Замораживание замещение

На тонких срезах толщиной менее 200 нм обычно обнаруживается огромное количество морфологических деталей, и им потенциально присуще самое высокое пространственное разрешение в режиме рентгеновского микроанализа. Однако за счет их малой толщины количество анализируемого материала может уменьшиться до очень низкого уровня вследствие малости микрообъема исследуемого среза. Тем не менее исследователь сталкивается с теми же проблемами препарирования, которые существуют при препарировании толстых срезов, и единственную заметную помощь дает использование тонких срезов материала, который подвергался лиофильной сушке или замораживанию замещением. [c.273]

Замораживание-замещение является полезным методом препарирования образцов для получения тонких срезов. Несмотря на то что основное усилие исследований было направлено на защиту морфологической целостности образцов, в настоящее время имеется достаточно оснований, чтобы предполагать, что замораживание-замещение может также быть полезным методом препарирования для микроанализа биологических объектов. Мы отправляем читателя к недавно опубликованным обзорам [453, 454], в которых обсуждается целый ряд методов в применении для растительных и животных тканей. [c.302]

Для большей эффективности замораживание-замещение должно производиться при температуре ниже температуры рекристаллизации льда, которая для большинства биологических тканей лежит в пределах от 163 до 193 К- Использовался ряд органических жидкостей, а температуры и времена замещения даны в табл. 12.5. Как и в случае лиофильной сушки, не могут быть указаны точные времена, и необходимо для различных образцов варьировать процедуры. Времена, приведенные в табл. 12.5, являются средними для образцов размером 1 — 2 мм , а температуры представляют температурный диапазон проведения замещения. С целью сохранения структуры объекта в замещающую жидкость могут быть добавлены такие фикса- [c.302]

Таблица 12.5. Органические растворители, используемые при замораживании-замещении

Несмотря на эти недостатки, замораживание-замещение является полезным методом препарирования, и, вероятно, его луч-ще всего применять для клеток и тканей с плотной матрицей. Это могло бы ограничить количество растущих кристаллов льда во время замораживания и замещения и свести к минимуму расстояния возможного движения электролитов. [c.305]

На основании кинетической интерпретации реакций переаминирования и контрольных опытов следует, что замещенные производные мочевины диссоциируют на фенилизоцианат и соответствующие амины. Оценку равновесия диссоциации удалось осуществить путем замораживания смеси в состоянии равновесия и связывания образовавшегося изоцианата с помощью более основного амина. Потенциометрическим титрованием определяют избыток этого амина, а для контроля — и образовавшийся амин. Учитывая расширение растворителя, константы диссоциации замещенных производных мочевины даны в моль-кг" . [c.355]

За последние годы часто применяют лиофилизацию материала и замораживание объекта с пропиткой его спиртом. Такой способ называется замещением в замороженном состоянии или замораживанием с замещением. Он осуществляется следующим образом. Замороженную в изопентане при —170° ткань помещают в абсолютный метанол или этанол, охлажденный до —40 или —70°. В этих условиях образовавшийся в тканях лед растворяется в спирте и спирт замещает воду. Обычно эту операцию проводят в двух-трех сменах абсолютного спирта с [c.127]

Однако можно предположить, что ниже точки, где начинается замораживание , движение ограничивается вращательным или колебательным видом. Имея в виду рассчитанные значения АЯ , составляющие от 2 до 3,5 гс и ЬН — от 2,8 до 3,7 гс для ферроцена и обращаясь к замещенным соединениям, мы получили результаты, приведенные в табл. 3. [c.65]

При рассмотрении реакций железа(П) следует учитывать другой фактор ускорение электронного обмена между железом(И) и железом(П1) многими анионами. Так как при этом обмене и в исходных частицах, и в продуктах реакции замещения происходят быстро, нельзя сказать с уверенностью, реагируют ли комплексы железа(И1) с незакомплексованными ионами железа(П) или наоборот, комплексы железа(И) с незакомплексованными ионами желе-за(1П), хотя первое предположение представляется более правдоподобным [73]. Тем не менее истинные скорости обмена можно измерить, применяя методы меченых атомов и замораживания. Данные о скоростях обмена для комплексов железа(И) с органическими и неорганическими лигандами приведены в табл. 66. Так, например, если в качестве основного комплексообразователя в растворе ис- [c.303]

Как видно из приведенных в табл. 1 экспериментальных данных, процент замещения никеля в сульфиде ионами меди в обоих случаях составляет примерно одну и ту же величину. Следовательно, замораживание не снижает полной сорбционной емкости сульфида никеля, что уже было замечено нами ранее для других классов химических соединений [И]. [c.74]

При постоянных условиях результаты замещения в замороженном состоянии, проведенного в соответствии с указаниями, приведенными в табл. 2, могут считаться удовлетворительными. Трудности иногда возникают из-за слишком высокой температуры при замещении или из-за образования кристаллов льда при замораживании. [c.22]

Так как эти процедуры разработаны для микроанализа, то контраст от объекта обычно очень слабый. Тем не менее возможно ориентироваться при наблюдении клеток и тканей. При наличии небольшого опыта и с помощью сравнительных исследований, использующих материал, препарированный стандартным способом, может быть проведен анализ различных участков в клетке с пространственным разрешением 0,1—0,2 мкм. Процесс изотермической фиксации [457, 458] — разновидность высокотемпературного замораживания-замещения — использовался для фиксации биологического материала при относительно высоких температурах (253 К) без нарушения конфигурации льда или гидратированного состояния кристаллической матрицы. Несмотря на то что структурная сохранность оказывается достаточно хорошей, использование высоких концентраций Na l и DMSO в фиксирующей жидкости для получения необходимого согласованного локального прогиба помешало бы использованию этой методики в препарировании образцов для рентгеновского микроанализа. [c.304]

Развитие способов подготовки образцов наиб, активно происходит в области электронно-микроскопич. исследования структуры полимерных материалов и влагосодержаших объектов и связано преим. с разработкой криогенных методов (сверхбыстрое замораживание в струе хладона, прижим к металлич. блоку, охлаждаемому жвдким Не, низкотемпературное замещение воды орг. р-рителями, криоультратомия, криомикроскопия и др.). Эти методы позволяют избежать нарушений структуры и локального состава образцов, наблюдаемых при хим. фиксации и нанесении электропроводных покрытий. [c.441]

При изучении структуры почвы в РЭМ требуется, чтобы жидкость, которая содержится в виде водного раствора, была удалена из обр азца, прежде чем он помещается в прибор. Если образец почвы имеет высокое содержание влаги и/или имеется тенденция к усадке его при потере влаги, то высушить образец, не нарушая ело исходной структуры, оказывается затруднительным [269]. Для удаления воды из пор разработано шесть методов [270]. Эти методы следующие 1) сушка в печи, 2) сушка на воздухе, 3) сушка во влажной среде, 4) сушка замещением, 5) лиофильная сушка и 6) сушка в критической точке. Первые два метода просты и понятны. Сушка во влажной среде представляет собой процесс обезвоживания образца при контролируемом уровне влажности. При сушке замещением перед высушиванием производят замену жидкости, имеющейся в порах почвы, жидкостью с низким поверхностным натяжением, такой, как метанол, ацетон или изо-пентан [269]. Последние два метода являются теми же, что используются биологами, и описаны в гл. 11. В основном для твердых почв с низкой влажностью наиболее часто при меняет-ся метод сушки на воздухе, в то в ремя как почвы, имеющие хрупкую структуру, могут быть высушены лиофильной сушкой при быстром замораживании [269]. [c.175]

Исходя из ассоциативного строения целлюлозы и принимая во внимание модель тонкой структуры целлюлозы, можно предположить, что при замораживании низкозамещенной метилцеллюлозы в раствор переходят пе отдельные ее макромолекулы, а ассоциаты. Чем меньше степень замещения мети.чцеллюлозы и величина ее деструкции, тем крупнее, очевидно, эти ассоциаты. Для доказательства этого по- [c.73]

Данные табл. 8.6 показывают, что низкозамещенные нитраты древесных целлюлоз в интервале степени замещения —20 могут полностью растворяться в 6%-ном растворе NaOH без замораживания в блок при температуре около 266 К. [c.178]

С.ц. и Na-С.ц. не растворяются в низкомолекулярных спиртах и кетопах. Растворимость Na-С.ц. в 6%-ном р-ре NaOH или NH4OH зависит от стеиени замещения продукты со степенью замещения до 0,1 растворяются при замораживании до 0,2—при комнатной температуре Na-С.ц. при степени замещения выше 0,3 растворимы в воде (сами сульфаты растворимы в воде при степони замещения выпю 0,5). С. ц. и их соли пе выпадают из водных растворов при нагревании. Na-С.ц. практически пе изменяют поверхностного натяжения воды. [c.282]

Обработка ДНК-азой. Для обработки ДНК-азой пригодны препараты, фиксированные замораживанием с замещением спиртом, метанолом, смесью Карнуа (применение формалина следует избегать). Раствор ДНК-азы готовят из кристаллического препарата ДНК-азы. Берут 0,25—0,5 мг на 1 мл ДНК-азы в 0,03 М MgS04 (73 мг MgS04 на 100 мл раствора). Если необходимо привести раствор к pH 6, то это делают с помощью 0,1 н. NaOH. Инкубация идет при 37° и длится в течение 1— [c.161]

Растворимость производных целлюлозы в воде и водных растворах щелочей зависит от температуры чем ниже температура растворения, тем при меньших значениях степени замещения происходит растворение. Растворимость эфиров целлюлозы резко повышается при замораживании. Так, многие препараты эфиров целлюлозы со степенью замещения у = 10—20 растворяются при замораживании в 4—6% растворе NaOH [11]. [c.33]

Получены и исследованы квазилинейчатые спектры поглощения и люминесценции большого числа многоатомных молекул. Алифатическая матрица оказалась универсальной для большого числа органических веществ благодаря своим физико-химическим и кристаллохимическим особенностям. Кристаллохимические исследования показали многообразие структурных форм, которые могут образовывать при замораживании цепочечные молекулы предельных углеводородов и, в особенности, четные члены гомологического ряда [503, 504]. Структура кристаллов норхмальных парафинов характеризуется довольно плотной упаковкой (коэффициент упаковки /С=0,6- 0,8), и имеющиеся в структуре пустоты малы по сравнению с самими молекулами, так что заполнение этих пустот молекулами органической примеси, по-видимому, маловероятно. В связи с этим при замораживании раствора ароматического углеводорода в нормальном парафине наиболее вероятным является образование твердого кристаллического раствора по типу замещения. Для образования таких кристаллических растворов необходимым условием является близость формы и размеров молекул исходных соединений. Только при выполнении данных условий замена молекул в решетке матрицы молекулами органической примеси не вызывает существенных деформаций в кристаллической структуре замороженного растворителя. [c.236]

ЮЛ Она и ее соли нерастворимы в низкомолекулярных спиртах и кетонах. Соли щелочных металлов и аммония со степенью замещения до 10 растворяются в 6%-ном растворе NaOH или NH4OH при замораживании, со степенью замещения до 20 — при комнатной температуре соли со степенью замещения выше 30 растворимы в воде. В отличие от солей КМЦ соли СЭЦ и большинства металлов, за исключением тория и циркония, при степени замещения 55—95 растворяются в воде. [c.177]

Нитроцеллюлоза с очень низкой степенью замещения (0,20— 0,05), растворимая при замораживании в 6%-ном растворе едкого натра, может быть получена путем нитрации смесями, содержащими 32% НКОз, 32—31 % Н2504 и 32—37% Н2О [2]. [c.366]

Простые эфиры целлюлозы имеют в настоящее время большое техническое значение и широко применяются в промышленности. В зависимости от природы заместителя, степени замещения и молекулярного веса изменяются и свойства простых эфиров, а следовательно, и область их применения. Растворимые в органических растворителях термопластичные простые эфиры целлюлозы применяют для производства пластмасс и лаков. Так, из этилцеллюлозы изготовляют этилцеллюлозный этрол, идущий, например, на облицовку автоштурвалов. Однако наибольший интерес представляет группа простых эфиров целлюлозы, растворимых в воде — в самом распространенном и самом дешевом растворителе. К этой группе относятся метилцеллюлоза, этилцел-люлоза, карбоксиметилцеллюлоза, оксиэтилцеллюлоза и смешанные эфиры на их основе. Благодаря своим свойствам (растворимости, загущающей и клеящей способности и т. д.) эти эфиры успешно конкурируют с природными водорастворимыми продуктами (крахмал, желатин и др.), а в целом ряде случаев превосходят их и являются незаменимыми. В то же время значительный интерес представляют низкозамещенные простые эфиры целлюлозы, нерастворимые в воде, но растворяющиеся в щелочи при комнатной температуре или при замораживании. [c.386]

В течение 1 ч обрабатывают 10 г целлюлозы при комнатной температуре 200 мл 19%-ного раствора едкого натра. Полученную алкалицеллюлозу отжимают на прессе или центрифуге до 2,4-кратного веса (от веса воздушно-сухой целлюлозы) и тщательно размельчают на специальном измельчителе или вручную (обязательно в перчатках). Алкилирование проводится так же, как и в предыдущем случае, но без добавки окиси этилена. Автоклав в течение 90 мин нагревают до 100° и выдерживают при этой температуре в течение 180 мин. Полученный эфир переносят в большое количество горячей воды, нейтрализуют уксусной кислотой в присутствии фенолфталеина, промывают и сушат. В полученном эфире определяют выход, растворимость в 6%-ной NaOH при замораживании, степень замещения и зольность. [c.391]

Преимущество замещения в замороженном состоянии перед замораживанием—высушиванием заключается в его простоте. Недостаток же метода замещения в замороженном состоянии в первую очередь заключается в том, что он по своей природе представляет собой химическую (хотя и очень мягкую) фиксацию, которая при температурах около — 80°С практически прекращается или же протекает очень медленно. Кроме того, возможности метода ограничены тем, что для высушивания и фиксации применимы лишь такие среды, которые остаются жидкими при низких температурах. Метод замещения в замороженном состоянии обеспечивает прекрасную сохранность гликоге- [c.22]

В цитохимических исследованиях все большее значение приобретает метод дополнительной импрегнации тонких срезов радиоактивными веществами. Это позволяет избирательно метить отдельные компоненты клетки. В исследовании водорастворимых радиоактивных веществ помимо методов замораживания—высушивания и замещения в замороженном состоянии можно использовать метод криоультрамикротомии. [c.288]

Подготовка срезов (можно использовать криостатные срезы, фиксированные в холодном ацетоне или этаноле, замороженные срезы, фиксированные в формалине, срезы материала, фиксированного замораживанием— высушиванием, замещением в замороженном состоянии или после фиксации на холоду и парафиновой заливки). [c.297]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология