Антиген радиоактивные

Гель-электрофорез. Электрофорез на геле и крахмале применяют для аналитических целей. Наиболее важным применением гель-электрофореза является иммуноэлектрофорез. Для этого вида анализа используют макропористые гели, в частности гели агара и агарозы. Метод иммуноэлектрофореза основан на том, что после разделения электрофорезом происходит диффузия разделенных веществ — антигенов — в направлении, перпендикулярном направлению электрофореза. Навстречу этим соединениям диффундируют антитела. При соединении антигенов и антител образуются характерные дуги осаждения. Метод иммуноэлектрофореза очень чувствителен при обнаружении антигенов, специфических для данных антител. В настоящее время применяют метод введения радиоактивной метки в антигены, благодаря чему радиоиммуноэлектрофорез является одним из самых чувствительных методов анализа биополимеров. [c.364]

Опыт ставится обычно следующим образом. В серию про--бирок наливают различные объемы пробы, в которой требуется определить концентрацию гормона, например инсулина.-Одновременно готовят пробы, содержащие известное количество этого гормона. Затем в каждую пробирку добавляют стандартное количество меченого гормона (обычно используются гормоны, меченные испускающим улучи) и специфического к гормону антитела. Раствор инкубируют некоторое-время (несколько минут или часов) для достижения равновесия между гормоном (антигеном) и комплексом антитело — гормон. Далее отделяют комплекс гормон — антитело, например, методом гель-фильтрации или осаждением сульфатом аммония и измеряют радиоактивность полученного комплекса. Если в определяемой пробе гормон содержится в высокой-концентрации, то разведение меченого гормона окажется выше, а радиоактивность комплекса гормон — антитело соответственно ниже по сравнению с пробой, где данный гормон присутствует в более низкой концентрации. Используя известные концентрации гормона, строят стандартную кривую, с помощью которой непосредственно определяют концентрацию-гормона в исследуемой пробе. [c.318]

Радиоиммуноэлектрофорез. Если антиген или антитело пометить радиоактивным изотопом, то с помощью иммуноэлектрофореза можно анализировать чрезвычайно малые количества материала. Известно, что антигенные свойства IgQ не меняются, если молекула IgQ как антитело входит в иммунный комплекс. Если мы располагаем соответствующей иммунной сывороткой анти-IgQ, меченной радиоактивным изотопом, то с ее помощью мы можем выявлять IgQ в иммунных комплексах (например, в преципитатах). Радиоиммуноэлектрофорез состоит из следующих стадий [c.148]

Радиоиммуноэлектрофорез можно осуществить также и с помощью антигенов, меченных радиоактивными изотопами. Методика постановки подобна только что описанной, но после иммуноэлектрофореза в канавку для антисыворотки заливают меченный изотопом антиген (в приведенном выше примере — сывороточный Ч-альбумин человека) и оставляют для диффузии. [c.149]

В случаях накопления биомассы клеток в качестве антигенного вещества можно воспользоваться серологическими методами, включая иммуноферментные Меченые радиоактивными изотопами антитела рекомендуют применять для определения антигенных детерминант на поверхности клеток [c.279]

Высокая специфичность антител по отношению к антигену делает их гибким и действенным инструментом, который можно использовать для выявления, количественного определения и локализации множества разнообразных веществ, представляющих интерес для биолога. Но как можно обнаружить или измерить взаимодействие антитела с антигеном Начальная реакция связывания антигена с антителом-так называемая первичная реакция-может быть измерена многими различными способами. При радиоиммунном анализе, позволяющем определять даже ничтожные количества материала, известное количество радиоактивного антигена вместе со стандартным количеством антител добавляют к образцу, содержащему неизвестное количество того же антигена в нерадиоактивной форме. Немеченый антиген конкурирует с меченым за связывающие участки антител, и чем больше данного антигена в образце, тем меньше радиоактивного антигена будет связано с антителом. Свободный радиоактивный антиген можно отделить от связанного, а затем измерить количество того и другого с помощью ряда методов, использующих различия в свойствах свободных и связанных молекул один нз общих подходов состоит в осаждении (преципитации) комплексов антиген-антитело антителами к иммуноглобулинам (рнс. 17-28). [c.27]

Представляется возможным исключить деятельность самого гипофиза с помощью радиоактивных антител к гипофизарным гормонам. Согласно иммунологическим представлениям, радиоактивные антитела достаточной чистоты и специфичности, будучи введенными в организм, при встрече с антигеном (в данном случае — гормон гипофиза, на который они выработаны) дают комплекс, который локализуется в месте его образования, являясь источником лучевого воздействия на гипофиз. [c.513]

Существуют три основных методических подхода для решения этой задачи. Первый способ — избирательное окрашивание нейронов, выделяющих определенный нейромедиатор, может осуществляться с помощью преобразования естественного медиатора в его флуоресцирующее производное. В этом случае флуоресценция определенных групп клеток поможет выявить специфические связи в структурах мозга. Второй экспериментальный подход связан с введением молекул медиатора, предварительно меченного радиоактивным изотопом. Нейронные окончания, содержащие исследуемый медиатор, способны избирательно захватывать метку. Затем их легко выявить методом авторадиографии. Третий способ обнаружения специфических связей в нервной системе состоит в использовании высоко специфичной способности узнавать либо антигенные детерминанты медиатора, либо определенные ферментные белки, участвующие в метаболизме нейромедиаторов, либо нейрорецептор-ные компоненты на мембране клетки. Последние считаются наиболее убедительным свидетельством в пользу существования конкретных нейрохимических взаимодействий межцу клетками и зонами мозга. Обычно для иммунохимической идентификации используют флуоресцентный краситель или изотоп, который маркирует антитела. В последние годы широко распространились методы, использующие антитела, меченные частицами тяжелых металлов, например коллоидного золота, железа и др. [c.224]

После электрофореза поддерживающую среду часто приходит-ся разделять на фрагменты для определения в них ферментативной или антигенной активности, либо радиоактивности. Полоски бумаги или ацетата целлюлозы и пленки высушенного агара можно легко разрезать ножницами или бритвой. Разрезание крахмального геля на продольные блоки относится к обычным процедурам, применяемым при электрофорезе в этом геле. Чтобы выделить разделенные компоненты из крахмального или агарового геля, его чаще всего разрезают бритвой в поперечном направлении. Описан способ фракционирования разбавленного) (0,05—0,1%) агарозного геля путем его расплавления при 80 и последующего сбора капель с помощью коллектора фракций [546]. Что же касается полиакриламидного геля, обладающего [c.201]

Чаще всего в настоящее время антиген или антитела метят радиоактивным иодом Иод включается по [c.261]

В некоторых случаях не удается найти подходящего способа для получения радиоактивного антигена, поэтому применить метод радиоиммунологического анализа не представляется возможным. Такие вещества определяют с помощью иммунорадиометрического анализа (ИРА). Принцип работы метода изображен на рис. 10-9. Очищенный антиген адсорбируется или связывается со стабильным носителем, таким, как целлюлоза (или сефароза, обработанная бромцианом, см. гл. 8). Очищенный иммуноглобулин (ИГ), полученный из сыворотки, содержащей антиген-специфи-ческое антитело, прибавляют к такому конъюгату. Неадсорбиро-ванные антитела удаляют промыванием, а адсорбированное ан-тиген-специфическое антитело иодируют радиоактивным иодом (обратите внимание, что здесь в отличие от РИА радиоактивным является антитело, а не антиген). Радиоактивное антитело затем удаляют с адсорбента и используют для анализа. Для этого Ат смешивают с анализируемым антигеном, применяя избыток антитела (в РИА используется избыток антигена). Смесь прибавляют к целлюлозе, содержащей Аг, с которой может связываться только непрореагировавшее Ат . Прореагировавшее Ат отмывают и определяют его количество по радиоактивности, получен- [c.262]

Определение константы связывания. Используют метод радиоиммунного анализа (РИА). Постановка метода сходна с постановкой ИФА (с. 320), с тем исключением, что вместо конъюгатов антител с ферментной меткой для выявления связывания антител с антигеном используют антимышиные антитела с радиоактивной меткой. В каждую лунку вносят по 50—100 мкл антимышиных антител (10—30 нг около 20 000 срт). Инкубируют при комнатной температуре около 2 ч. Затем микропланшеты тщательно отмывают (с. 321), разрезают и индивидуальные лунки просчитывают в Y-счетчике. [c.324]

Для определения концентрации гормона смешивают меченный, например ИОДОМ-125, гормон с антителами к данному гормону. Образуется комплекс — гормон—антитело. При добавлении исследуемого экстракта немеченный гормон, находящийся в исследуемом растворе, конкурирует с меченым в реакции связывания с антителом, вытесняя последний из комплекса. Далее освобождеиный гормон отделяют от связанного электрофорезом, хроматографией или осаждением и количественно определяют его, измеряя радиоактивность. Из полученных данных можно рассчитать количество исследуемого немеченого гормона, так как радиоактивность свободного гормона зависит от того, насколько много меченого гормона было вытеснено из комплекса антиген — антитело. Более подробно с этим вопросом можно ознакомиться по литературе [582, 591]. [c.240]

Принцип, положенный в основу методов RIA [91, 117], аналогичен принципу методов ELISA эти методы в основном различаются тем, что для мечения вместо ферментов применяются радиоактивные элементы (главным образом йод) [49]. Широко используемый вариант этого метода не предусматривает иммобилизацию одного из реагентов реакция проходит в растворимой фазе, поэтому очень важным дополнительным этапом является отделение меченых реагентов, участвующих в иммунокомплексах, от тех, которые не участвуют. Если антиген представляет собой белок, обычно проводят разделение иммунокомплекса, осаждая его антителами к иммуноглобулинам кролика (если специфические антитела к белку индуцированы у кролика) [49]. [c.108]

Метка при этом должна содержаться в том компоненте, который образует комплекс с анализируемым веществом. Например, для анализа определенного антигена нужно располагать антителом, специфичным к этому антигену, ввести в него метку (радиоактивную, ферментную, люминесцентную и т.д.) и количественно перевести анализируемое вещество в комплекс. Для того чтобы достичь максимального уровня этого перехода, меченое антитело нужно брать в избытке. Но тогда нужно предусмотреть процедуру отдейения комплекса от избытка меченого антатела. Для этих целей используют иммобилизацию анализируемого компонента на твердой поверхности. В этом случае комплекс антиген — антитело остается на поверхности, тогда как избыток меченого антитела, не вошедший в состав комплекса, легко удаляется. [c.258]

Существует много вариантов иммунохимического анализа. Одни из наиболее распространенных заключается а следующем. На диске из поливинилхлорида сорбируются немеченые антитела к исследуемому белку. Колонии прямо иа чашке Петри лизируются в мягких условиях, и поливинилхлоридный диск вводится в контакт с поверхностью чашки. Продукты с антигенными детерминантами исходного белка образуют комплексы антиген — антитело с антителами, сорбированными на диске только в местах положения экспрессирующих клонов. Затем диск отмывается от иеспецифи-чески сорбированного антигена и обрабатывается раствором с меченными (радиоактивно, флуоресцентно илн иммуноферментно) антителами. Эти антитела образуют комплекс с антигеном за счет его других антигенных детерминант, в результате чего участки диска, содержашие первый комплекс антиген — антитело, оказываются мечеными (рис. 256). По положению меченых участков на диске легко идентифицировать экспрессирующие колонии. [c.439]

Для повышения чувствительности тестов антигены или антитела адсорбируют на эритроцитах (РНГА, РОНТА, РТОНГА, РГадсТО, РРГ), метят их ферментами (ИФА), радиоактивными изотопами (РИА, РПГ), флюорохромами (РИФ) или же используют принцип лизиса эритроцитов при взаимодействии антигенов и антител в присутствии комплемента (РСК, РРГ). [c.273]

Методы радиохимриеского анализа широко ирименяются в клинических лабораториях. Об использовании в этих целях изотопов С [24] уже упоминалось выше. Возможно, более обычными являются методы, основанные на проведении радио-иммуиных испытаний [25]. Они лежат в основе чувствительного способа определения концентрации антигенных вепдеств в образце при сопоставлении его ингибирующего влияния на связывание антигена, меченного радиоактивной меткой, с ограниченным количеством специфических антител и ингибирующего влияния известных эталонов. Обычно методики основаны на измерении уровня радиоактивности образцов, содержащих и Со. [c.30]

Классический иммуноанализ, описанный Ялоу и Берсоном [1299], основан на способности немеченного антигена конкурировать с антигеном, меченным радиоактивным изотопом, при сорбции на связывающих центрах антитела, число которых ограниченно. [c.380]

Антисывороткн, ковалентно связанные с агарозой, целлюлозой и сефадексом, в системах радиоиммуноанализа белков и гаптенов исследовались Болтоном н Хантером [135], Показано, что ковалентное связывание с нерастворимой матрицей е оказывает неблагоприятного влияния на антисыворотку. Ухудшение чувствительности анализа обусловлено в большинстве случаев иространствен-ными затруднениями для высокомолекулярных антигенов. Богданов и Страш [131] указали на возможные ошибки радиоиммуно-анализа, возникающие из-за большого объема атома радиоактивного иода. [c.381]

Ингвал и др. [324] применилн принцип радиоиммуноанализа, описанный для определения кроличьего иммуноглобулина G однако вместо меченных радиоактивным изотопом антигенов они конъюгировали последние с ферментом — щелочной фосфатазой. Основой конкурентного иммуноаналнза является разделение свободных и связанных с антителами антигенов, так чтобы антигены можно было определить количественно. Это разделение можно облегчить фиксацией антител на твердой фазе путем физической сорбции на стенках полистирольных пробирок. [c.382]

Рис. 17-28. Принцип метода ра-диоиммунного анализа. Немеченый антиген конкурирует с меченым антигеном за свизывание с антителами. Это снижает количество радиоактивности в преципитате антитела с антигеном, и по величине этого снижения (в сравнении с контрольным образцом) можно определить концентрацию автигена в неизвестном образце.

Шибаев В. П., Чекунчиков В. П., Кочетков Н. К. Синтез бактериальных антигенных полисахаридов и их фрагментов, Сообщ. 9. Синтез полисахарида — повторяющегося звона О-специ-фического полисахарида Salmonella newington с радиоактивной меткой в [c.349]

В ответ на попадание в организм чужеродных белков (антигенов) у животных синтезируются специфические к ним антитела. Белок-антитело, появляющийся в сыворотке крови, обладает способностью очень прочно, но обратимо связываться с молекулой антигена. Каждое антитело характеризуется высокой степенью специфичности и связывает только тот антиген, который стимулировал его выработку. Эти свойства антител, а именно их специфичность и сродство по отношению к своим антигенам были использованы Розалиндой Ялоу и ее коллегами для измерения крайне малых концентраций полипептидньк гормонов в крови и тканях. Суть метода состоит в следующем. Измеряемый гормон используют в качестве антигена (Аг) и вводят его морским свинкам. После нескольких инъекций у животных в плазме крови появляются антитела к введенному гормону, причем в достаточно высокой концентрации. Далее из сыворотки выделяют антитела (Ат) и смешивают их с известным количеством радиоактивно меченного гормона (Аг) при этом в результате обратимой реакции, равновесие которой сильно сдвинуто вправо, образуется комплекс антиген-антитело [c.784]

Другие методы идентификации рекомбинантных плазмид основаны на экспрессии включенного в них гена. При этом идентифицируется белковый продукт, для чего используются иммунологические методы или методы определения его специфической активности. Для обнаружения антигенов в бактериях путем скрининга, на основе специфического их взаимодействия с антителами, часто используется метод, разработанный Брумом и Джилбертом. Для этого пластиковый диск покрывают слоем специфических радиоактивных антител и помещают его на предварительно лизированные колонии. Антигены из лизиро-ванных бактерий связываются с антителами на диске. Положение антигенов, адсорбированных на диске, определяют с помощью радиоавтографии. [c.316]

Интересно другое. В эксперименте с введением меченного тритием токсина столбняка оказалось, что плазмабласты и даже зрелые, производящие антитела плазматические клетки не обнаруживают ни малейших следов радиоактивности следовательно, в них содержатся разве что ничтожно малые, крошечные обломки антигенов. Напротив, макрофаги очень сильно радиоактивны, т. е. содержат много антигена. Отсюда следует, что плазматические клетки, которые должны производить антитела, в [c.343]

Выше было уже упомянуто о получении белков, иодированных радиоактивным изотопом иода. В связи с работами по метаболизму был осуществлен биосинтез тироглобулинов, в состав которых входит J131 (189). В ряде лабораторий [67] изучалось иммуно-химическое поведение иодсодержащих белков, полученных либо прямым иодированием, либо внедрением иодированных радикалов. Белки, иодированные радиоактивным изотопом, оказались полезными при исследовании образования антител в зависимости от устойчивости соответствующих антигенов в тканях [4,7,31, 1316]. [c.319]

В 1955 г. Гаврилеско и сотр. [66]. Авторы обнаружили в СМЖ белок со свойствами Рг-глобулина, образующий линию преципитации в виде двойной дуги, расположенной между зонами р и у. В 1959 г. Буртин [67] показал, что этот белок обладает антигенными свойствами сывороточного трансферрина, а в 1961 г. Клаузен и Мункнер [68] установили, что обе полосы двойной дуги связывают радиоактивное железо. После обработки СМЖ нейраминидазой [c.126]

Рис. 6.6. Сэндвич -радиоиммунотест на большой Т-антиген вируса SV-40 с использованием двух моноклональных антител к нему, взаимодействуюш,их с разными эпитопами. По оси ординат отложена радиоактивность (имп/мин) иодированных антител, связавшихся с аффинноиммобилизованным антигеном, а по оси абсцисс — концентрация антигена. Исследование проводили в двух параллельных пробах, и с целью демонстрации стабильности метода на рисунке представлены кривые, полученные для двух параллелей.

Интересные возможности были обнаружены при использовании ферментов для повышения чувствительности иммунохими-ческих методов анализа. Сущность любого иммунохимического анализа сводится к тому, чтобы после завершения реакции антиген-антитело определить концентрацию избыточного компонента (антигена или антитела), не вступившего в реакцию. Поскольку эти концентрации очень невысоки (10 — 10 моль/л), для их обнаружения обычно применяют легко детектируемую метку радиоактивным атомом, вводимым в один из компонентов (радиоактивный иод, тритий). Оказалось, что без потери чувствительности метода радиоактивная метка может быть заменена присоединением фермента, который после реакции обнаруживается по его каталитической активности. Накоплен достаточный материал по применению этого нового метода, получившего название иммуноферментный анализ (ИФА). С помощью ИФА могут быть детектированы любые вещества, обладающие свойствами антигенов и, естественно, многочисленные возбудители заболеваний человека, животных, растений. Многие из этих методов могут быть приспособлены к автоматическому режиму слежения, что важно для решения задач экологии, контроля технологических производств и т. д. [c.17]

Радиоактивные метки. Выбор маркера и способа его привязки к антигену является одним из важных этапов в проведении анализа. Первоначально широко применялись радиоизотопные метки (радиоиммунный анализ —РИА), предложенные американскими исследователями (С. А. Берсон, Р. С. Ялоу, 1959). Однако в последние годы все более широкое использование в качестве маркеров находят ферменты. Это обусловлено рядом принципиальных трудностей, связанных с применением изотопных маркеров. Так, изотоп имеет время полураспада 60 сут, чем ограничивается срок его использования. Изотоп имеет длительное время жизни (12,5 лет), однако под действием р-из-лучения происходит распад молекул антигена, в результате чего время жизни меченых соединений тоже ограничено. Кроме [c.107]

Стабильность иммуноферментных конъюгатов при хранении— важнейший параметр, обусловливающий возможность их практического использования. Методы направленной стабилизации конъюгатов пока еще не разработаны. Не существует также корреляции между стабильностью конъюгатов и методом их получения. Однако вь1сокая стабильность гибридных молекул обеспечивает их применение на практике и значительно превосходит стабильность антител и антигенов, меченных радиоактивными изотопами. В лиофилизованном состоянии ферментные конъюгаты сохраняют свои свойства до двух лет. Стабильность при хранении в растворе (+4°С) более года отмечена для конъюгатов с щелочной фосфатазой, р-галактозидазой, лизоцимом, пероксидазой. [c.113]

Фельгенхауэр [370] проводил иммунофиксацию белков после микроэлектрофореза в полиакриламидном геле. Гель помещали в небольшие сосудики, содержавшие 50—60 мкл антисыворотки. Преципитация происходила при 4°С в процессе встряхивания сосудиков. Преципитаты окрашивали после удаления непрореагировавшего белка путем промывания гелей. Крейг и Вайхер [716] предложили аналогичную методику для столбиков геля обычных размеров. Коттон и Мильштейн [249] разде-, ляли белки методом изоэлектрофокусирования на пластинах полиакриламидного геля. Затем электрофореграммы покрывали полосками фильтровальной бумаги (ватман № 3 ММ), пропитанными антисывороткой в соответствующем разведении. Гель вместе с полосками фильтровальной бумаги инкубировали в течение 24 ч при 37 °С во влажной атмосфере. После интенсивного промывания гель окрашивали. При разделении радиоактивных антигенов высушенные гели подвергали радиоавтографии. [c.246]

Другой иммунохимический прием заключается в том, что на гель наносят антитела, направленные против тех антител, которые используются при первом электроиммуноанализе. Избыток первых антител удаляют промыванием и на гель наслаивают раствор вторых антител. Таким методом Дарси [274], в частности, анализировал карциноэмбриональный антиген. С целью дальнейшего увеличения чувствительности этого приема вторые антитела можно пометить радиоактивным иодом. Киндмарк и Торелл [677] нашли, что метод с использованием меченых вторых антител является менее чувствительным, чем их собственный метод (см. выше). [c.264]

Мышам вводили однократно внутривенно агрегированные при 63° С изологичные иммуноглобулины (аналоги комплекса антиген-антитело). Спустя различные промежутки времени оценивали содержание в плазме радиомеченого lq (за 4 ч до каждого взятия крови внутривенно вводили радномеченый глнцин указанный срок соответствует максимальному включению радиоактивной аминокислоты во вновь синтезированный lq). После введения агрегированных иммуноглобулинов синтез lq быстро возрастает и только спустя 48 ч возвра- [c.187]

Часто радиоиммунный анализ основан 11а принципе конкуренции меченого антигена с немеченым. Например, требуется установить, содержится ли в изучаемом препарате данный антиген Существует тест-система, состоящая из такого же антигена, меченного радиоактивным г одом, и антител к нему. Исследуемый препарат инкубируют первоначально с антителом, а затем добавляют меченый тест-антиген. Затем иммунный комплекс осаждают либо сульфатом аммония, либо антииммуноглобу-линовой сывороткой. Если радиоактивность в опытной пробе ниже, чем в контрольной (где содержатся только компоненты тест-системы), значит п изучаемом образце содержится антиген, сходный или идентичный радиоме-ченому антигену тест-системы. Тот же метод может быть построен на принципах иммуносорбции с использованием иммобилизованных антител. При этом отпадает необходимость осаждения иммунного комплекса. Методы, основанные на принципе конкуренции, нетрудно выполнить на количественной основе. Именно таким способом могут определяться различные гормоны, причем в количе- [c.261]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология