Требование a(II) для ферментативной активности

С целью снижения погрешности методов определения ферментативной активности необходимо проводить определение ферментативной активности препарата в сравнении со стандартным образцом. Стандартным образцом является высокоочищенный ферментный препарат, качество которого отвечает требованиям соответствующей нормативно-технической документации. [c.29]

Требование Са(И) для ферментативной активности [c.114]

Главными показателями качества кормовых дрожжей во всех странах принято считать содержание сырого протеина, влаги, золы и органолептические свойства дрожжей (табл. 10). В нашей стране, кроме этих показателей, нормируют крупность гранул и содержание металломагнитных примесей [77]. В Чехословакии нормируют содержание истинного белка, мышьяка, тяжелых металлов и кислотность дрожжей [78—79]. В Польше предъявляют особые требования к качеству белка. Там нормируют содержание белка, усвояемого организмом животных, и проверяют ферментативную активность дрожжей [80—81]. [c.223]

Для определения ферментативной активности применимы те же требования. [c.309]

Способы получения требуемых последовательностей нуклеотидов из клонотек генов можно разделить на три группы. При использовании первой группы методов рекомбинантные бактерии или фаговые частицы исследуют на присутствие в них искомых последовательностей нуклеотидов путем последовательного перебора случайных клонов. При таком подходе, получившем название скрининга, творческие усилия исследователя направлены только на облегчение самого процесса анализа клонов, например, на его автоматизацию. Во втором случае, присутствие нужных последовательностей обнаруживают косвенно, по появлению в бактериальных клетках или фаговых лизатах бляшек продуктов экспрессии искомых генов - РНК, белков или ферментативной активности, т.е. определенного фенотипа, который отличает такие клоны от соседних, не содержащих соответствующих последовательностей. В этом случае исследователь среди большого количества суммарных клонов осуществляет выбор тех, которые резко отличаются от соседних по своему фенотипу, например, цвету колоний. При таком подходе производится выбор требуемого фенотипа среди большого числа других фенотипов. Реализация третьего подхода требует создания селективных условий, при которых преимущество в размножении получают те клоны, которые отвечают требованиям отбора, например, приобрели способность к росту на селективных питательных средах в присутствии антибиотика или в отсутствие аминокислоты в случае исходно ауксотрофного штамма. Последний подход, кроме своего необыкновенного изящества в замысле, демонстрирует самую высокую эффективность, так как позволяет в одно касание освободиться от всех нежелательных примесей в виде ненужных клонов. [c.162]

Однако структурных предпосылок (налагающих требования к геометрии активного центра) недостаточно для катализа. Термодинамически невыгодному процессу сближения и ориентации прежде всего нужна движущая сила, благодаря которой суммарный процесс пошел бы спонтанно. В ферментативном катализе роль такой движущей силы играет свободная энергия сорбции субстрата на ферменте. [c.56]

Заменой глицина в положении 2 на о-аланин или другие D-аминокислоты, а также другими изменениями в структуре природного вещества можно получить повышенную устойчивость к ферментативному расщеплению. Считается [775], что ферментативная устойчивость — единственное требование для анальгетического действия. Более того, изменения в структуре позволили улучшить транспорт пептида и его взаимодействие с соответствующими рецепторами. Приведем несколько примеров особенно активных синтетических аналогов [c.291]

Мультиплетность (полифункциональность) ферментативного катализа и есть, по-видимому, причина высокой специфичности ферментов. Если для осуществления каталитической реакции обязательным требованием является образование нескольких химических связей между определенными атомами молекулы субстрата и активного центра фермента, то отсюда вытекает требование строгой комплементарности реагирующих молекул. Фермент оказы- [c.29]

Электрохимические сенсоры. Существующие химические сенсоры в основном ( 90%) являются электрохимическими и включают большую группу модифицированных электродов, в том числе ион-селективных и ферментативных. Наиболее простой и употребимый метод создания модифицированных электродов — это механическое включение электроактивных соединений в полимерную мембрану, например из желатины, полиакриламида, полиуретана или поливинилхлорида, закрепляемую на индикаторном электроде. Использование пластифицированных мембран имеет ряд недостатков, среди которых малая продолжительность жизни , нестабильность в работе из-за вымывания пластификатора и активного компонента из мембран и др. Отсюда вытекают основные требования к химическому модифицированию поверхности затвора однородность поверхностного слоя по толщине и распределению прививаемых соединений, сохранение стабильности в рабочих условиях. На наш взгляд наибольшие перспективы представляет ковалентное закрепление соединений, включающее обработку кремнийорганическими модификаторами, поскольку полимерное капсулирование не всегда обеспечивает требуемую толщину покрытия и его однородность, а адсорбционное модифицирование не гарантирует стабильности при эксплуатации. Поэтому стратегия развития электрохимических датчиков направлена на ковалентное закрепление активного компонента на поверхности неорганического носителя. [c.468]

Требования к зерну для приготовления солода приведены в табл. 6. Очень важными показателями являются всхожесть, выражаемая количеством зерен в процентах, проросших на 5-е сутки, и увеличение ферментативной активности в конце солодоращения. Ири проращивании ячменя амилолитическая активность должна возрастать не менее чем в 2,5 раза, при проращивании проса декст-ринолитическая активность — в 3—5 раз. [c.123]

В литературе описано большое число методов экспериментального определения скорости реакций, катализируемых холинэстеразами (активности холинэстераз). Сводку методов можно найти в работе Августинссона [31]. Здесь нам хотелось бы рассмотреть преимущества и недостатки некоторых из применяющихся методов с точки зрения требований ферментативной кинетики. [c.142]

Из рис. 19 следует, что для каталитической реакции существенно, чтобы положение молекулы воды, замещаемой кислородом карбонильной группы субстрата,, незначительно изменялось относительно связанной молекулы субстрата и других остатков, участвующих в связывании и катализе. Нет априорной причины полагать, что это требование не удовлетворяется в пента- или гексакоорди-национных комплексах в зависимости от направления аксиальной симметрии иона металла. Хотя нельзя не принимать во внимание возможности малых искажений структуры, затрагивающих конфигурацию трех аминокислотных лигандов при замещении ионом 5И(И), очевидно, эти возможные искажения не исключают ферментативной активности. [c.90]

В СВЯЗИ с этим следует ожидать, что относительная поляризация связи С=0 под действием металлсодержащих аналогов КПА будет зависеть в основном от факторов, определяющих прочность связи металл—кислород, при условии, что другие требования к связыванию субстрата, а именно стереохимия боковых цепей аминокислот, доступность активного центра для растворителя и т. д., остаются относительно постоянными. Хотя обсуждение ферментативной активности металлозамещенных аналогов КПА по отношению к одному субстрату не обязательно применимо ко всем субстратам, представляется необычным проявление заметной пептидазной активности по отношению к нескольким субстратам (табл. 9). Вследствие возможных изменений координационного окружения и координационного числа в случае Ni(II) и Мп(И), свидетельствующих о том, что для ферментативной активности тет-ракоординационная структура не является абсолютно необходимой, при оценке способности ионов металлов вызывать поляризацию связи С=0 интересно сравнить электронные свойства пары металл—кислород. [c.93]

Особенно интересно сравнить влияние ионов 5г(И) и Ва(П) на нуклеазу стафилококка. Подобно Са(П), для обоих катионов предпочтительны кубические структуры и донорный атом кислорода в качестве лиганда [290]. Данные рентгеноструктурного анализа [33] фермента, ингибированного Ва(П), показывают, что ион Ва(П) смещен на 75 пм относительно центра, занимаемого Са(П). Вероятно, ион 8г(П) смещен от центра связывания Са(П) несколько меньше, поскольку 5г(П) имеет меньший ионный радиус (табл. 3). Эти результаты показывают, что стереохимические требования к координации катиона металла при гидролизе РНК должны несколько отличаться от требований при гидролизе ДНК, поскольку 5г(И) катализирует гидролиз ДНК, но не РНК. Структурные причины уменьшения гидролитической активности по отношению к ДНК в присутствии 8г(И) и исчезновение активности в присутствии Ва(П) нельзя объяснить только на основе кристаллографических данных. Вероятно, геометрические искажения центра связывания Са(П), обусловленные изменением ионного радиуса, передаются области связывания нуклеотида. Эти эффекты могут ухудшать стерическое соответствие субстрата активному центру, что приводит к уменьшению ферментативной активности. Кроме того, необходимо учитывать влияние увеличения ионного радиуса на возможную каталитическую роль молекулы воды, образующую мостик между ионом металла и атомом фосфора в 5 -положении рибозила. [c.120]

Связь гема с остатками цистеина подтверждена получением ряда синтетических гемопептидов. У всех видов остатки цистеина в пептиде разделены двумя другими аминокислотными остатками, у каждого имеется последовательность His—Thr рядом с одним остатком цистеи-на и основной остаток — лизин или аргинин — рядом со вторым остатком цистеина (см. стр. 161). Вероятно, это обусловлено определенными пространственными требованиями, осуществление которых связано с ферментативной активностью цитохрома с. Нарушение этих требований приводит к потере ферментативной активности. [c.159]

Жидкие полупродукты чаще сушат в распылительных сушилках. Общие требования к процессу следующие исходное содержание АСВ не должно превышать 20—22%, температура теплоносителя не должна быть выше 130°С на входе и 50—70°С на выходе, время контакта — несколько секунд, гидродинамика газовых потоков в сушильной камере должна обеспечить отсутствие контакта капель жидкости со стенками камеры. Перед сушкой в раствор обязательно добавляют наполнители (обычно ЫаС1) для предотвращения слипания частиц из-за большого количества остаточных сахаров. Наполнителя вносится до 100% от массы АСВ, потери ферментативной активности при сушке с наполнителями — 5—6, без них — 25—30%. [c.132]

Для высокочувствительных методов ИФА необходимы конъюгаты белок—фермент, в которых белок сохраняет иммунологическую активность и не происходит инактивация фермента. Таким, требованиям наилучшим образом отвечает конъюгат белок — фермент состава 1 1. При увеличении числа молекул фермента сушественно уменьшается иммунологическая активность белка, так как при этом возрастают стерические препятствия для протекания иммунной реакции и увеличивается вероятность того, что фермент окажется связанным с активным центром антитела или антигенной детерминантой антигена. В то же время при уменьшении числа молекул фермента, связанных, с белком, значительно понижается ферментативная активность по сравнению с ростом неспецнфических взаимодействий конъюгата. [c.182]

Разработка ИФАМ начинается с выбора подходящего фермента, который удовлетворяет следующим требованиям 1) простота измерения ферментативной активности 2) большое число оборотов, обеспечивающее значительное усиление сигнала [c.59]

Первые результаты [58] показали, что при замене цистеина-35 на серин значение для АТР увеличивается в 4,5 раза. Аналогичная замена на глициновый остаток также приводит к понижению ферментативной активности [56]. Как известно из кристаллографических исследований, цистеин-35 образует водородную связь с рибозным кольцом АТР таким образом, неудивительно, что введение глицинового остатка приводит к снижению активности. На первый взгляд результаты, полученные с серином, кажутся странными, поскольку можно было бы ожидать, что способность гидроксила к образованию более прочной водородной связи (по сравнению с сульфгидрильной группой) приведет к усилению связывания АТР. Однако в безлигандном ферменте водородные связи образуются с молекулами воды. Разные стерические требования для сульфгидрильной и гидроксигрупп означают, что в мутантном ферменте связывание АТР приводит к замене сильной водородной связи на гораздо более слабую, откуда и следуют наблюдающиеся изменения способности к связыванию АТР и катализу [56]. [c.104]

Ферменты, используемые в ИФА в качестве маркеров, должны отвечать ряду требований иметь высокую активность и стабильность в условиях анализа чувствительный и простой метод определения продуктов или субстратов ферментативной реакции сохранять активность и стабильность после конъюгирования с антителами быть доступным при высокой степени чистоты. Непременным условием является отсутствие фермента и его ингибиторов в исследуемых биологических жидкостях. Всем этим требованиям отвечают наиболее часто применяемые в ИФА пероксидаза и щелочная фосфатаза. [c.317]

При pH 7 и 25 °С константа первого порядка для стадии ферментативной гидратации равна 4-10 — 6-10 с [47]. Как уже отмечалось, это на семь порядков выше, чем для неферментативной гидратации СОг, но только на два порядка больше, чем для самопроизвольной реакции между 0Н и СОг при рН>10, где г=8,5-10 л-моль- -с . Уонг [150] ввел константу скорости реакции псевдопервого порядка для гипотетической системы, в которой ОН помещается рядом с молекулой СОг. Значение этой константы равно 4-10 с , что по порядку совпадает с величиной, свойственной карбоангидразной реакции. Снижение значения рКа для диссоциации НгО с 15,7 до 7—8, конечно, удовлетворяло бы требованию о преобладании реакции между ОН- и СОг в области нейтральных pH. Уонг сделал также и другой вывод, основанный на определенных нуклеофильных свойствах свободного и координированного гидроксильного иона. Хотя отношение нуклеофильности двух групп может и не совпадать с отношением их констант диссоциации, однако различие в этих константах не может составлять несколько порядков. Если постулированный механизм соответствует действительности, то, согласно этим выводам, нуклеофильность иона 0Н не должна в результате координирования уменьшаться до степени, соответствующей указанному снижению р/Са. В противном случае реакция ускоряется благодаря каким-то другим особенностям активного центра. [c.615]

Очевидно, что неинструментальные количественные методы очень удобны в тех случаях, когда решающее значение приобретают портативность оборудования и скорость определения. Этим требованиям не удовлетворяет большинство методов иммуноферментного анализа, в которых иммуноспецифический сигнал связан с активностью ферментной метки. Поскольку ферментативные реакции зависят от времени и температуры, методы, основанные на измерении активности, обычно требуют специальной калибровки, точного контроля времени и температуры. Все это в совокупности с трудностью визуального определения малых изменений поглощения или отражения неизбежно приводит к использованию довольно сложных приборов. [c.149]