Поли лизин

Рис. 24. Спектры КД поли-/.-лизина в водных растворах в конформациях

Рис. 5. Зависимость содержания а-спирали и Р-формы в макромолекулах поли-//-лизина (фракция с мол. весом 10 ) в присутствии различных количеств додецилсульфата натрия от pH. Концентрация поли-Ь-ли-зина 3 10 М, температура 20 С. На графике ( ) показана также зависимость степени электростатического связывания детергента от pH (по данным ).

Конъюгаты метотрексата с поли- -лизином обладают значительной активностью против некоторых видов опухолей в-культуре ткани, особенно в присутствии сыворотки крови. То> же относится и к конъюгатам с дауномицином (см. ниже.). Эффект таких ФАП в большой степени зависит от способности целевых клеток связывать поликатион, что является причиной-избирательного действия. Более селективный транспорт метотрексата, как и других противоопухолевых ФАВ достигнут их связыванием с лектинами [146] и опухоль-специфическими антителами [147]. [c.121]

Метод потенциометрического титрования менее пригоден, чем метод КД, для изучения влияния четвертичных аммониевых солей на превращение а-спиральной структуры поли ( -глутаминовой кислоты) [78] в неупорядоченную, тогда как с помощью первого метода возможно определить изменение свободной энергии и энтальпии, происходящие при образовании а-спиральных и (З-конформа-ций поли ( -лизина) [10, 79] дополнительная информация о структуре этой поли (аминокислоты) получена с помощью ДОВ и вискозиметрии. [c.444]

Поли- -лизин ведет себя во многом так же, как поли- -глута-миновая кислота [122], за исключением того, что зависимо с ли от pH (pD) имеют обратный ход, так -как ионизация основных ами-но-групп, приводящая к деспирализация, праисходит при pD = 10 и ниже [133, 157]. При высоких pD возможно образование -структур, которое сопровождается осаждением [157, 158]. Этого можно избежать, проводя измерения при б°С, но понижение температуры приводит к ухудшению разрешения в спектрах. При pD = 12,9 сигнал а-СН имеет химический сдвиг около 6т и представляет собой шдрокий синглет, для е-СНг химический сдвиг равен 7,5т. Сигналы -, у- и б-прото,нов плохо разрешены и находятся в интервале 8—9т. При протонировании сигналы -, у- и б-про-тонов сдвигаются навстречу друг другу и сливаются в один сигнал е-ОНг, как и следовало ожидать, смещается в слабое поле сигнал а- СН сужается (так же, как и другие, но в большей степени) и сдвигается в слабое поле на 0,1—0,2 м. д. Более точно измерить изменение его Х1имического сдвига трудно из-за плохого раз-, решения. [c.321]

Так, например, в разбавленных растворах пoли-L-глyтaминo-вой кислоты и поли-1,-лизина [23] переход спираль — клубок может быть вызван изменением величины pH. Поли-/,-лизин содержит аминогруппу в боковом радикале мономерного звена, положительно заряженную ниже pH =9,5 и нейтральную выше рН = = 10,5. Установлено, что спиральная форма существует только в незаряженном состоянии, так что при понижении pH происходит изотермический переход в форму статистического клубка. Подобно этому поли-/.-глутаминовая кислота обладает стабильной спиральной формой при pH гиже 5, когда карбоксильные группы боковых радикалов практически не ионизованы. Переход в форму статистического клубка происходит при повышении pH. [c.76]

В качестве растворителей применяются тщательно высушенные пиридин [815, 821, 822], N,N-димeтилфopмaмид [808, 822], хлороформ, СНгСЬ [812, 813], бензол [818], ксилол [812], декагидронафталин [812], вода [809], нитробензол [815, 817, 822], нитроанизол [817], диоксан [815, 823], гидробромид поли-/-лизина [810], ацетофенон [828]. [c.138]

Села и Качальский [818, 1923] получили разветвленный поли-(з-Н-поли- ,/-аланил)-/-лизин при полимеризации N-кар-бангидрида d,/-аланина в присутствии гидробромида поли-/-лизина и показали, что он имеет более низкий коэффициент диффузии и большую вязкость. [c.139]

При анализе спектров ЭПР спин-меченого сывороточного альбумина было обнаружено, что большая часть свободных радикалов находится в таком же связанном состоянии, как и в случае поли- -лизина. Однако в спектре можно было наблюдать еще и компоненту сигнала ЭПР с другими параметрами, которые характерны для идшноксильных радикалов в твердых органических стеклах. [c.167]

Исходя из того, что одна молекула белка связывала от одного до двух свободных радикалов, авторы предположили, что в сывороточном альбумине имеется две различные аминогруппы, реагирующие с иминоксильными свободными радикалами. В случае присоединения парамагнитной метки к аминогруппе, расположенной на поверхности молекулы белка, получается спектр ЭПР со слабой иммобилизацией спин-метки. Другая аминогруппа, расположенная в глубине белковой глобулы, при связывании со спин-меткой дает спектр ЭПР сильно иммобилизованных свободных радикалов. В последнем случае свободный радикал, связанный ковалентной связью с молекулой белка, гидрофобно взаимодействует с близлежащим участком полипептидиой цепи. При кислотно-щелочной денатурации сывороточного альбумина, а также при переваривании спин-меченого белка пепсином широкие компоненты спектра ЭПР сильно иммобилизованных свободных радикалов исчезали, и сигнал ЭПР исследуемой системы приближался по своим параметрам к спектру ЭПР описанного (стр. 166) спин-меченого поли- -лизина. [c.167]

Реакции обмена в растворах полиэлектролитов были изучены методом потенциометрического титрования, который позволяет количественно измерять выход низкомолекулярных продуктов реак-ЦИ1152-65 Да рдд 5 ддд примера приведены кривые потенциометрического титрования смесей полиакриловой кислоты и солянокислого поли-1/-лизина и поли- -лизина и полиакрилата натрия. Для сравнения приведены кривые титрования малодиссоциированных компонентов—поликислоты и полиоснования (вторые компоненты — полимерные соли — полностью ионизованы в соответствующих интервалах pH). Из этих данных видно, что в отличие от растворов поликислот (или полиоснований) смеси нолиэлектролитов титруются как сильные кислоты (или щелочи) вплоть до 50—70%-ной нейтрализации (в расчете на слабый нолиэлектролит). Следовательно, при введении в растворы смесей полиэлектролитов щелочи [в случае реакции (I)] или минеральной кислоты [в случае реакции (И)] происходит связывание выделяющихся в реакции протонов (или гидроксил-ионов) и смещение равновесия реакции обмена в сторону образования солевого полиэлектролитного комплекса. [c.17]

Интересные дополнительные сведения о равновесиях реакций мегкду полиэлектролитами и о структурных изменениях комплексов в процессе реакций получены при исследовании конформационных превращений макромолекул при образовании полиэлектролитных солевых комплексов. Эти исследования проведены в основном использованием реакций синтетических и модельных нолиэлектролитов, для которых в настоящее время имеется ряд методов, позволяющих идентифицировать конформации макромолекул в растворе. Существенное изменение конформации макромолекулярных компонентов при образовании полиэлектролитных комплексов было обнаружено в работах Хаммеса и др. при исследовании реакции между противоположно заряженными полипептидами — поли-1/-глутами-новой и поли-Ь-аспаргиновой кислотами и полиоснованиями — поли- -лизином и поли- -орнитином. Методами дисперсии оптического вращения и циркулярного дихроизма было показано, что реакция между поли-//-лизином и поли-//-глутаминовой кислотой при pH = 4 и 7 (в воде и в смеси воды и метанола) приводит к конформации р-структуры полипептидов, хотя поли-Ь-лизин при этих значениях pH находится в конформации статистического клубка, а поли-Ь-глутаминовая кислота имеет конформацию клубка при pH = 7 и конформацию а-спирали при pH = 4. Образование полиэлектролитных комплексов поли-/у-аспаргиновая кислота — по-ли- -лизин и поли- -аспаргиновая кислота — поли- у-орнитин при pH = 7 сопровождается спирализацией полипептидных цепочек, в то время как индивидуальные компоненты в тех же условиях обладают конформацией клубка. [c.24]

В 1966 г. Гратцер и Макфи исследовали конформационные превращения поли- -лизина при образовании полиэлектролитных комплексов поли-1/-лизина с синтетическими и модельными поликислотами. Методом дисперсии оптического вращения в области эффектов Коттона было показано, что реакция поли-Ь-лизина с полиакриловой и полифосфорной кислотами при pH = 7 сопровождается частичной спирализацией полипептида. Так, в комплексе полилизин — полиакриловая кислота (pH = 7) степень спирально-сти полипептида составляет около 50%. В дальнейшем при изучении реакций обмена в растворах нолиэлектролитов система поли-Х-лизин — полиакриловая кислота была рассмотрена более детально На рис. 8 приведены зависимости степени превращения при взаимодействии солянокислого поли-Ь-лизина с полиакриловой кислотой (в смеси воды и этанола, содержащей 40 объемн. % этанола) и степени спиральности полипептида в комплексе от pH раствора. Для сравнения приведен профиль конформационного перехода по-ли-1/-лизина в том же растворителе. Из этих данных видно, что конформационный переход полилизина клубок — а-спираль в присутствии полиакриловой кислоты происходит при pH = 4, т. е. [c.24]

Очевидно, что если количество связанного поверхностно-активного вещества меньше эквивалентного, то дифильные противоионы могут перемещаться от звена к звену. Следовательно, реальные системы, о которых идет речь, качественно вполне адекватны только что описанной статистической модели Т. М. Бирштейн и др. Перемещение притягивающихся друг к другу противоиопов должно сопровождаться изменением конформации полимерной цепи. В состоянии равновесия реализуются конформации (или конформация), соответствующие компромиссу между стремлением к максимуму контактов между гидрофобными группами связанных противоиопов и к минимуму стерических и энтропийных напряжений в цепочке. Все эти соображения превосходно оправдываются на опыте. Особенно информативной оказалась система поли-/,-лизин — додецилсульфат натрия, конформационное состояние которой можно контролировать методами дисперсии оптического вращения и кругового дихроизма [c.290]

Применение последнего позволяет работать с очень разбавленными (порядка 10 М) растворами полипептида, избегая межмоле-кулярной ассоциации, и фиксировать не только переходы статистический клубок —а-спираль, но и следить за содержанием звеньев, существующих в р-форме, если таковые имеются. Известно, что в отсутствие поверхностно-активных ионов поли- -лизин в водном растворе при pH < 9,0 принимает конформации положительно заряженных статистических клубков. В интервале pH 9,0—9,8 происходит депротонирование аминогрупп и кооперативный конформационный переход статистический клубок а-спираль. При pH > > 10 макромолекулы существуют в а-спиральной конформации. Добавление додецилсульфата натрия совершенно изменяет картину. Во всем интервале pH < 11,6 оно приводит к возникновению компактных областей внутримолекулярной Р-структуры с антипарал-лельной ориентацией цепей. Таким образом, гидрофобные скрепки из противоиопов навязывают макромолекулам участки упорядоченной структуры, которая для свободных полипептидов в водных растворах при нормальной температуре вообще не характерна. Равновесное содержание Р-формы определяется мольным соотношением додецилсульфата и поли- -лизина (п) и величиной pH. На рис. 4 представлены зависимости содержания Р-формы (в %) [c.290]

Рис. 4. Зависимость содержания Р-структуры в цепи поли- -лизина от мольного соотношения (п) додецил-судьфата и поли-1,-лизина [концентрация поли-Ь-лизина 3 10 М (фракция с мол. весом Ю ), температура 20 °С]

Вернемся теперь к рис. 5. Из его рассмотрения следует еще один существенный вывод. При изменении pH раствора в интервале 9,8—11,6 содержание спиральных участков и областей р-формы в макромолекулах не изменяется. Оно однозначно определено соотношением додецилсульфата и поли- -лизина. Иными словами, можно полагать, что во всем этом интервале pH стабилизированы частицы, образованные путем совместной упаковки спиральных и складчатых участков полипептидной цепи, т. е. глобулн со вполне определенной третичной структурой. При pH >11,6 третичная структура скачкообразно разрушается, и полипептид переходит в конформацию а-спирали, которую в отсутствие додецилсульфата он должен был бы принять еще при pH — 9,8. [c.292]

Рис. 6. Сравнение спектров кругового дихроизма (КД) лизоцима и системы поли- -лизина — доде-цилеульфат натрия

Из гетероцепных полимеров-носителей применяют поли-этиленимин [13], полиэтиленгликоль [14], поли-а-1-аминокис-лоты, полиамиды, полиэфиры и полифосфазены. Свойства полиэтиленимина зависят от того, линейный он или разветвленный. Разветвленный полимер наряду со вторичными содержит третичные и первичные аминогруппы, которые используют для связывания ФАВ. Полиэтиленгликоль широко применяется для модификации белков (см. гл. 5). Поли-1-а-аминокислоты, а также регулярные полипептиды могут содержать различные функциональные группы, обладают вполне определенной вторичной структурой и способны к биодеструкции. Поли- -лизин и поли- -глутаминовая кислота — наиболее употребляемые носители этого типа, однако оптически чистые поли-1-аминокис-лоты пока еще трудно доступны. Поли-D, L,-сс, р-аспартамид, получаемый полимеризацией аспарагиновой кислоты в виде по-лисукцинимида, может быть легко превращен в различные производные [15] и с химической точки зрения удобен как полимер-носитель. Правда, из-за наличия звеньев с D-конфигураци-ей он не способен к биодеструкции. Потенциально ценные как полимеры-носители четвертичные полиэфирамины, способные к биодеструкции, синтезированы сополимеризацией с раскрытием [c.47]

Белковые носители уменьшают токсичность метотрексата и транспортируют его в клетки по иному механизму, чем для метотрексата без носителя. При этом деструкции ФАП на внешней поверхности клеточной мембраны не происходит, но в клетках белок быстро разрушается. Декстрановые производные метотрексата слабо связываются с клетками и проникают в них лишь в незначительной степени вне зависимости от их М (10— 150 тыс.) и поэтому мало активны [135]. Изучение физико-химических свойств метотрексата, связанного с альбумином амидной связью, показало, что конъюгаты с содержанием ФАВ от 4,9 до 12,3 ммоль на моль белка в физиологических условиях in vivo (pH = 7,4 или 5,0, 37°С) отщепляют менее 10% ФАВ. Связывание метотрексата мало отражается на размерах молекул конъюгата крупные агрегаты не образуются. В то же время противоопухолевая активность на культуре клеток L 1210 для конъюгатов оказалась на 1—2 порядка ниже, чем для исходного ФАВ [136]. Эти факты указывают на существенное влияние природы полимерного носителя на поведение ФАП в организме. Более того, для различных видов опухолей наиболее эффективными носителями метотрексата оказываются разные полимеры (например, белки или поли- -лизин). [c.119]

В зависимости от вида опухолевых клеток оптимальный носитель может меняться [142]. Это один из наиболее простых хотя и не особенно эффективный путь достижения селективное токсичности. Так, хотя поли-/.-лизин токсичен сам по себе, по лученный на его основе ФАП, содержащий метотрексат, можеп оказаться столь активным, что токсичность вводимой дозы окажется меньшей по сравнению с ФАП на основе других носителей (например, альбумина) [143, 144]. Применение поли-1.-ли зина как носителя различных противоопухолевых препарато [c.120]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология