Метод накопительных культур

Накопительные культуры. Метод накопительных культур и в принципе, и на практике очень прост. Для накопления нужны такие условия, при которых данный организм преодолевает конкуренцию остальных. Подбирая ряд факторов (источники энергии, углерода, азота, акцепторы электронов, газовую атмосферу, освещенность, температуру, pH и т.д.), создают определенные условия и инокулируют среду смешанной популяцией, какая имеется, например, в почве или в иле. Наиболее приспособленный к такой среде микроорганизм растет и вытесняет все остальные, сопутствующие организмы. Путем многократных пересевов в такую же жидкую среду и посева на твердую среду того же состава можно без труда выделить преобладающий (накопленный) штамм. Частый пересев с жидкой среды на жидкую предотвращает рост сопутствующих организмов, которые могли бы использовать продукты вьще-ления или даже автолиза клеток первичной культуры. Лучшим материа- [c.185]

При использовании метода накопительных культур использовать природный аналог данного синтетического соединения или их смесь. [c.341]

Для ингибирования бактериальной коррозии, стимулируемой накопительными культурами СВБ, и подавления жизнедеятельности последних разработаны методы защиты с применением ингибиторов-бактерицидов из классов нитропарафинов, селенсодержащих би- и тетрациклических органических соединений, вводимых в интервале концентраций 0,1...0,2 г/л. При этом практически полностью предотвращается образование сероводорода. [c.89]

Высев из накопительной культуры микроорганизмов, относящихся к факультативным аэробам или факультативным анаэробам, для получения изолированных колоний проводят методом глубинного посева. [c.78]

Накопительные и чистые культуры микроорганизмов. Из-за малых размеров микроорганизмов работа в лаборатории проводится не с одной особью, а с популяцией организмов, или культурой. Культура микроорганизмов, состоящая из клеток одного вида, носит название чистой культуры. Если число видов два или больше, то говорят о смешанной культуре. При выделении чистой культуры из природных местообитаний, где микроорганизмы в большинстве случаев растут в виде смешанных популяций, на первом этапе обычно пользуются предложенным С. Н. Виноградским методом получения накопительных культур, в которых преобладают организмы определенной группы. Накопление желаемых микроорганизмов происходит за счет создания элективных условий культивирования, благоприятных для данной группы. Другие организмы, также присутствующие в пробе, в этих условиях либо не размножаются, либо характеризуются незначительным ростом. [c.76]

Для размножения любой бактерии (независимо от целей) необходимо обеспечить подходящее биофизическое окружение и биохимические питательные компоненты. В гл. 6 приведены методы контроля таких биофизических факторов, как pH, температура, подача и удаление кислорода, и другие. В гл. 7 рассмотрены потребности в питательных веществах, состав синтетических и комплексных сред и количественные определения роста бактерий. Умелое обращение с биофизическими, биохимическими и биологическими факторами приобретает особую важность в получении накопительных культур и последующего выделения бактерий в виде чистой культуры (гл. 8). [c.163]

Из накопительных культур бактерии обычно выделяют путем их пространственного отделения от других форм на твердой среде, где они растут в виде колоний. Для микроорганизмов, не растущих на твердых средах, можно использовать метод предельного разведения, последовательно перенося клетки в отдельные пробирки с жидкой средой. Поскольку обычные методы выделения не дают абсолютной гарантии чистоты получаемых культур, некоторые исследователи применяют более [c.278]

В этой главе мы приведем специфические примеры огромного многообразия и нередко изощренности методов накопления, используемых в бактериологии. Во многих случаях для получения накопительной культуры определенной бактерии используют несколько различных подходов. Основное внимание в этой главе будет уделено практическим аспектам получения накопительных культур и выделения бактерий, однако в конце главы приведены ссылки на общие обзоры [1—4], в которых можно найти подробную информацию об используемых при этом принципах. Получение накопительных культур и выделение мутантных штаммов рассматриваются в разд. 13.4—13.6. [c.279]

Использование антисыворотки может обогатить минорную фракцию в популяции, состоящей из двух видов микроорганизмов. При исследовании смешанной культуры, в которой присутствуют два вида морской спириллы —крупные и мелкие, Линн и Криг [45] обнаружили, что мелких спирилл значительно больше. Это делало невозможным получение отдельных колоний крупных спирилл методом посева в чашки. Более того, для этих целей не подходил ни один из многочисленных методов селекции. Для получения накопительных культур крупной спириллы авторы выделили мелкую спириллу и использовали ее для иммунизации кролика. Когда полученную антисыворотку добавили к смешанной культуре, мелкие спириллы агглютинировали и осели на дно пробирки. Для получения отдельных колоний методом посева в чашки использовали надосадочную жидкость, содержащую теперь много крупных спирилл. [c.295]

Естественный отбор направлен на сохранение особей, которые имеют преимущества в скорости роста, достижения репродуктивного возраста, в большей плодовитости по сравнению с особями других генотипов и т.д. В природных экосистемах в результате естественного отбора постоянно происходит селекция по признакам, имеющим адаптационную ценность. Так, в почвах, загрязненных химическими соединениями, естественный отбор не только сохраняет микроорганизмы, способные использовать эти соединения, но и увеличивает число утилизирующих загрязняющие вещества с большей активностью, с большей скоростью и т.п. На этом основаны используемые в микробиологии методы обогащенных и накопительных культур, для изолирования из природы штаммов, усваивающих те или иные источники углерода или обладающих другими признаками, имеющими адаптационную ценность (устойчивость к каким-либо соединениям, металлам, радионуклидам, к определенным значениям pH, Т и др.). [c.39]

Изолированные колонии аэротолерантных микроорганизмов и факультативных анаэробов чаще получают методом глубинного посева. Для этого плотную питательную среду предварительно разливают в пробирки по 15—20 мл и стерилизуют. Непосредственно перед посевом пробирки помещают в кипящую водяную баню, чтобы среда расплавилась. Высев проводят из разведений накопительной культуры в стерильной водопроводной воде. Разведения готовят с таким расчетом, чтобы при высеве 0,5—1,0 мл разведения получить изолированные колонии. Степень разведения определяется плотностью накопительной культуры. Высевы делают, как правило, из трех-четырех последних разведений. Для этого в пробирку с расплавленной и остуженной до 48—50° агаризованной средой вносят 0,5—1,0 мл одного из разведений накопительной культуры. Посевной материал тщательно перемешивают, вращая пробирку между ладонями. Затем около пламени горелки вынимают из пробирки пробку, обжигая края пробирки в пламени горелки, и быстро выливают содержимое пробирки в чашку Петри. После того как агаризованная среда застынет, чашки Петри помещают в термостат. Колонии, выросшие в, толще среды, вырезают стерильным скальпелем или извлекают стерильными капиллярными трубками или просто петлей и переносят в жидкую среду, благоприятную для развития выделяемых микроорганизмов. [c.77]

Особые трудности возникают при выделении чистых культур облигатных анаэробов. Если контакт с молекулярным кислородом не вызывает сразу же гибели клеток, то посев проводят на поверхность среды в чашки Петри, но после посева чашки тотчас помещают в анаэростат. Однако чаще пользуются методом разведения. Сущность его заключается в том, что разведения накопительной культуры проводят в расплавленной и охлажденной до 45—50 агаризованной питательной среде. Делают 6—10 последовательных разведений. Затем среду в пробирках быстро охлаждают и заливают поверхность слоем стерильной смеси парафина и вазелинового масла (соотношение 3 1), что препятствует проникновению воздуха в толщу агаризованной среды. [c.77]

Капельный метод Линднера используют при работе с крупными микроорганизмами дрожжами, мицелиальными грибами, водорослями. Порядок работы следующий. Накопительную культуру разводят в стерильной среде с таким расчетом, чтобы в небольшой капле были одиночные клетки микроорганизмов. Затем на поверхность стерильного покровного стекла стерильным стальным пером наносят ряд капель приготовленного разведения. Готовят препарат висячая капля . Нанесенные на покровное стекло капли просматривают под микроскопом и отмечают те, в которых обнаружена только одна клетка. После этого препарат помещают в термостат во влажную камеру, которой обычно служит чашка Петри с увлажненной фильтровальной бумагой на дне. Череа 12—24 ч отмеченные капли вновь микроскопируют. Те капли, в. которых наблюдается образование микроколоний, осторожно снимают с покровного стекла кусочками стерильной фильтровальной бумаги и переносят в пробирки со стерильной средой. [c.79]

Чистую культуру из накопительной получают из одной клетки или отдельной колонии. В последнем случае из накопительной культуры после разведения делают высев на плотную среду по методу Коха. Каждую образовавшуюся колонию считают развившейся из одной клетки. [c.52]

Признание огромной роли микроорганизмов в биологически важных круговоротах элементов на Земле связано с именами Сергея Николаевича Виноградского и Мартинуса Бейеринка. С. Н. Виноградскому принадлежит открытие уникального образа жизни — хемолитоавтотрофии и изучение серных и нитрифицирующих бактерий. С. Н. Виноградский и М. Бейеринк независимо друг от друга показали, что фиксацию молекулярного азота способны проводить только микроорганизмы, и выделили свободноживущих и симбиотических азотфиксаторов. С. Н. Виноградским разработан метод накопительных культур. [c.8]

Направленный отбор является основой метода накопительных культур, используемого для получения микроорганизмов с определенными физио-лого-биохимическими свойствами, повышающими адаптацию популяций к условиям окружающей среды, а также основой для автоселекции штаммов, отличающихся селективными признаками, сообществ и биоценозов, приспособленных к заданным условиям. [c.37]

Методом накопительных культур из различных почв обычно удается выделить микроорганизмы, окисляющие все три изомера монофторбензой-ной кислоты, но полной минерализации их не наблюдается - в среде накапливаются фтормуконовые кислоты. [c.383]

Накопительной называют такую культуру, в которой преобладают представители одной физиологической группы или даже одного вида микроорганизмов. Метод накопительных культур был введен в практику микробиологических исследований С. Н. Виноградским и М. Бейеринком. Сущность его за ключается в создании элективных, т. е. избирательных условий, которые обеспечивают преимущественное развитие желаемых микроорганизмов или группы микроорганизмов из смешанной популяции. [c.71]

В связи с тем что в США стоки, образуемые при переработке древесины, являются одним из основных отходов, содержащих сахара. ompere (1983) сделана попытка выделить культуры, способные превращать сахара этих отходов в псйтральные растворители, главным образом в бутанол, ацетон, 2-пропанол, этанол. Отходы деревообрабатывающей промышленности включают щелока, гидролизаты и различные жидкости, применяемые для промывки. Бактерии выделяли методом накопительных культур. Всего выделено 240 иттаммов, образующих бутанол, [c.197]

Поиск штаммов, деградирующих ДБТ и 4,6-ДМДБТ, осуществляли двумя методами с использованием накопительных культур, выделенных из почв, загрязненных нефтепродуктами, и скрининг среди штаммов из лабораторной коллекции микроорганизмов [c.125]

В качестве первого шага исследований необходимо было выделить микроорганизмы фенолдеструкторы. Микроорганизмы для деструкции фенола были выделены из стоков коксохимического и нефтехимического производства обычными методами ступенчатой селекции (накопительной культуры) путем выращивания популяции в колбах на качалке на минеральной среде с фенолом с постепенным повышением его концентрации в среде культивирования. В результате первоначально были получены два консорциума микроорганизмов с доминированием дрожжей (при pH 5,0) и с доминированием бактерий (при pH 7,0). Эти изоляты были способны разлагать фенол в аэробных условиях при выращивании в колбах на качалке при концентрации фенола 2 г/л в среде с минеральными компонентами питания при 28-32°С менее чем за 20 ч. [c.231]

Чистая культура из накопительной может быть получена ИЛ1И из одной клетки, или из отдельной колонии. В последнем случае из накопительной культуры или после ее разведения делают высев на плотную среду по методу Коха. [c.78]

Широко распространена Saproiegnia, легко поддающаяся выделению и культивированию. Методом приманки нетрудно получить ее накопительную культуру, если в чашку, заполненную прудовой водой, положить мертвую муху таким образом, чтобы она лежала с распростертыми крыльями (ногами вниз) на поверхности воды. Уже через несколько дней все тельце мухи будет покрыто гифами и спорангиями. Под микроскопом хорошо видно, как образуются спорангии и как выскальзывают из них зооспоры (рис. 5.4). [c.162]

Мутанты, конститутивно образующие катаболические ферменты. Накопительные культуры такого рода мутантов можно получить путем частой смены субстратов. Если клетки конститутивно образуют ферменты, необходимые для использования субстрата А, то после переноса клеточной популяции с субстрата В на субстрат А они точас начинают расти с максимальной скоростью клеткам же индуцибельного дикого типа для достижения максимальной скорости роста необходима определенная лаг-фаза (чтобы синтезировать ферменты для роста на субстрате А). После ряда генераций клетки снова переносят на среду с субстратом В и дают им расти до тех пор, пока ферменты, участвующие в использовании субстрата А, не будут достаточно сильно разбавлены . После многократного повторения такой процедуры конститутивные мутанты сильно обгоняют в росте клетки дикого типа с индуцибельными ферментами. Таким путем были выделены, например, мутанты Е. соН, конститутивно образующие ферменты, необходимые для использования Лактозы. В других методах отбора пользуются таким приемом, как подавление индукции при помощи структурных аналогов субстрата. Метилтио алактозид может, например, подавить у Es heri hia oli индукцию й(а/ Оперона, вызываемую галактозой. [c.498]

Добавление бацитрацина (2 ед./мл) и новобиоцина (2 мкг/мл) к среде с агаром для бруцелл (разд. 8.5.14) позволяет выделять С. fetus из испражнений и кишечного содержимого крупного рогатого скота, овец, свиней и птиц. Этот метод можно использовать вместе с методом фильтрации, описанным ранее для получения накопительных культур С. fetus (разд. 8.1.16). [c.301]

Для получения накопительных культур Desulfotoma ulum a eioxidans [81], которая использует не лактат, а ацетат, применяют среду Виддла и Пфеннига (разд. 8.5.57), содержащую ацетат С помощью фазово-контрастной микроскопии слет,ят за появлением подвижных прямых или слегка изогнутых палочек толщиной 1 —1,5 мкм и длиной 3,5—9 мкм, которые имеют споры, а также яркие преломляющие участки. Для получения отдельных колоний используют метод встряхивания пробирок. После 3 нед инкубации колонии отбирают и нагревают 10 мин при 70 °С такая тепловая обработка помогает выделению D a etoxidans, когорый является спорообразующим микроорганизмом. [c.313]

Поскольку сульфид, образуемый D. a etoxidans, ингибирует рост данной бактерии (предельная концентрация H2S, которую она выдерживает, составляет 0,1%), был предложен альтернативный метод получения ее накопительной культуры, при котором среду, содержащую серу, инокулируют не только пробами ила и воды, но также чистой культурой зеленых серных бактерий из сем. СМогоЫасеае. Эти бактерии постоянно потребляют выделяемый в процессе роста D. a etoxidans H2S и окисляют его с образованием элементной серы, которая [c.314]

При проведении диагностических тестов организм, используемый для инокуляции, должен быть свежепе-ресеянным, в хорошем физиологическом состоянии. Старые накопительные культуры, которые могут содержать в большом количестве мертвые или отмирающие клетки, не пригодны для этих целей. Инокулированную диагностическую среду инкубируют в условиях, оптимальных для жизнедеятельности организмов или для проявления изучаемого свойства (например, оптимальные температура, pH, состав газов и ионный состав). Методы тестирования следует использовать не только в отношении испытуемого организма, но также и в отношении штаммов, для которых наличие или отсутствие проверяемого свойства уже известно. Такой подход обеспечивает проверку надежности реактивов и сред. [c.10]

Особое внимание при лабораторных испытаниях уделяется подбору соответствующих тест-организмов, так как от их активности зависит надежность полученных результатов. Для материалов, методы испытаний которых утверждены ГОСТом, предложен набор грибов, который йеодинаков для различных материалов. Кроме того, в число тестов рекомендуется обязательно включать микроорганизмы, выделенные непосредственно из поврежденного материала и вызвающие его коррозию. В ряде работ наряду с чистыми культурами предложено использовать накопительные культуры. [c.675]

Вьщеление микроорганизмов, важньк для гидрометаллургии, проводят путем высева соответствующих проб руды или растворов на питательные среды. Таким путем получают накопительные культуры. Даже при использовании элективньк сред накопительные культуры помимо выделяемых микроорганизмов содержат и другие виды. Поэтому выделение чистых культур зачастую представляет значительные затруднения. Ниже приводятся методы получения как накопительных, так и чистых культур те-рий, наиболее перспективных для использования в гидрометаллургии. [c.51]

Для вьщеления чистой культуры T.ferrooxidans можно использовать метод разведений. Из накопительной культуры, в которой по данным анализов имеется, например, 10 - 10 клеток T.ferrooxidans берут 1 мл раствора и разбавляют в ЮЛ 00. .. 1 млн. и 10 млн. раз. Можно ожидать, что в последние разведения попадут единичные клетки бактерий. Из последних разведений делают предпочтительно рассевы на среду 9К с соответствующими источниками энергии (Fe , сульфидные минералы). [c.52]

Выделение чистых культур уксуснокислых бактерий из накопительных обычно производят общепринятыми методами на двух агаризованных средах дрожжевой воде с 3 % глюкозы и с 3 % этанола. В обе среды добавляют 0,5 % СаСОз. После семи суток инкубирования посевов отбирают колонии на среде с глюкозой с отчетливыми зонами растворения мела вследствие образования глюконовой кислоты, на среде с этанолом — с белым диффузным ореолом, возникающим в результате вторичного образования СаСОз ввиду окисления бактериями Са-ацетата. Посевы из отобранных колоний производят на те же жидкие или агаризован-ные питательные среды если с глюкозой, то с добавлением СаСОз, если со спиртом, то без мела. Известны и другие относительно простые методы выделения уксуснокислых бактерий. [c.481]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология