Радиоавтография эмульсии

Ядерная мелкозернистая эмульсия обладает достаточно большой чувствительностью к р-излучению, изготовляется с большим содержанием бромистого серебра. Разрешающая способность ее выше, чем у диапозитивной эмульсии. Этот тип эмульсии может быть использован во всех методах радиоавтографии. [c.205]

Как видно из рис. 1, в самой тонкой части клина эмульсии толщина чувствительного слоя слишком мала для того, чтобы образовать детали-рованный радиоавтограф. По мере утолщения клина, качество микрорадиоавтографов улучшается и, пройдя оптимальные условия для своего образования, качество радиоавтографов ухудшается вплоть до слияния деталей в одну уплотненную массу зерен серебра. [c.208]

В одном из исследований следы радиоактивного олова были введены в сплав при его выплавке а затем приготовленный из металла шлиф был приведен в контакт с мелкозернистой светочувствительной эмульсией. Полученный снимок, который называют радиоавтографом, был увеличен (рис. 73). Снимок характеризует присутствие атомов меченого олова, так как только оно дает излучение, приводящее к потемнению фотоэмульсии.- Рассмотрение снимка позволяет заключить, что олово распределяется по границам зерен металла. Оно ослабляет связь между ними и уменьшает жаропрочность. [c.286]

Четкость изображения на радиоавтографах, как известно, зависит от энергии частиц, а именно обладая большой проникающей способностью, частицы с высокой энергией дают расплывчатые изображения, с малой — более четкие. Поэтому при методе микрорадиографии целесообразно использовать изотопы, испускающие частицы с малой энергией. В этом случае на эмульсию пленки оказывают эффект лишь частицы поверхностного слоя, ибо в глубоких слоях происходит самопоглощение их. Именно поэтому был выбран радиоактивный кальций. [c.82]

Один из наиболее полезных методов обнаружения радиоактивных изотопов основан на потемнении фотографической эмульсии при действии на нее испускаемых частиц. Напомним, что именно это свойство урановой руды привело Беккереля к открытию радиоактивности. Исследуемый образец, радиоавтограф которого хотят получить, приводят в контакт с фотографической пластинкой или пленкой, защитив ее от света, и оставляют в таком положении на определенное время, которое зависит от интенсивности излучения и от чувствительности эмульсии. Радиоавтография особенно полезна для обнаружения небольших количеств радиоактивных соединений на бумажных хроматограммах. [c.473]

Фотографические эмульсии [10]. Исторически этот метод регистрации радиоактивности сложился при изучении общего почернения фотографических негативов, наблюдаемого после обычного химического проявления фотоматериалов. Вскоре этот метод был вытеснен ионизационными измерениями, но совсем недавно он вновь появился в виде кассет с фотопленкой, используемых для контроля за облучением персонала (см. раздел Г) и в 7-дефектоскопии (аналогичной рентгеновскому просвечиванию) литья и других тяжелых металлических деталей (с целью выявления скрытых дефектов). Метод радиоавтографии обнаруживает распределение радиоактивного индикатора (предпочтительно а- или мягкий р-излучатель) при изучении фотопластинки, в контакте с которой предварительно находился тонкий срез материала (возможно, биологического). [c.153]

Если требуется лучшее разрешение деталей изображения, то необходимо несколько изменить вышеприведенный метод. 1) Верхний предел разрешающей способности определяется зернистостью проявленной фотографической эмульсии. В продажных рентгеновских пленках размер зерна довольно велик. В этом отношении гораздо лучше диапозитивные фотопластинки средней контрастности. Однако из-за их низкой чувствительности приходится увеличивать выдержку почти в 10 раз. 2) Если радиоавтограф отделяют от объекта и изучают его отдельно, то установить соотношение 1 1 между размерами объекта и отпечатка при сравнительно больших [c.141]

Дальнейшего улучшения можно добиться путем уменьшения толщины изучаемых срезов и особенно уменьшением размеров зерна фотографической эмульсии, так же как, по возможности, и устранением фона, вызванного вуалированием негатива. На рис. 18 дан полученный Бойдом радиоавтограф щитовидной железы крысы, в которую был введен в этом случае применялась тонкая иленка эмульсии NTB фирмы Истмен-Кодак. [c.142]

Рис. 9-55. Схема эксперимента, позволяющего судить о характере перемещения в течение 8-фазы. Вновь синтезированную ДНК в культуре клеток человека подвергали импульсному мечению [ Н]-тимидином. А. Клетки лизировали и ДНК растягивали на предметном стекле, которое затем покрывали светочувствительной эмульсией Через несколько месяцев светочувствительный слой проявляли, при этом становился видимым ряд серебряных зерен вдоль радиоактивной ДНК. В. Тот же эксперимент с последующей инкубацией в среде, не содержащей метку. Синтезированная в этих условиях дополнительная ДНК характеризуется пониженным уровнем радиоактивности. Оказалось, что гранулы серебра в паре темных треков (Б) как бы расходятся в противоположных направлениях, что свидетельствует о продвижении вилки в разные стороны от точки начала репликации (см. рис. 5-49). ДНК на данном рисунке выделена цветом только для того, чтобы облегчить понимание радиоавтографа. В

Повышенный фоновый счет обнаруживается, когда 1) используется старая эмульсия, либо радиоавтографы экспонируются вблизи радиоактивных источников, таких, как 2) увеличивается время экспозиций 3) имеет место неадекватное удаление тритированных предшественников или кислоторастворимых компонентов. [c.179]

XIV. Выявите гибриды радиоавтографией, используя пленку или жидкую эмульсию. [c.311]

Радиоавтография с жидкой эмульсией [c.313]

Окраска радиоавтографов, покрытых жидкой эмульсией [c.313]

Пригодна для радиоавтографии при световой и электронной микроскопии, особенно для Р-частиц. Эту эмульсию следует перед употреблением разводить водой [c.282]

Чтобы изучить образование белков в динамике и установить, например, изменения белковых структур в процессе их хранения, можно ввести в органы или ткани предшественник белка, меченный тритием или углеродом " С, и с помощью радиоавтографии выявлять радиоактивные соединения. При световой и электронной микроскопии биологический материал обрабатывают с таким расчетом, чтобы получить тонкие или сверхтонкие срезы, которые затем покрывают подвижной ядерной эмульсией, как, например, эмульсия Ильфорсд Г5 или Л4 (1Иог5с1 Оз или Ь4) по методу Ларра и Дроза [52]. После удаления эмульсии местонахождение радиоактивных участков определяется по присутствию зерен восстановленного серебра, которые задерживают фотоны или электроны. - [c.128]

Фотографические методы основаны на измерении почернения фотографических пластинок или пленок под действием радиоактивного излучения или на наблюдении в фотоэмульсии треков отдельных частиц, испускаемых радиоактивным препаратом. При действии ионизирующих излучений на фотоэмульсию в зернах AgBr образуются центры скрытого изображения, что при проявлении вызывает почернение эмульсии в месте прохождения частицы (образование треков ). В зависимости от рода излучений, действие которых на фотоэмульсию неодинаково по интенсивности, различают а-, р-, у-радиографические измерения. Методом радиографии решаются следующие задачи идентификация радиоактивных изотопов, определение их концентрации, измерение периода полураспада, оценка радиохимической чистоты препарата, получение картины распределения радиоактивного изотопа по поверхности образца (радиоавтография). При этом обычно применяют тонкослойные пластинки и специальные эмульсии, созданные для целей ядерной физики. Если не рассматриваются треки отдельных частиц, определение интенсивности излучения заключается в сравнении почернения эмульсии исследуемого образца и препарата с известной активностью (эталона) под действием [c.163]

Уменьшение площади образца. При радиоавтогра-фировапии образец располагают на близком расстоянии от эмульсии (или контактируют с ней) скорость потемнения пленки зависит от количества радиоактивного излучения, испускаемого с единицы новерхности образца В связи с этим скорость потемнения пленки может быть во много раз увеличена, если радиоактивный материал сконцентрировать на уменьшенной площади. Поскольку самоэкранирования не происходит, увеличение скорости потемнения должно быть примерно пропорционально уменьшению илощади образца, по крайней мере до размеров 1 мм. Практически это можно пояснить на примере с образцом, дающим на счетчике лишь 2 имп/мин. При концентрировании этого количества радиоактивного материала на поверхности 1 мм (около 1/500 площади круга диаметром 25,4 мм), радиоавтограф даст плотность потемнения, равную 0,6, все еще после трехдиевной экспозиции. [c.245]

При снятии на пленку радиоавтограмм одновременно от нескольких образцов соседние образцы могут давать фоновый вклад. Наибольшая опасность возникает, когда ио соседству друг с другом находятся очень слабые и очень сильные образцы. Такого расположения надо избегать. Фоновый вклад оказывается менее опасным, когда образцы и эмульсия плотно прилегают друг к другу. Для р-излучателей это можпо проверить путем размещения мея<ду образцами и пленкой перфорированной металлической пластинки с отверстиями так, чтоб [Л излучение от каждого образца достигало пленки через свое индивидуальное отверстие. Исиользование перфорированнох пластинки определенной толщины также полезно для накапливания радиоактивности в том случае, когда материал неоднородно распределен. Например, на рис. 3, а показан контактный радиоавтограф слабого фотографического изображения, которое было тонировано 1 . Оп представляет сильно иитопсивное [c.247]

Рис. 3. Радиоавтограф а — очень слабо про-явлвипого изображения, тонировашюго б — этого же тонированного изображения, по отделенного от эмульсии перфорированной латунью толщиной 6,35 мм.

Две капли такой эмульсии дают слой толщиной 18 —22 1. Время проявления в универсальном метол-гидрохиноновом проявителе составляет 3—5 мин. Фиксирование проводят в кислом фиксаже в течение 3—6 мин., после чего стекла промывают 5—10 мин. в проточной воде при температуре не выще 20°, а затем высущивают при комнатной температуре. Высушенные препараты заделывают в канадский бальзам. Принимая во внимание, что операции по нанесению капель эмульсии и разравниванию протекают в условиях слабого иеактиничного освещения, необходимо указать на громоздкость и неудобство такого способа нанесения эмульсии на срез. Кроме того, способ механического разравнивания эмульсии всегда приводит к образованию скрытого изображения, которое, проявляясь наравне с радиоавтографом, образует многочисленные ложные треки и полосы, искажающие автограф. Неравномерность толщины слоя эмульсии также неблагоприятно сказывается на качестве радиоавтографов. [c.207]

Be bAia ценным методом является также радиоавтография. Этот метод существует в двух вариантах. Первый из них напоминает методику, которой пользуются также и для исследования ряда других объектов меткой служит при этом Н (источник мягкого р-излучения), обычно в форме тритиированно-го тимидина, включающегося в ДНК, что дает возможность получать изображения молекулы с помощью достаточно чувствительной фотографической эмульсии. В руках Кэрнса этот метод оказался превосходным орудием для оценки молекулярных размеров ДНК вирусного и да ке бактериального происхождения. Полученные им результаты хорошо дополняют данные электронной микроскопии и полностью согласуются с моделью Уотсона — Крика. [c.143]

А. Микрофотография конъюгационной смеси, показывающая два скрещивающихся комплекса, обра-зованных между длинными клетками Hfr и круглыми клетками F—. . Радиоавтограф смеси, приготовленной через 50 мин после начала контакта между клетками. Зерна, образуемые в радиоавтогра-фической эмульсии при распаде H-атомов, имеют вид ярких точек. Две удлиненные бактерии Hfr плотно покрыты зернами, что свидетельствует о содержании в этих бактериях тяжелой Н-тиминовой метки. На некоторых круглых бактериях Р— зерен нет иа других имеется различное количество зерен, показывающих, что эти бактерии получили некоторое количество меченной ЗН-тимином ДНК [c.239]

По другому методу [10] срез, содержащий радиоактивное вещество, помещают в темной комнате неносредственно на фотографическую эмульсию. После соответствующей выдержки пластинку проявляют и срез окрашивают на месте, не снимая с пластинки. Так как ткань и ее радиоавтограф находятся в различных плоскостях, их можно исследовать отдельно, нонеременно наводя микроскоп на каждую из обеих плоскостей препарата. Предел разрешения деталей изображения по этому методу не превышает 100 x, по крайней мере, для веществ, дающих р-излучение средней жесткости, как, например, В биологической работе было бы полезно [c.142]

Нативные молекулы ДНК очень велики и при экстракции из клеток обычно разрываются в результате физических или ферментативных воздействий. Мезелсон и Сталь в своих экспериментах по репликации ДНК Е. соН имели дело со сравнительно небольшими фрагментами ДНК, и полученные ими результаты относятся только к состоянию ДНК, предшествовавшему репликации и после нее. Полная репликация хромосомы Е. соН впервые наблюдалась Джоном Кейрнсом. Он разработал метод очень мягкого разрушения клеток Е. соИ. В результате Кейрнсу удалось вьщелить интактные хромосомы Е. соН и пометить их радиоактивным Н-тимидином. Меченые хромосомы аккуратно переносили из раствора на твердую поверхность, которая затем покрывалась в темноте фотографической эмульсией и в течение нескольких недель экспонировалась. В это время электроны, испускаемые радиоактивной ДНК, вызывали образование зерен серебра в фотоэмульсии вдоль молекул ДНК. Последующая обработка эмульсии дает радиоавтограф хромосомы, на котором цепочка зерен серебра отслеживает конформацию молекулы ДНК. Применение метода радиоавтографии привело прежде всего к установлению того факта, что ДНК Е. соН имеет кольцевую форму (рис. 4.22). Впоследствии было показано, что такую же форму имеет ДНК всех прокариотических организмов, а также вирусов и органелл эукариотических организмов. [c.120]

В начале 60-х гг. был разработан метод, позволяющий в общих чертах изучать репликацию хромосом эукариот. В культуру клеток человека на короткое время вводят радиоактивную метк> (П-тимидин), затем клетки мягко лизируют и ДПК дают расправиться на поверхности предметного стекла, покрытого фоточувствительной эмульсией после чего радиоавтограф изучают в световом микроскопе. Реплицировавшаяся ДПК выявляется в виде цепочки гранул серебра. Этим методом можно определить как скорость, так и направление движения репликационной вилки (рис. 9-55). Исходя из скорости, с которой увеличивается длина треков реплицировавшейся ДПК эукариот при увеличении времени мечения, репликационные вилки у этих организмов перемещаются примерно на 50 нуклеотидов в секунду, т. е. в десять раз медленнее, чем у бактерий. Возможно, это связано с тем. что ДПК, упакованную в хромосому, реплицировать труднее. [c.133]

В реакции транскрипции могут использоваться радиоактивные нуклеотиды, меченные Р, или Н. Изотоп Р дает такой радиоактивный сигнал, который не удается локализовать на уровне отдельной клетки, но который легко можно обнаружить с помощью радиоавтографии всего за несколько дней. Следует иметь в виду, что излучение невозможно достаточно эффективно регистрировать с помощью стандартной эмульсии гораздо лучше это делать, экспонируя меченый препарат с рентгеновской пленкой (Д. Дэвидсон, личное сообщение Р. Купмен, личное сообщение). Излучение имеет гораздо меньшую энергию, чем излучение Р поэтому оно обеспечивает лучшее разрешение, и, кроме того, меченные этим изотопом нуклеотиды имеют более высокую удельную радиоактивность, чем нуклеотиды, меченные тритием. Рибонуклеозидтрифосфаты, меченные довольно эффективно включаются в РНК под действием полимераз фагов SP6 или Т7. [c.35]

Под этим термином подразумевается совокупность подходов и методов, с помощью которых можно каждый ген отнести к определенной хромосоме, т.е. составить генетическую карту организма. Например, у человека благодаря применению двух основных методов—гибридизации соматических клеток и гибридизации in situ — установлена хромосомная локализация ряда генов, ответственных за некоторые заболевания. При гибридизации in situ препарат метафазных хромосом на поверхности стеклянной пластины инкубируют с радиоактивно меченным зондом. Точную область гибридизации определяют с помощью радиоавтографии (фотографическую эмульсию наносят, непосредственно на пластинку). Образование зерен над гистологически идентифицированной хромосомой позволяет сделать вывод о принадлежности данного гена к конкретной хромосоме, а часто и к определенному ее участку. Некоторые гены человека, локализованные методом гибридизации in situ, представлены в табл. 36.5. [c.46]

Рис. 11-21. Схема экспериментов, выявляющих способ движения репликационной вилки во время фазы S. ДНК, синтезируемую в клетках человека in vitro, метили путем кратковременной инкубации клеток с высокорадиоактивным тимидином. В одном варианте опыта (А) клетки лизиро-вали и ДНК адсорбировали на стекле, которое затем покрывали фотоэмульсией. После экспозиции, продолжавшейся несколько месяцев, эмульсию проявляли и наблюдали линию из зерен серебра над радиоактивной ДНК. В другом варианте (Б) после такой же инкубации с меченым тимидином клетки инкубировали без метки, и тогда происходил синтез ДНК со значительно меньшей удельной активностью. Далее препарат обрабатывали так же, как в первом варианте. Тот факт, что следы из зерен серебра были расположены парами, причем два следа каждой пары ослабевали в противоположных направлениях, впервые навел на мысль о движении двух репликационных вилок в разные стороны от общей начальной точки (см. рис. 11-12). Цветные цепи ДНК изображены на схеме только для того, чтобы легче было разобраться в данных радиоавтографии немеченая ДНК Б таких опытах не видна.

Присутствие Н-тимидина в ДНК обнаруживается при помощи метода, называемого радиоавтографией . Когда радиоактивное соединение распадается, оно в буквальном смысле создает свою собственную фотографию, отсюда и возникло такое название. Стекла с фиксированными на них клетками подвергают химической обработке для удаления всего тимидина, пе включившегося в ДНК. Затем стекла погружают в фотографическую эмульсию, дают ей застыть и инкубируют их в темноте (так что атомы трития могут распадаться), проявляют и фиксируют как обычную фотографию. Частица, испускаемая при каждом радиоактивном распаде, восстанавливает в эмульсии одно зерно серебра, как и фотон света. Черное зерно появляется почти точно в месте распада радиоактивного соединения. Затем под микроскопом можно видеть клетку с ядром и над ним одну или несколько черных точек, каждая из которых и есть зерно серебра. Чем больше меченого тимидипа включилось в ДНК, тем больше радиоактивных распадов чем больше распадов, тем больше черных зерен. [c.75]

Первоначально радиоавтографы готовились в соответствии с методом Дониач и Пелк [58] с использованием накладывающихся пленок Кодак АН 10, но впоследствии всеобщее применение нашел метод погружения в эмульсию. Последний метод занимает меньще времени и обеспечивает лучщее разрещение [c.248]

Снимающаяся пленка Кодак AR-10 (Kodak) представляет собой преформированный слой желатина, нанесенный на стеклянную подложку. Для проведения радиоавтографии пленка легко отделяется от стекла при безопасном красном освещении. Такая пленка обеспечивает только один размер кристаллов и, следовательно, только один уровень чувствительности. Составляющий основу пленки желатин делает окраску клеток после радиоавтографических процедур несколько более сложной, чем при использовании жидких эмульсий. [c.311]

Радиоавтография позволяет устанавливать локализацию радиоактивньк веществ в клетках и тканях благодаря действию излучения на фотографическую эмульсию. Содержащиеся в эмульсии кристаллы бромида серебра выполняют роль микродетекторов радиоактивности. [c.278]

ЦИИ И разрешение зависят от размера кристаллов, диаметр которых составляет 0,04 и 0,3 мкм. Чем меньше кристаллы, тем, как правило, точнее локализация и выше разрешение. В световой микроскопии разрешение на радиоавтографах составляет 1 мкм это означает возможность различения двух радиоактивных частиц, удаленных друг от друга на расстоянии 1 мкм. В электронной микроскопии разрешение выше в 5 — 10 раз. В мелкозернистых эмульсиях, используемьк при микроскопической радиоавтографии, для дальнейшего повышения чувствительности увеличивают содержание бромида серебра. Чувствительность эмульсии характеризуется также числом зерен серебра, образуюпщхся при прохождении одной частицы. Эффективность радиоавтографического метода характеризуется величиной отношения числа зерен серебра на радиоавтографе к числу актов распада в препарате. [c.281]

При подсчете зерен серебра следует учитывать гранулы, имеющиеся в эмульсии без обработки препарата. С этой целью в контрольных препаратах подсчитывают число этих гранул на единицу площади и это число (так называемый фон ) вьиитают из общего числа зерен на радиоавтографе. [c.287]

Для этого метода требуется специальная эмульсия с очень высоким содержанием галогенида серебра с йе-большими зернами одинакового размера. Для электронномикроскопической радиоавтографии пригодна тонкая фотографическая эмульсия толщиной в один слой зерен с гомогенно распределенными и плотно упакованными кристаллами такие слои можно наносить на ультратонкие срезы методом погружения или методом покрытия. Надежные результаты дает эмульсия Ilford L4. [c.288]

В настоящее время для радиоавтографии с последующим анализом препаратов в световом микроскопе употребляют 2 типа ядерных эмульсий (Гос. НИИ Хим-фотопроект, Москва). Эмульсия типа М является мелкозернистой, а эмульсия типа Р — относительно крупнозернистой, размеры зерен восстановленного серебра в последней могут достигать 1 мкм. Выбор одной из этих эмульсий определяется задачами исследования. Если необходимо выявить включение меченого предшественника в отдельные структурные компоненты клетки, то, естественно, лучше употреблять эмульсию типа М. [c.346]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология