Количественный анализ аминокислот

Существенные экспериментальные трудности, которые до последнего времени ограничивали исследования в области белковой химии, в значительной степени обусловливались отсутствием простых и надежных способов анализа аминокислот. Лишь благодаря развитию за последние два десятилетия ионообменной и распределительной хроматографии удалось разработать автоматический метод количественного анализа аминокислот с использованием окисления аминокислот нингидрином и фотометрирования продуктов реакции [9]. Однако стремительное развитие химии белков и пептидов, среди которых обнаружены важнейшие биорегуляторы и антибиотики, уже сейчас предъявляет новые требования по чувствительности и быстроте анализа. Сложность аппаратурного оформления и дороговизна эксплуатации, безусловно, ограничивают применение автоматического анализатора Мура и Штейна и в значительной степени обусловливают интерес к разработке новых методов аналитического определения аминокислот, свободных от указанных недостатков. [c.252]

Низкая летучесть аминокислот является в первую очередь следствием полярного распределения зарядов, вызванного одновременным присутствием основной МНг- и кислой СООН-групп. Можно было бы ожидать, что элиминирование одной и в особенности обеих групп приведет к образованию летучих веществ. Как показано в ряде исследований, это действительно так. Однако в этих работах удовлетворительные результаты получены только для простых аминокислот. Ценность некоторых методик невелика из-за образования побочных продуктов, поэтому мы упомянем их только для полноты картины ГХ аминокислот, но не будем рассматривать подробно, тем более что ни одна из. них не приобрела значения ни для качественного, ни для количественного анализа аминокислот. [c.325]

КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ АМИНОКИСЛОТ [c.114]

С момента создания метод количественного анализа аминокислот использовали для анализа других природных соединений, дающих положительную реакцию с нингидрином. По сравнению с анализом белковых гидролизатов в этом случае предъявляются гораздо более высокие требования к эффективности разделения, поскольку приходится анализировать смеси очень сложного состава. Наряду с аминокислотами такие смеси включают вещества самой разной природы их единственным общим свойством является способность давать положительную реакцию с нингидрином. С целью повышения эффективности анализ в данном случае проводят на более длинной колонке. Естественно, что такой анализ требует большего времени, чем анализ белковых гидролизатов, и особой системы буферных растворов. Источники свободных аминокислот существенно различаются в количественном и качественном отношении, и, следовательно, каждую конкретную смесь приходится анализировать в особых, нестандартных условиях. [c.307]

Возможности качественного и количественного анализа аминокислот с помощью ГХ и связанные с этим проблемы можно обсуждать только после того, как будут подробно рассмотрены известные в настоящее время методики превращения аминокислот. В результате быстрого развития этой области многие из них уже устарели. В деталях мы рассмотрим лишь несколько наиболее важных методов. Обзор соответствующих исследований, выполненных к настоящему времени, представлен в табл. 14, однако сводку данных, приведенную в ней, нельзя считать исчерпывающей. [c.311]

Кроме детекторов, предназначенных для количественного анализа аминокислот и пептидов по реакции с нингидрином или другими реагентами, дающими цветную реакцию, были описаны Также и другие детекторы. Полярографическое определение аминокислот в виде их медного комплекса основано на образовании из двух молекул аминокислоты и одного иона меди темно-синего комплекса. Этот комплекс пропускают через ячейку поляро-графа, где определяется количество меди [122]. Аминокислоты можно также определять путем использования динитрофторбен-зола с последующим фотометрическим определением ДНФ-ами-нокислот при 420 нм [123]. [c.27]

ПРОБЛЕМЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО АНАЛИЗА АМИНОКИСЛОТ [c.335]

Для разделения и количественного анализа аминокислот и родственных соединений в белковых гидролизатах и физиологических жидкостях предназначены автоматические аминокислотные анализаторы, выпускаемые многими фирмами. [c.91]

В работе [290] дана оценка необходимой степени обогаще ния аминокислот, меченных N, С, 0, Н, при анализе ме тодом СИД Анализировались N ацетил к-пропиловые эфиры аминокислот, которые в случае ХИ (газ реагент метан) образу ют интенсивный пик иона МН+ Результаты исследования сви детельствуют что для определения аминокислот в образце сыворотки крови объемом 100 мкл изотопный избыток N должен быть не менее 0,08% (ат ) В работе [291] было пока зано, что количественный анализ аминокислот, меченных с избытком 0,1 % ( т) можно проводить методом СИД при ГХ—МС ХИ на уровне концентраций О 1 нмоль [c.199]

В то время промышленное производство ионитов только начиналось. Полагали, что разделение веществ на ионитах должно осуществляться благодаря различию в константах диссоциации. Однако в действительности иониты обладали и адсорбционными свойствами и они оказались наиболее удачными хроматографическими материалами для количественного анализа аминокислот. При этом вместо ранее применявшихся (при хроматографии на крахмале) органических растворителей стало возможным вести элюирование водными буферными растворами это позволило существенно усовершенствовать и ускорить детектирование аминокислот [3]. По сравнению с хроматографией на крахмале в этом случае достигалось более высокое разрешение, пики были острее, а базовая линия более стабильной. Кроме того, разделению аминокислот не мешали неорганические соли, присутствующие в образце. [c.305]

Работа 112. Количественный анализ аминокислот путем хроматографирования. Определение значений аминокислот [c.172]

Известно большое число методик, пригодных для точного количественного анализа аминокислот и пептидов (см. разд. 1.3). Обычно белки или пептиды гидролизуют до составляющих их аминокислот обработкой кислотой или щелочью при анализе биологических жидкостей белки предварительно отделяют. [c.8]

Количественный анализ аминокислот методом ГХ представляет несомненный интерес. Как правило, количественное определение аминокислотного состава пептида является одним из решающих моментов анализа последовательности. Поскольку при деградации крупного белка образуется большое число фрагментов, желательно затрачивать на анализ каждого из них минимальное количество времени и вещества. Привлечение в данном случае ГХ достаточно хорошо удовлетворяет этим условиям. Многочисленные исследования по ГХ аминокислот в конечном итоге направлены на решение этой задачи. Однако к действительно эффективному количественному методу предъявляются несоизмеримо более высокие требования, чем к качественному. Если учесть к тому же трудности получения и разделения производных аминокислот, станет ясно, почему до сих пор не разработан стандартный метод их количественного определения с помощью газового хроматографа. Основные трудности связаны, как подчеркивалось в разделе о получении производных, с полифункциональными аминокислотами. Метод, игнорирующий их идентификацию, может найти лишь ограниченное применение. Количественный анализ только простых аминокислот не может удовлетворять экспериментатора [40]. Вопрос о том, все ли аминокислоты, встречающиеся в белках, можно определять ГХ с достаточной точностью, все еще остается открытым. Здссь можно только вкратце рассмотреть имеющиеся условия и возможности. Проблемы, связанные с аппаратурой, необходимой для количественной ГХ, уже обсуждались ранее (см. стр. 302). [c.335]

Мартин А. Дж. Распределительная хроматография. [Идентификация простых пептидов. Количественный анализ аминокислот [c.291]

Количественный анализ аминокислот может быть проведен при пропускании анализируемого раствора через колонки, заполненные ионообменными смолами разделение аминокислот при этом происходит вследствие различий в их способности к комплексообразова-нию с высокополярными участками смолы. Раствор, вытекающий из колонки, смешивают с раствором ниНгидрина и интенсивность возникающего синего окрашивания измеряют с помощью фотоэлектроколориметра. Затем строят график зависимости интенсивности от времени при постоянной скорости потока. Типичная хроматограмма, полученная при анализе смеси аминокислот этим методом, приведена на рис. 20-4. [c.111]

Рассмотренные данные позволяют считать, что в ряде случаев газо-хроматографический анализ эфиров аминокислот может быть применен для определения производных с относительно высоким давлением паров, таких как эфиры алифатических и дикарбоновых аминокислот. Вероятно, что, видоизменив режимы хроматографирования, можно проводить анализ и некоторых других аминокислот. Однако вряд ли метод может быть пригоден для определения гетероциклических или двухосновных аминокислот вследствие указываемой рядом авторов деструкции их производных при хроматографическом разделении. Тем более очевидной является непригодность эфиров для количественного анализа аминокислот. Все это составляет одну из причин того, что в последних работах все большее предпочтение отдается эфирам К-замещенных производных, при использовании которых можно уменьшить размывание пиков, с одной стороны, и избежать полимеризации, с другой. [c.262]

В четвертой главе разбираются вопросы, связанные с качественным и количественным анализом аминокислот. [c.4]

Современные методы количественного анализа аминокислот основаны на элютивной ионообменной хроматографии с использованием колонок, заполненных сульфополистирольным катионитом в натриевой форме. Этот метод аминокислотного анализа впервые предложен сотрудниками Рокфеллеровского института в США Штейном и Муром [1], которые до этого занимались разделением аминокислот на крахмальных колонках. [c.124]

Количественный анализ. В настоящее время разработан ряд способов количественного анализа аминокислот. Приводим некоторые из них. [c.149]

Заметная флуоресценция появляется при температуре не ниже 37°. Преимуществом этого метода является то, что аминокислоты не разрушаются, в то время как при применении реактивов вроде нингидрина они переходят в другие соединения. Однако цветные реакции являются более чувствительными. При количественном анализе аминокислот применяют обычные методы, как, например, титрование, визуальную и фотоэлектрическую колориметрию и т. д. [c.160]

Методы хроматографии аминокислот на бумаге получили многочисленные применения в биохимии животных и растений, в микробиологии и медицине. Для количественного анализа аминокислот наиболее удобен все же способ, использующий образование комплексных соединений с медью. Содержание аминокислоты определяется по количеству меди в таком комплексе. Этот метод можно применять к смесям аминокислот, разделенных в одномерной хроматограмме. [c.161]

В настоящее время лучшим способом количественного анализа аминокислот является ионообменная хроматография [c.911]

Некоторые проблемы, возникающие при количественном анализе аминокислот методом газовой хроматографии. [c.80]

Количественный анализ аминокислот методом газовой хроматографии. (Анализ н-Ви-эфиров ТФА-производных 18 АК.) [c.83]

Количественный анализ аминокислот может быть проведен при пропускании анализируемого раствора через колонки, заполненные ионообмен- [c.67]

Из многочисленных детекторов, существующих в настоящее время, для количественного анализа аминокислот пригодны только детектор по теплопроводности, газовый денситометр и пламенноионизационный детектор. В детекторе теплопроводности для обеспечения достаточной чувствительности в качестве газа-носителя необходим гелий или водород, в газовом денситометре — азот или гелий, а в пламенно-ионизационном детекторе — высокоочищен-ный азот. [c.299]

Вместо протеинов или пептидов можно обрабатывать фенилгорчичным маслом (фенилизотиоцианат, ФИТЦ) и свободные аминокислоты [182], Как и динитрофенилирование, эту реакцию рекомендуется проводить в том случае, когда смесь аминокислот из-за наличия примесей нельзя непосредственно анализировать методом ХТС ФТГ-аминокислоты часто легче перевести в хроматографируемую форму, чем свободные аминокислоты. То обстоятельство, что ФТГ-аминокислоты поглощают УФ-свет, облегчает количественный анаЛиз аминокислот [182]. [c.425]

Способность аминокислот, как и всех других органических соединений, вступать в химические реакции определяется наличием в их составе функциональных групп (см. гл. 3). Поскольку все аминокислоты содержат аминогруппу и карбоксильную группу, каждая из них может вступать в химические реакции, характерные для этих групп. Например, аминогруппы могут быть ацетилированы, а карбоксильные группы-этерифициро-ваны. Мы не будем рассматривать здесь все органические химические реакции, в которьа способны участвовать аминокислоты, но отметим лишь две важные реакции, широко применяемые для обнаружения, идентификации и количественного анализа аминокислот. [c.126]

Пиролитическая газовая хроматография аминокислот применялась несколькими авторами, впервые Янаком [67] и Улела [68], но трудно воспроизводимые условия пиролиза не позволяют надеяться, что этот подход окажется пригодным для количественного анализа аминокислот. Тем не менее интересно отметить, что фрагменты, обнаруживаемые при пиролизе аминокислот, образуются также при фрагментации соответствующих пептидов [67—70]. По этой причине пиролитическая газовая хроматография могла бы оказаться очень полезной, если бы [c.180]

Фромажо К. Количественный анализ аминокислот в инсулине и лизоциие. В сб. Аминокислоты и белки. М., Изд-во иностр. лит-ры, 1952, с. ПО—118. Библ. 20 назв. [c.313]

Особое затруднение при количественном анализе аминокислот в виде сложных эфиров их N-TФAпpoизвoдныx вызывает разделение гистидина и триптофана, так как каждое из этих производных элюируются двумя пиками [25, 33]. Сначала элюируются диацил-производные этих аминокислот, затем моноацилпроизводные. При анализе бутиловых эфиров К-ТФАпроизводных аминокислот на одной колонке не было получено количественного и воспроизводимого разделения аргинина, цистина и гистидина [128]. [c.70]

Разрыв глюкозидной связи (тип Б]), распад с миграцией Н (тип Л) или двух Н (тип О) указывают на тип основания в выделенном объекте. Для структурного и количественного анализов аминокислот, полученных гидролизом протеинов, перспективны Мез5 -производные, получаемые непосредственно из гидролизата. [c.245]

Первый шаг в количественном анализе аминокислот сделали в 1900 г. А. Коссель и Ф. Кутчер, разработавшие метод выделе- [c.74]

В первой стадии исследования пептид должен быть полностью гидролизован, а природа образующихся при этом аминокислот должна быть определена при помощи хроматографии на бумаге. Затем по результатам количественного анализа аминокислот устанавливается приблизительная формула пептида, от которой в случае пептидов с короткой цепью особой точности е требуется в данном случае можно воспользоваться полуколиче-ствешюй хроматографией на бумаге, дающей точность +10%. Однако во всех других случаях следует пользотаться наиболее точными методами, применяемыми в анализе белков. В качестве примера можно указать на применение Пирсом и Дю Виньо [388] [c.157]