксаля [165, 166]. Доказательством расположения модифицируемой группы в активном центре служила защита фермента от инактивации субстратом аденилатциклазы. [c.117]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология