Качественный и количественный анализ аминокислот

Нингидринная реакция имеет большое значение для обнаружения аминокислот при их качественном и количественном анализе. Большинство аминокислот реагирует с нингидрином, выделяя соответствуюш,ий альдегид, СО и NN3, при этом раствор окрашивается в интенсивный сине-фиолетовый цвет ( =570 нм), растворы оранжевого [c.77]

Для определения аминокислот существуют разнообразные химические реакции, которые специфичны для некоторых из них (табл. 6.2). Эти реакции используются довольно редко, так как аминокислотный анализатор позволяет легко проводить качественный и количественный анализ и инструментальное детектирование этих соединений. Этим методом плохо определяется триптофан (Try) из-за его повышенной чувствительности к кислотам, поэтому его лучше идентифицировать с помощью химических реакций (табл. 6.2). Химической основой работы аминокислотного анализатора является реакция с нингидрином, описанная в опыте 20. [c.273]

Анализ. Обычно анализ а-А. основан на взаимод. с нин-гидрином, в результате к-рого А. расщепляется до альдегида, СО2 и NH3, а NH3 образует с нингидрином фиолетовый краситель. Для количеств, определения измеряют объем выделившегося Oj или, чаще, фотометрируют образующийся краситель. Последний метод используется в автоматич. хроматографах, позволяющих разделять на сульфокатионитах и количественно анализировать сложные смеси аминокислот и пептидов. Еще более чувствителен флуоресцентный анализ продуктов реакции А. с о-фта-левым диальдегидом. Быстро развивается лигандообменный хроматографический анализ А. и пептидов на си-ликагельных сорбентах в присутствии ионов меди. Бумажная и тонкослойная хроматография чаще используются для качественного анализа. Измерение объема N3, выделяющегося при дезаминировании А. азотистой к-той, а также титрование А. щелочью в избытке формалина (методы Ван Слайка и Сёренсена) сохранили лишь историческое значение. [c.138]

Низкая летучесть аминокислот является в первую очередь следствием полярного распределения зарядов, вызванного одновременным присутствием основной МНг- и кислой СООН-групп. Можно было бы ожидать, что элиминирование одной и в особенности обеих групп приведет к образованию летучих веществ. Как показано в ряде исследований, это действительно так. Однако в этих работах удовлетворительные результаты получены только для простых аминокислот. Ценность некоторых методик невелика из-за образования побочных продуктов, поэтому мы упомянем их только для полноты картины ГХ аминокислот, но не будем рассматривать подробно, тем более что ни одна из. них не приобрела значения ни для качественного, ни для количественного анализа аминокислот. [c.325]

С момента создания метод количественного анализа аминокислот использовали для анализа других природных соединений, дающих положительную реакцию с нингидрином. По сравнению с анализом белковых гидролизатов в этом случае предъявляются гораздо более высокие требования к эффективности разделения, поскольку приходится анализировать смеси очень сложного состава. Наряду с аминокислотами такие смеси включают вещества самой разной природы их единственным общим свойством является способность давать положительную реакцию с нингидрином. С целью повышения эффективности анализ в данном случае проводят на более длинной колонке. Естественно, что такой анализ требует большего времени, чем анализ белковых гидролизатов, и особой системы буферных растворов. Источники свободных аминокислот существенно различаются в количественном и качественном отношении, и, следовательно, каждую конкретную смесь приходится анализировать в особых, нестандартных условиях. [c.307]

В книге систематизированы как наиболее распространенные, так и менее известные методы газохроматографического анализа аминокислот, предусматривающие получение их летучих производных. Подробно рассмотрен каждый метод превращения аминокислот в летучие производные — форму, удобную для анализа — методом газо-жидкостной хроматографии. Много внимания уделено условиям анализа, жидким фазам и твердым носителям, дается критическая оценка возможных ошибок измерения. Обсуждаются результаты качественного и количественного анализа смесей аминокислот. Приводятся данные по точности количественного определения последних. [c.2]

Для анализа редких аминокислот из некоторых источников разработаны специальные условия элюирования. Системы, предназначенные для анализа аминокислот из животных тканей, приходится модифицировать при анализе аминокислот растительного происхождения, что связано с разным количественным и качественным составом экстрактов [44—46]. Разработаны также таблицы для идентификации компонентов, содержащихся в экстрактах из насекомых [47]. Для контрольных анализов изделий пищевой промышленности разработан специальный метод аминокислотного анализа гидролизатов пищевых продуктов и муки [48, 49], пива и солода [50]. Метод определения аминокислотного состава травы и силоса разработан с целью определения их кормовой ценности [51]. Для промышленных целей раз- [c.348]

Ионный обмен используют в кожевенной, гидролизной, фармацевтической промышленности для очистки растворов, а также для удаления солей из сахарных сиропов, молока, вин. С помощью ионитов улавливают ионы ценных элементов из природных растворов и отработанных вод различных производств. Промышленное производство многих продуктов жизнедеятельности микроорганизмов (антибиотиков, аминокислот) оказалось возможным или было значительно удешевлено благодаря использованию ионитов. Применение ионного обмена позволило усовершенствовать методы качественного и количественного анализа многих неорганических и органических веществ. [c.304]

Возможности качественного и количественного анализа аминокислот с помощью ГХ и связанные с этим проблемы можно обсуждать только после того, как будут подробно рассмотрены известные в настоящее время методики превращения аминокислот. В результате быстрого развития этой области многие из них уже устарели. В деталях мы рассмотрим лишь несколько наиболее важных методов. Обзор соответствующих исследований, выполненных к настоящему времени, представлен в табл. 14, однако сводку данных, приведенную в ней, нельзя считать исчерпывающей. [c.311]

Следует учитывать, что аминокислоты сильно различаются по своей структуре и отдельные реакции не всегда применимы ко всем из них, а именно некоторые реакции применимы только к алифатическим соединениям. Кроме того, при различных реакциях наблюдаются в значительной степени нежелательные побочные процессы максимальные достигаемые при этом выходы воспроизводятся с трудом и не позволяют точно количественно определять аминокислоты. Однако как качественный метод анализа газовая хроматография наряду с хроматографией на бумаге занимает важное положение в аналитической химии аминокислот. [c.271]

В четвертой главе разбираются вопросы, связанные с качественным и количественным анализом аминокислот. [c.4]

Количественный анализ аминокислот методом ГХ представляет несомненный интерес. Как правило, количественное определение аминокислотного состава пептида является одним из решающих моментов анализа последовательности. Поскольку при деградации крупного белка образуется большое число фрагментов, желательно затрачивать на анализ каждого из них минимальное количество времени и вещества. Привлечение в данном случае ГХ достаточно хорошо удовлетворяет этим условиям. Многочисленные исследования по ГХ аминокислот в конечном итоге направлены на решение этой задачи. Однако к действительно эффективному количественному методу предъявляются несоизмеримо более высокие требования, чем к качественному. Если учесть к тому же трудности получения и разделения производных аминокислот, станет ясно, почему до сих пор не разработан стандартный метод их количественного определения с помощью газового хроматографа. Основные трудности связаны, как подчеркивалось в разделе о получении производных, с полифункциональными аминокислотами. Метод, игнорирующий их идентификацию, может найти лишь ограниченное применение. Количественный анализ только простых аминокислот не может удовлетворять экспериментатора [40]. Вопрос о том, все ли аминокислоты, встречающиеся в белках, можно определять ГХ с достаточной точностью, все еще остается открытым. Здссь можно только вкратце рассмотреть имеющиеся условия и возможности. Проблемы, связанные с аппаратурой, необходимой для количественной ГХ, уже обсуждались ранее (см. стр. 302). [c.335]

Иониты широко используют для уменьшения жесткости воды и ее обессоли-вання (см. 212), для выделения и разделения разнообразны.х неорганических и органических ненов. Ионный обмен используют в кожевенной, гидролизной, фармацевтической промышленности для очистки растворов, а также для удаления солей пз сахарных сиропов, молока, вин. С помощью ионитов улавливают ноны ценных элементов из природных растворов и отработанных вод различных производств. Промышленное производство многих продуктов жизнедеятельности микроорганизмов (антибиотиков, аминокислот) оказалось возможным или было значительно удешевлено благодаря использованию ионитов. Применение ионного обмена позволило усовершенствовать методы качественного и количественного анализа многих неорганических и органических веществ. [c.326]

Хроматография является эффективным методом разделения и анализа сложных по составу газообразных и жидких смесей. Твердые вещества могут быть проанализированы после перевода их в жидкое (растворенное) или газообразное состояние. Качественный и количественный анализ проводится по характеристикам удерживания. Универсальность газовой и газо-жидкостной хроматографии значительно возрастает при сочетании хроматографического разделения и анализа компонентов масс-спектраль-ным или иным подходящим методом. Жидкостная распределительная хроматография особенно эффективна при разделении веществ, близких по химическим свойствам, например аминокислот. [c.359]

Хроматография на бумаге нашла широкое применение в химии почвы, в основном для качественной идентификации компонентов гидролизатов почвы. Это обусловлено тем, что составляющие почву соединения с трудом экстрагируются количественно ввиду их полимерного строения, а также присутствием в почве большого числа веществ, в одинаковой степени растворимых в различных растворителях. Для количественного анализа хроматографию на бумаге чаще всего применяют при определении аминокислот, содержащихся в гидролизатах почвы. Однако этот метод вытесняется колоночной ионообменной хроматографией, являющейся более точным, чувствительным и гибким методом, позволяющим анализировать большие количества веществ. [c.301]

В настоящее время во многих лабораториях имеются автоматизированные приборы-анализаторы, действие которых основано на сочетании метода ионообменной хроматографии со спектро-фотометрией. Эти приборы, напоминающие по размерам и форме небольшой шкаф, способны осуществить менее чем за 24 ч непрерывной работы полный качественный и количественный анализ сложной смеси аминокислот, получающейся при гидролизе белка. [c.17]

Анализ может быть применен для качественного и количественного определения аминокислот, пептидов, белков и т.д. [c.240]

Хемилюминесценция — это свечение в видимой и ультрафиолетовой областях спектра в результате определенных экзотермических реакций, и реакции в первую очередь принадлежат к процессам окисления многих органических веществ — аминокислот, углеводов, спиртов и др. В настоящее время хемилюминесценцию начали использовать не только для качественного, но и для количественного анализа структурных компонентов мембран и веществ, подверженных трансмембранному движению. [c.121]

АНАЛИЗ ПОЛИПЕПТИДОВ. Полипептиды, как и прочие амиды, можно гидролизовать водными растворами кислот или щелочей. После полного гидролиза полипептида можно при помощи аминокислотного анализатора установить его качественный и количественный аминокислотный состав, но не точную последовательность аминокислот. Если перед гидролизом обработать полипептид реактивом Сэнгера, то можно будет затем идентифицировать его N-концевую аминокислоту, так как она даст устойчивое окрашенное производное анилина, которое не разрушается при гидролизе. [c.402]

Поскольку свободные аминокислоты имеют структуру цвиттер-иона, они представляют собой сильно полярные соединения с очень низким давлением паров и, следовательно, не пригодны для газохроматографического анализа. Устраняя электрический заряд, их превращают в более летучие соединения, причем это достигается различными способами. Однако для ГХ необходимо, чтобы образующиеся производные были не только достаточно летучими, но и обладали бы высокой термостабильностью Чем более полярны производные, тем они более устойчивы к нагреванию, причем с увеличением полярности органических соединений увеличивается их время удерживания на колонке. Однако, как следует из соотношения между временем удерживания и температурой разделения, для того, чтобы получить величины удерживаемых объемов одного порядка, рабочую температуру нельзя выбирать произвольно. Это достаточно важный момент, поскольку при низкой термостабильности веществ в системе могут происходить неконтролируемые процессы разложения. При этом сигнал исчезает не всегда, часто он уменьшается, и появляется множество пиков. С точки зрения качественного и количественного аминокислотного анализа эти эффекты очень неблагоприятны, так как любое увеличение числа пиков [c.309]

Аминоацидурия. Качественный и количественный состав аминокислот мочи человека имеет прежде всего диагностическое значение, поскольку некоторые болезни человека возникают вследствие первичного нарушения обмена отдельной аминокислоты или группы аминокислот. Кроме того, для ряда органических поражений органов и тканей человека, а также аномалий обмена характерен свой аминокислотный спектр мочи. Ввиду этого, а также благодаря легкой доступности объекта исследования анализ мочи на наличие аминокислот приобретает большое клиническое значение. На экскрецию аминокислот большое влияние оказывают возраст, характер питания, пол, гормоны и другие факторы. Установлено, что у младенцев с мочой вьщеляется больше аминокислот, чем у взрослых. Обычно различают повышенную и пониженную экскрецию аминокислот. В свою очередь гипераминоацидурия делится на почечную, связанную с приобретенными или врожденными дефектами реабсорбции аминокислот в почках, и внепочечную, обусловленную увеличением концентрации всех или отдельных аминокислот в крови (см. главу 18). [c.466]

Ионообменная хроматография на колонках применяется в трех очень важных областях 1) для качественного и количественного аминокислотного анализа пептидов и белков, дающего ценную характеристику молекул его можно использовать Как средство обнаружения некоторых специфических различий среди белков 2) для определения аминокислотного состава биологических жидкостей, который дает не только существенную информацию о наличии свободных аминокислот, но и позволяет проследить за изменениями, происходящими в организме под воздействием многих факторов, таких, как окружающая среда, физиологическое состояние и генетическая конституция 3) для определения первичной структуры белков — чрезвычайно важной задачи биохимии сегодняшнего дня. Многие исследователи занимаются определением аминокислотной последовательности большого числа разнообразных белков. Это дает возможность установить их химическую структуру и изучить ее взаимосвязь с функцией. [c.8]

Впервые общий метод определения аминокислот в гидролизатах белков был предложен Э. Фишером. В настоящее время разработаны весьма совершенные методы анализа продуктов гидролиза белка, позволяющие с большой точностью определять качественно и количественно содержание отдельных аминокислот в тех или иных белковых веществах после их гидролиза. Эти методы основаны главным образом или на осаждении отдельных аминокислот специфическими реактивами, или на образовании с последними характерной окраски. [c.33]

Для доказательства присутствия белка в биологических жидкостях и растворах, а также установления амипокислотпого состава различных природных белков используют цветные реакции. Их применяют для качественного и количественного анализа белков, в том числе и содержащихся в них аминокислот. [c.427]

Ч1ротеииы с помощью кислотного, основного или ферментативного гидролиза могут расщепляться на простейшие составляющие — а-ами-нокарбоновые кислоты, обычно называемые просто а-аминокислотами. Ка.чественный анализ получающихся при этом смесей аминокислот связан с относительно большими трудностями. Э. Фишер (1901 г.) обрабатывал такие смеси спиртом и разделял образующиеся в результате смеси сложных эфиров а-аминокислот дробной перегонкой. В настоящее время эти соединения разделяют и идентифицируют методами газовой хроматографии. Использование ионообменной хроматографии позволяет разделить подобные смеси без предварительной этерификации. Существуют приборы, которые автоматически проводят качественный и количественный анализ смесей такого рода. При этом первоначально а-аминокислоты разделяются на ионообменных смолах, элюаты обрабатываются нингидрином, а образующиеся синие окрашенные вещества анализируются колориметрически, кривые поглощения записываются с помоп ью самописца. [c.647]

Свергун В. И., Тарабакин С. В., Панов В. П. Спектроскопия ЯМР С аминокислотных смесей. Оптимальные условия качественного и количественного анализа смеси 20 L-аминокислот.— Хим.-фармацевт, журн., 1980, т. 1, с. 104—109. [c.180]

Работы ло качественному и количественному определению аминокислот, входящих в состав белка, проводились в течение многих лет. Большинство классических методов, основанных на оригинальных исследованиях Косселя, Фишера, Осборна, Форе-мана и других, были правиметрическими и требовали выделения аминокислоты ли одного ив ее производных. Обширная литература по этому вопросу свидетельствует о громадных трудностях, сопутствующих таким исследованиям. Применение классических методов ограничивалось в значительной степени тем, что для исследований требовались большие количества белка (100 г или более). Существовавшие в то время колориметрические методы нельзя было проверить путем анализа аминокислотных смесей, составленных специально для данной цели ввиду отсутствия чистых аминокислот (не было методов для надежной оценки их чистоты). [c.209]

Метод используется для качественного анализа смесей органических веществ всех классов. Он может также служить и для количественного анализа, если при.менять микроаналитические методы, главным образом колориметрирование отдельных пятен. Классическим примером применения хроматопрафии на бумаге является качественный анализ смесей аминокислот. [c.441]

Амииокислоты могут быть превращены в летучие производные и затем проанализированы с помощью газожидкостной хроматографии (ГЖХ). Существует единственный метод одностадийной модификации — триметилсилилирование, разработанный для качественного и количественного анализа всех белковых аминокислот [119, 121]. Серьезный недостаток метода заключается в том, что некоторые аминокислоты образуют мультиплет-ные пики однако этим методом удается определить Asp и Glu в присутствии Asn и Gin. [c.285]

Определение качественного и количественного состава веществ сильно облегчилось благодаря усовершенствованию методов анализа, а в последнее время и благодаря созданию автоматических приборов, выполняющих такие операщш, как элементный анализ, разделение смесей аминокислот и др. Распространение микрометодов позволяет обходиться навесками в несколько миллиграммов вместо преж1п1х 200—300 мг. Определение молекулярной массы с помощью масс-спектромегприи требует тысячных долей миллиграмма и дает, кроме точной молекулярной массы, еще и ценные сведения о фрагментах, на которые распадается молекула. Иногда одних этих данных достаточно для построения структурной формулы. [c.338]

Все эти замечания сводятся к тому, что любые температурные данные о пригодности или непригодности жидкой фазы или набивочного материала колонки для определенного анализа должны рассматриваться критически. Если, например, сообщается о том, что в полиэфирной жидкой фазе аминокислоты разрушаются, то все же возможно, что трудности устранимы при более интенсивном, полном и равномерном импрегнировании или при выборе других материалов для носителя и колонки. В ГХ аминокислот большую роль играет хорошо подготовленная хроматографическая колонка — это основа качественного анализа и необходимое условие для количественного. Главная трудность хроматографии полярных веществ связана с наличием значительного хвостового эффекта . Но и в этом случае химическая модификация носителей и поверхности колонки наряду с очисткой разделяющей жидкости и импрегни- [c.305]

Одной из основных причин применения дериватизации в ГХ является перевод нелетучих соединений в более летучие. Особое место здесь занимают методы получения летучих производных аминокислот, которые в натуральном виде не только нелетучи, но и термически нестойки и поэтому их прямой анализ методом ГХ невозможен. В то же время актуальность задач качественного и количественного определения аминоки слот в биологии, биохимии, медицине и микробиологии стимулирует развитие методов получения и анализа летучих производных аминокислот. Использование метиловых эфиров N-тpифтopaцeтил-пpoизвoдныx [c.193]

При гидролизе и аминокислотном анализе нефти и ее фракций, приведенных на схеме, аминокислоты обнаружены в гидролизатах сырой нефти, ДМФА-экстракте, полярной фракции асфальтенов и концентрате ванадилпорфиринов [50]. Остальные нефтяные фракции аминокислот в определяемых количествах не содержат. Проведенные расчеты показывают, что все содержащееся в нефти количество аминокислотных производных переходит в ДМФА-экстракт и затем в полярные асфальтены, которые содержат около 1,3 вес. % аминокислотных остатков и порфириновые концентраты, содержание аминокислот в которых 2,6 вес.%, или около 20 мол. %. Во всех исследованных фгракциях удалось надежно идентифицировать шесть белковых аминокислот (рис. 4.16), причем аминокислотный состав как асфальтенов, так и порфиринового концентрата качественно сходен и очень близок по относительному количественному содержанию отдельных аминокислот. [c.362]