Подвижная фаза хиральные

Подвижная Введение хиральных доба-фаза вок в подвижную фазу [c.107]

Как и при разделении на ранее описанных полимерных ХНФ, механизм хирального распознавания в данной системе является сложным и до конца не выяснен. Однако основные причины удерживания сорбата были выявлены в ходе систематических исследований влияния его структуры и состава подвижной фазы на коэффициент емкости. Во многих отношениях альбумин-силикагелевый сорбент ведет себя подобно обращенно-фазовым материалам на основе алкилированного силикагеля. Спирты, преимущественно пропанол-1, помогают регулировать время удерживания, поскольку вызывают его быстрое уменьшение вследствие ослабления гидрофобных взаимодействий с сорбентом. Оптимизировать состав подвижной фазы можно, варьируя тремя основными параметрами, а именно pH, ионной силой и органическим растворителем-модификатором [90]. Вероятно, в любой хроматографической системе одновременно наблюдается влияние диполь-ионных и гидрофобных взаимодействий. Кроме того, возможно образование водородных связей и комплексов с переносом заряда. Большое влияние свойств подвижной фазы на значения к разделяемых энантиомеров можно объяснить зависимостью свойств белков от распределения заряда и его конформации. БСА состоит как минимум из 581 остатка аминокислот, связанных в единую цепь (мол. масса 6,6-10 ), и его надмолекулярная структура в значительной мере определяется присутствием в молекуле 17 дисульфидных мостиков. При рН7,0 полный заряд молекулы равен - 18, а изоэлектрическая точка равна 4,7. Как это хорошо известно из химии ферментов, смена растворителя способна вызывать изменения в структуре связывающего центра белка в результате изменения его заряда и конформации. [c.133]

После первых успешных синтезов оптически активных краун-эфиров [104, 105] Крам и сотр. [106] приступили к изучению их способности разделять оптические изомеры. Разработанные ими принципы разделения были применены ими в ЖХ, хиральные краун-эфиры при этом или вводились в подвижную фазу, или ковалентно связывались с силикагелевой подложкой [107]. Хиральный хозяин подобного типа способен различать энантиомеры производных аммония, таких как эфиры о. i-аминокислот, поскольку образование водородных связей между аммонийной группой и кислородными атомами эфира по стерическим причинам приводит к тому, что у одного из таких комплексов стабильность меньше. [c.141]

МЕТОДЫ, ОСНОВАННЫЕ НА ВВЕДЕНИИ ХИРАЛЬНОГО ЛИГАНДА В ПОДВИЖНУЮ ФАЗУ [c.156]

ДОБАВЛЕНИЕ НЕЙТРАЛЬНЫХ ХИРАЛЬНЫХ ЛИГАНДОВ В ПОДВИЖНУЮ ФАЗУ [c.160]

Этот сорбент вполне отвечает требуемой механической стабильности и обладает приемлемой емкостью. Он достаточно прочно удерживает хиральный модификатор, пока полярность подвижной фазы не повышается слишком сильно (что вызывает вымывание селектора). [c.232]

Такие хиральные сорбенты рекомендуется упаковывать в стальные аналитические колонки в виде суспензии в пропаноле-2 при давлении 450—5СЮ атм. В качестве подвижной фазы предпочтительна смесь гексан/диоксан. [c.253]

РИС. 9.2. Разделение к[1слы аминокислот (группа 1) на энаитиомеры иа колонке с (>брап1,ениой фазой. Подвижная фаза хиральная добавка (Си-ДПЛ) в воде. Температура комнатная скорость потока 0,1 мл/мин, через 30 мии- 0,2 мл/мин. [c.339]

РИС. 9.3. Разделение нейтральных аминокислот (группа 2) на энаитиомеры па колонке с обращенной фазой. Подвижная фаза хиральная добавка (Си-ДПА) в воде и водном ацетонитриле (1%-ный). Температура комнатная, скорость п.)тока 0,25 мл/мин. [c.339]

РИС, 9.4. Разделение ароматических аминокислот (Туг, РЬс и Тгр) на знан-тиомеры на колонке с обращенной фазой. Подвижная фаза хиральная добавка (Си-ДПА) в воде и водном ацетонитриле (14%-ный). Температура комнатная, скорость потока 0,5 мл/мин. [c.340]

РИС, 9.5. Разделение основных аминокислот на энаитиомеры на колонке с обращенной фазой. Подвижная фаза хиральная добавка (Си-ДПА) п воде. Температура комнатная, скорость потока 0,2 мл/мин. [c.340]

Рис. 7.9. Элюационный профиль, полученный при хроматографировании фе-иил-(3-о,г-маннопиранозида на макропористом полимере с отпечатками (хиральными пустотами) D-энантиомера. Подвижная фаза адетонитрил с 4% конц. раствора аммиака и 5% воды, скорость потока 0,1 мл/мин, масса пробы 2СЮ мкг) [80] (с разрешения Mar ell Dekker In .).

В первь х работах по применению систем ЖХ низкого давления с изократическим элюированием фосфатными и боратными буферами на колонках с БСА, связанным с сефарозой, показали, что хиральное разделение заряженных сорбатов, подобных немодифицированным аминокислотам триптофану, кинуренину [3-(2-амино-бензоил)аланин], и их 5- и 3-оксипроизводным соответственно чрезвычайно сильно зависит от pH подвижной фазы [87]. В дальнейшем [c.132]

Разработаны и подробно исследованы методы нековалентной иммобилизации комплексов аминокислот с металлами, обусловленной гидрофобными взаимодействиями с обращенно-фазовым сили-кагелевым сорбентом (алкилсиликагелем). И хотя некоторые из этих методов не требуют добавления хирального селектора в подвижную фазу [130], их следует рассматривать как пограничные по причине их сходства с другими методами, основанными на сочетании обращенно-фазовых нехиральных колонок и подвижных фаз, содержащих хиральные добавки, и мы их рассмотрим в разд. 7.3. [c.146]

Перенеся используемый в газовой хроматографии принцип разделения энантиомеров на хиральных амидных неподвижных фазах, а именно принцип, многоточечного образования водородных связей, на жидкостную хроматографию Хара и соавт. [165—167] синтезировали серию хиральных селекторов для разделения энантиомеров. Они предположили, что образование водородных связей с жидкой неподвижной фазой в хиральной ГХ по методу Чарл а и др. [168] (см. разд. 6.1.1) можно реализовать и в ЖХ, если применить неполярную подвижную фазу. Предложенный принцип разделения через образование диастереомерных комплексов сорбат—лиганд, включающих две водородные связи, показан на рис. 7.16. [c.153]

Число возможных водородных связей заметно возрастает при переходе к селектору на основе винной килоты. В этом случае, кроме того, наблюдается еще и большая конформационная подвиж-нось, которая придает структуре большую изменчивость, что допускает ассоциацию с широким кругом соединений и, следовательно, более широкую энантиоселективность. Поскольку (к, К)-ДИПАВК был с успехом использован в качестве хиральной добавки в подвижную фазу (см, разд. 7.3), был синтезирован иммобилизованный селектор такого же типа, структурно совершенно аналогичный (К, к)-ДИПАВК. [c.155]

В соответствии с этим принципиального различия между описанными выше методами и теми методами, которые рассматриваются в этом разделе, не существует. Так, фаза Пиркла, связанная ионной связью с носителем (см. разд. 7.2.3), является превосходной ХНФ, если она используется в сочетании с неполярными растворителями, так как в этом случае подвижная фаза проявляет очень небольшую тенденцию к вытеснению хирального селектора с сорбционных центров. В этих условиях добавки хирального селектора к подвижной фазе не являются обязательными. Если же селектор закреплен на алкилсиликагеле или другой гидрофобной матрице, вследствие наличия сильных гидрофобных взаимодействий ситуация может быть вполне аналогичной, но все же необходимость сохранения постоянной степени покрытия матрицы обычно требует присутствия селектора в подвижной фазе. [c.157]

Многие из уже описанных принципов образования ковалентносвязанных хиральных фаз можно реализовать путем добавления хирального селектора в подвижную фазу. Все системы такого типа можно разделить на три группы системы, в которых происходит образование комплексов металлов (ХЛОХ), системы с добавками различных незаряженных соединений и, наконец, ион-парные системы, предназначенные для разделения заряженных соединений. [c.157]

С, , на который предварительно были нанесены Ы-алкил-и-оксипролины С-1, С]о и С1 ) подвижной фазой служил раствор ацетата меди(П) (0,1 мМ) в смеси метанол/вода (15/85 по объему). Все добавки удерживались на сорбенте [g благодаря сильным гидрофобным взаимодействиям и не вымывались из колонки. Таким образом, в данном случае, если содержание воды в элюенте было достаточно высоким, хиральные добавки в подвижной фазе могли отсутствовать. Предполагаемая структура образующегося при этом гетеролигандного комплекса показана на рис. 7.17. [c.158]

Как выяснилось, уменьшение длины алкильной цепи обычно приводит к увеличению селективности. Причина этого не вполне ясна, поскольку количество хиральной добавки, сорбированной на носителе, определено не было. Влияние состава подвижной фазы на разделение в целом выглядит следующим образом а) возрастание [c.158]

Как указывалось ранее (см. разд. 7.2.2), относительная стабильность гетеролигандных сорбционных комплексов, образующихся в ХЛОХ, в значительной степени зависит от метода их иммобилизации. В данном случае, когда хиральный лиганд физически сорбирован вследствие гидрофобных взаимодействий, для всех аминокислот / (ь) < (о). Если исходить из результатов экспериментов, то с учетом влияния подвижной фазы механизм энантиоселективного распознавания должен соответствовать представленному на рис. 7.17. М-Алкильные цепи хирального лиганда, по-видимому, должны ориентироваться параллельно цепям неподвижной фазы. При координации с Си(П) фиксированный лиганд принимает такую конформацию, что оксипирролидиновое кольцо и его Н-алкильный заместитель располагаются по разные стороны от основной координационной плоскости хелатного комплекса. Таким образом, в ге-теролигандном сорбционном комплексе, образованном о-энан-тиомером разделяемого соединения, а-заместитель в молекуле энантиомера должен быть направлен в сторону гидрофобной (С1 ) поверхности сорбента. Это приведет к стабилизации такой структуры вследствие гидрофобных взаимодействий. В то же время ъ-энан-тиомер лишен подобной возможности, так как его а-алкильный радикал направлен в сторону подвижной фазы и он элюируется быстрее, чем о-энантиомер. [c.159]

Таблица 7.11. Хиральные комплексы металлов, используемые как добавки в подвижную фазу при разделении оптических изомеров методом ХЛОХ

Логическим развитием метода ион-парной хроматографии [216, 217] явилось использование хирального противоиона (-Ь)-Ю-кам-форсульфокислоты в качестве хиральной добавки к подвижной фазе для разделения энантиомеров некоторых аминоспиртов [218]. Аминоспирты в протонированной форме образуют с анионом камфор-сульфокислоты вследствие электростатических взаимодействий диастереомерные комплексы. Предполагается, что в комплексе между партнерами возможны и другие типы взаимодействий, и в первую очередь образование водородной связи между кетогруппой и гидроксильной группой, что также влияет на наблюдаемое различие в хроматографическом удерживании (рис. 7.18). Разделение бы- [c.163]

Метиленхлорид является прекрасным растворителем для ион-парной хроматографии, и разделение энантиомеров по этому методу следует рассматривать как разделение лабильных диастереомерных ион-парных комплексов, т. е. хиральная дискриминавд1я происходит в подвижной фазе. Как и следовало ожидать, коэффициент емкости заметно снижается с увеличением концентрации полярного компонента в подвижной фазе. [c.164]

Как выяснилось, для такого контроля очень удобна ЖХ, основанная на методе ХЛОХ с применением подвижной фазы, содержащей добавки хирального соединения (см. разд. 7.3, а также описанный ниже метод) [75]. Хроматографическая система состоит из колонки С, (4,6 X 250 мм), которую уравновешивают с подвижной фазой (водой), содержащей L-фeнилaлaнин (бмМ) и сульфат меди (II) (ЗмМ). Элюируемые соединения обнаруживаются УФ-детектором при 280 нм. [c.202]

Большинство работ в области хиральной ЖХ было сконцентрировано на синтезе и изучении новых и улучшенных ХНФ и хиральных добавок в подвижную фазу. Как уже указывалось ранее, в ЖХ в общем намного проще улучшить разделение энантиомеров путем изменения подвижной фазы, тогда как в ГХ хорошее разделение энантиомеров достигается в основном благодаря высокой эффективности колонки, несмотря на сравнительно низкие значения а. Много усилий было надавлено на то, чтобы повысить эффективность в обращенно-фазовой ЖХ путем использования полых капиллярных колонок [13]. [c.239]

Разделение энантиомеров требует участия хирального агента. Этого можно достигнуть при взаимодействии пары энантиомеров с хиральным модифицирующим агентом (хиральным реагентом), в результате чего получаются диастереомеры, которые можно разделить с помощью хроматографии. Того же результата можно достигнуть при взаимодействии энантиомеров с хиральным агентом с образованием короткоживущих диастереомерных комплексов. Поскольку фвый подход требует отдельной стадии, его называют непрямым Р 5делением в отличие от второго подхода, называемого прямым раз-. лением. Если при прямом разделении хиральный агент находится непосредственно в колонке (т. е. колонка заполняется хиральной неподвижной фазой), диастереомерные комплексы будут иметь различную стабильность и будут элюироваться неодновременно. В дру- ом варианте хиральный агент можно добавить в подвижную фазу с чем, чтобы диастереомерные комплексы различались бы по стабильности и по хроматографическому поведению на ахиральной колонке. Каждый из этих трех вариантов имеет свои достоинства и недостатки. [c.112]

Общее преимущество прямого метода сводится на нет тем фактом, что в настоящее время только несколько типов хиральных хроматографических колонок или хиральных добавок к подвижной фазе являются коммерчески доступными. Тем не менее такую колонку можно использовать неоднократно, что компенсирует ее дороговизну и трудность приготовления. Метод хиральных добавок к подвижной фазе требует постоянного источника (или регенерации) хиральных добавок. Эта проблема также в какой-то степени может быть рещена при использовании аналитических колонок малого диаметра (небольшой расход подвижной фазы), но она будет оставаться серьезной при препаративных разделениях. Кроме того, хиральные добавки к подвижной фазе необходимо в конечном счете отделить от каждого энантиомера после препаративного разделения. [c.116]

Как уже говорилось выше, энантиомерная чистота определяется из относительных площадей пиков сравниваемых стереоизомеров. При использовании хирального агента или хиральной добавки к подвижной фазе диастереомеры в принципе не обязательно вызывают идентичные сигналы детекторов. В методе с использованием хиральной неподвижной фазы элюируются энантиомеры, сигналы которых одинаковы. [c.116]

Хорошо известно, что в принципе энантиомеры можно разделить хроматографически на хиральной неподвижной фазе. Для той же цеди можно использовать хиральные добавки к подвижной фазе. [c.134]

Хиральная неподвижная фаза используется шире, чем хиральные добавки к подвижной фазе. На наш взгляд, первый метод имеет неоспоримые преимущества. Хиральные колонки для жидкостной хроматографии (т. е. колонки с хиральной неподвижной фазой) можно использовать тысячи раз, и при этом не требуется специальной техники. При использовании метода хиральной добавки к подвижной фазе требуется постоянный источник такой добавки ее наличие может затруднить обнаружение энантиомеров или даже потребовать специальных детекторов. Для препаративных целей необходимо также отделять хиральную добавку от уже разделенных энантиомеров. [c.134]

В то же время следует указать, что появилось несколько весьма эффективных применений хиральных добавок к подвижной фазе. В настоящее время метод с использованием хиральной неподвижной фазы опережает метод с применением хиральной добавки как в частоте применения, так и в понимании механизмов хирального распознавания при разделении энантиомеров. Такое понимание необходимо, чтобы можно было по результатам хроматографического разделения установить абсолютную конфигурацию. [c.134]

Хиральные добавки к подвижной фазе.-. Механизм. При разделении энантиомеров на ахиральной колонке с помощью хиральных добавок к подвижной фазе процесс разделения весьма сложен. Разделение может происходить за счет комбинаций диастереомерных комплексов различной стабильности в подвижной фазе, различной адсорбции диастереомерных комплексов или адсорбции хиральной добавки к подвижной фазе неподвижной фазой таким образом, что пос- [c.153]