Изотопы, мечение антигенов

Значительно более прецизионный подход основан на титровании активных центров иммобилизованных антител меченым антигеном. В качестве метки целесообразно использовать низкомолекулярные соединения (изотоп, флуоресцирующий краситель, кофактор и т. д.), чтобы в максимальной степени снизить вероятность экранирования меткой антигенных детерминант. Суть метода заключается в насыщении микроколичеств иммуносорбента меченым антигеном. Получаемая в результате опыта изотерма адсорбции позволяет вычислять концентрацию и константы связывания иммобилизованных молекул антител. Так как в подобном эксперименте определяется не абсолютная концентрация активных центров антител, а концентрация центров, доступных для взаимодействия с антигеном, следует ожидать, что эта величина будет различной для антигенов с разными размерами и молекулярной массой. Например, при иммобилизации антител разной специфичности часть центров может экранироваться носителем от контакта с макромолекулярным антигеном, но быть доступной для низкомолекулярного. [c.218]

Радиоиммуноэлектрофорез. Если антиген или антитело пометить радиоактивным изотопом, то с помощью иммуноэлектрофореза можно анализировать чрезвычайно малые количества материала. Известно, что антигенные свойства IgQ не меняются, если молекула IgQ как антитело входит в иммунный комплекс. Если мы располагаем соответствующей иммунной сывороткой анти-IgQ, меченной радиоактивным изотопом, то с ее помощью мы можем выявлять IgQ в иммунных комплексах (например, в преципитатах). Радиоиммуноэлектрофорез состоит из следующих стадий [c.148]

Радиоиммуноэлектрофорез можно осуществить также и с помощью антигенов, меченных радиоактивными изотопами. Методика постановки подобна только что описанной, но после иммуноэлектрофореза в канавку для антисыворотки заливают меченный изотопом антиген (в приведенном выше примере — сывороточный Ч-альбумин человека) и оставляют для диффузии. [c.149]

В случаях накопления биомассы клеток в качестве антигенного вещества можно воспользоваться серологическими методами, включая иммуноферментные Меченые радиоактивными изотопами антитела рекомендуют применять для определения антигенных детерминант на поверхности клеток [c.279]

Существуют три основных методических подхода для решения этой задачи. Первый способ — избирательное окрашивание нейронов, выделяющих определенный нейромедиатор, может осуществляться с помощью преобразования естественного медиатора в его флуоресцирующее производное. В этом случае флуоресценция определенных групп клеток поможет выявить специфические связи в структурах мозга. Второй экспериментальный подход связан с введением молекул медиатора, предварительно меченного радиоактивным изотопом. Нейронные окончания, содержащие исследуемый медиатор, способны избирательно захватывать метку. Затем их легко выявить методом авторадиографии. Третий способ обнаружения специфических связей в нервной системе состоит в использовании высоко специфичной способности узнавать либо антигенные детерминанты медиатора, либо определенные ферментные белки, участвующие в метаболизме нейромедиаторов, либо нейрорецептор-ные компоненты на мембране клетки. Последние считаются наиболее убедительным свидетельством в пользу существования конкретных нейрохимических взаимодействий межцу клетками и зонами мозга. Обычно для иммунохимической идентификации используют флуоресцентный краситель или изотоп, который маркирует антитела. В последние годы широко распространились методы, использующие антитела, меченные частицами тяжелых металлов, например коллоидного золота, железа и др. [c.224]

Влияние константы связывания меченого антигена на положение калибровочного графика. При рассмотрении теоретических основ радиоиммунологического анализа, как правило, предполагается равенство констант связывания с антителами нативного и меченного изотопом антигена. В ИФА это предположение может соблюдаться в отдельных случаях, но его нельзя считать общим. Сохранение иммунологической активности антигена, связанного с ферментом, в значительной степени зависит от соотношения их размеров и расположения антигенных детерминант на поверхно- [c.234]

РИА используют меченный изотопом антиген. [c.94]

Наряду с преимуществами РИА обладает и некоторыми недостатками. К ним относятся а) сравнительно короткий период полураспада изотопов, испускающих у-кванты б) опасность для здоровья, которую представляют введение изотопных меток, подготовка и выполнение анализов в) повреждение структуры меченых молекул, вызываемое излучением г) необходимость отделения меченых и немеченых антигенов, связавшихся с антителами, от свободных антигенов и д) обусловленная этим трудность автоматизации РИА. [c.10]

Радиоиммунологический анализ отличается от прочих методов иммунологического анализа тем, что для него требуется радиоактивный антиген. В ряде случаев для этого используют готовые или синтезированные из меченых предшественников Н-или С-меченые соединения. Чаще применяют иодирование антигена или гаптена или Использование имеет особое преимущество, так как этот изотоп является сильным 7-эмиттером. Как отмечалось в гл. 5, р-эмиттеры считают в жидкостных сцинтилляционных счетчиках, и, поскольку образцы для радиоиммунологического анализа часто содержат значительное количество белка, приходится считаться с проблемой тушения в сцинтилляционной системе. В случае Н и тушение может быть достаточно сильным. При использовании -эмиттеров тушение проявляется в меньшей степени вследствие высокой энергии радиации. [c.261]

Принцип разделения компонентов в анализе с применением микрокапсулированных антител основан на том, что продиффун-дировавший внутрь капсулы и связавшийся с антителами меченый антиген теряет способность переходить обратно в раствор вследствие ограниченного размера пор. Как следует из принципа разделения, микрокапсулирование для целей анализа не является универсальным подходом. Эффективное применение таких препаратов антител возможно только при использовании в анализе низкомолекулярных антигенов, меченных небольшими по размерам метками (изотоп, кофактор), что обеспечивает свободную диффузию конъюгата антиген — маркер внутрь капсулы. [c.212]

Методы радиохимриеского анализа широко ирименяются в клинических лабораториях. Об использовании в этих целях изотопов С [24] уже упоминалось выше. Возможно, более обычными являются методы, основанные на проведении радио-иммуиных испытаний [25]. Они лежат в основе чувствительного способа определения концентрации антигенных вепдеств в образце при сопоставлении его ингибирующего влияния на связывание антигена, меченного радиоактивной меткой, с ограниченным количеством специфических антител и ингибирующего влияния известных эталонов. Обычно методики основаны на измерении уровня радиоактивности образцов, содержащих и Со. [c.30]

Классический иммуноанализ, описанный Ялоу и Берсоном [1299], основан на способности немеченного антигена конкурировать с антигеном, меченным радиоактивным изотопом, при сорбции на связывающих центрах антитела, число которых ограниченно. [c.380]

Ингвал и др. [324] применилн принцип радиоиммуноанализа, описанный для определения кроличьего иммуноглобулина G однако вместо меченных радиоактивным изотопом антигенов они конъюгировали последние с ферментом — щелочной фосфатазой. Основой конкурентного иммуноаналнза является разделение свободных и связанных с антителами антигенов, так чтобы антигены можно было определить количественно. Это разделение можно облегчить фиксацией антител на твердой фазе путем физической сорбции на стенках полистирольных пробирок. [c.382]

Хотя эксперименты, в которых в качестве индикаторов использовались меченные изотопами вещества, дали много ценных сведений относительно синтеза белка, тем не менее в этой области до сих пор еще остались нерешенными основные проблемы. На основании этих опытов невозможно решить, происходит ли непрерывное самообновление белков путем синтеза и последующего распада отдельных молекул белка или же оно обусловлено тем, что каждая из этих молекул, не распадаясь нацело, постоянно обменивает свои отдельные составные части. Подобный обмен может достигаться, например, путем временного размыкания пептидных связей и включения аминокислоты между концами раскрытых цепей. Для разрешения этой проблемы были использованы иммунологические методы. Как уже указывалось в гл. XIV, антитела находятся во фракции у глобулинов сыворотки. Если вызвать образование антител у кролика, иммунизируя его каким-либо антигеном, то вновь образованные иммунные т-глобулины можно отдифференцировать от f-глобулинов, присутствовавших до иммунизации, по их способности преципитировать соответствуюший антиген. Так, например, инъекция полисахарида пневмококков SIII приводит к образованию SIII-анти-тел во фракции глобулинов иммунной сыворотки. Если подопытным кроликам помимо антигена вводится N -глицин, то через небольшой промежуток времени меченая аминокислота обнару- [c.390]

Радиоактивные метки. Выбор маркера и способа его привязки к антигену является одним из важных этапов в проведении анализа. Первоначально широко применялись радиоизотопные метки (радиоиммунный анализ —РИА), предложенные американскими исследователями (С. А. Берсон, Р. С. Ялоу, 1959). Однако в последние годы все более широкое использование в качестве маркеров находят ферменты. Это обусловлено рядом принципиальных трудностей, связанных с применением изотопных маркеров. Так, изотоп имеет время полураспада 60 сут, чем ограничивается срок его использования. Изотоп имеет длительное время жизни (12,5 лет), однако под действием р-из-лучения происходит распад молекул антигена, в результате чего время жизни меченых соединений тоже ограничено. Кроме [c.107]

Стабильность иммуноферментных конъюгатов при хранении— важнейший параметр, обусловливающий возможность их практического использования. Методы направленной стабилизации конъюгатов пока еще не разработаны. Не существует также корреляции между стабильностью конъюгатов и методом их получения. Однако вь1сокая стабильность гибридных молекул обеспечивает их применение на практике и значительно превосходит стабильность антител и антигенов, меченных радиоактивными изотопами. В лиофилизованном состоянии ферментные конъюгаты сохраняют свои свойства до двух лет. Стабильность при хранении в растворе (+4°С) более года отмечена для конъюгатов с щелочной фосфатазой, р-галактозидазой, лизоцимом, пероксидазой. [c.113]

Для биосинтетического маркирования белков можно использовать также предшественники, меченные другими изотопами. Среди них S-метионин имеет преимущество перед соединениями, содержащими тритий применение этого вещества более удобно для простого радиоавтографического анализа очищенных продук- тов (Laskey, Mills, 1975). Кроме того, имеются препараты меченого метионина с высокой удельной активностью. Однако, учитывая эти преимущества, важно иметь в виду, что большинство белков содержит относительно мало метиониновых остатков. Чтобы получить материал для определения последовательности аминокислот в белках, Бэллоу и сотр. (Ballou et al., 1976) разработали метод одновременного включения всех 20 аминокислот, меченных С, в одной клеточной культуре. Этим авторам удалось частично расшифровать последовательность аминокислот в антигенах гистосовместимости, получив достаточную активность с помощью С-аминокислот и С-пирувата. [c.184]

Цитотоксические Т-лимфоциты (Тц или Тс, от англ. ytotoxi ) человека способны избирательно убивать клетки-мишени, содержащие на своей поверхности чужеродный антиген. Цитотоксические способности Тс (и других цитотоксических эффекторных клеток, обсуждаемых ниже) обычно оценивают по их способности вызывать in vitro освобождение изотопа иэ клеток-мишеней, меченных Сг. Аллореактивные Тс-клетки убивают клетки-мишени, экспрессирующие чужие детерминанты МНС эти клетки широко изучены в связи с их возможной ролью в отторжении пересаженных органов. Однако Тс-клетки могут также убивать аутологичные клетки, экспрессирующие на плазматических мембранах вирусный антиген эта последняя их роль, по-видимому, относится к истинно физиологической (в отличие от роли этих клеток в искусственной ситуации трансплантации). Тс-клетки человека относятся к клеткам,, позитивным по ОКТ 8 и Leu 2а (табл. 14.1) единственным известным исключением являются аллореактивные Тс, специфические для антигенов класса II, относящиеся к фенотипу Т4 или Leu 3. Экспериментальные исследования на мышах позволяют предположить, что вирус-специфические Тс-клетки представляют собой важные эффекторы, препятствующие развитию вирусных инфекций. Однако при некоторых обстоятельствах Тс-клетки при вирусных инфекциях могут повреждать ткани. [c.14]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология