Аминокислоты хроматографией на бумаге, общая

В настоящее время широко распространен достаточно точный нингидриновый метод определения аминокислот при помощи хроматографического разделения на бумаге. Однако разделение некоторых аминокислот обычной хроматографией на бумаге требует большой затраты времени например, для разделения основных аминокислот, необходимо минимум 4— 5 суток. Применение электрофоретического разделения позволило сократить время разделения лизина, аргинина и гистидина до 3 часов и за счет этого сократить общее время, необходимое для количественного анализа этих аминокислот, с 5—б дней до 6—7 часов. [c.254]

Мы разобрали основные пути синтеза и превращений-аминокислот, которые являются общими для этой группы соеди нений. Однако в связи с различиями в химическом строении, содержанием в растениях и ролью в обмене веществ у отдельных аминокислот имеются и свои специфические реакции. Сейчас мы познакомимся с некоторыми из этих реакций, которые характерны для ряда аминокислот, входящих в состав белков и содержащихся в растениях в свободном состоянии. Многие из этих реакций были изучены лишь в последнее время, в результате применения меченых соединений и использования метода хроматографии на бумаге. [c.249]

Такой подход был использован при изучении действия бутифоса и хлората магния на одну из сторон промежуточного метаболизма хлопчатника-азотный обмен. Опыты проведены на хлопчатнике сорта 108-Ф. Исследовали влияние дефолиантов на соотношение отдельных форм азота (общий, белковый, небелковый, свободные аминокислоты) в листовых пластинках хлопчатника, а также действие этих веществ на синтез свободных аминокислот и белка. Белковый и небелковый азот определяли методом Кьельдаля, свободные аминокислоты — методом хроматографии на бумаге, процесс синтеза белка и свободных аминокислот изучали с применением изотопа азота N 5 (14). [c.119]

Рис. 26.1. Установка Стэнли Миллера, в которой он синтезировал аминокислоты из газов, создав условия, предположительно существовавшие в атмосфере первобытной Земли. Газы и водяные пары, циркулировавшие в установке под высоким давлением, в течение недели подвергали воздействию высокого напряжения, после чего жидкие вещества, собранные в ловушке, исследовали методом хроматографии на бумаге. В общей сложности было выделено 15 аминокислот, в том числе глицин, аланин и аспарагиновая кислота.

Хроматографическое разделение аминокислот на листах фильтровальной бумаги [78] и на колонках с картофельным крахмалом [2] происходит главным образом благодаря различиям в их распределительных и адсорбционных характеристиках. Эти различия вызывают вариации в распределении аминокислот между стационарной и подвижной фазами, что в свою очередь приводит к разным скоростям миграции вдоль хроматограммы. Применение для хроматографии аминокислот синтетических ионообменных смол расширило возможности разделения за счет использования их ионообменных свойств в дополнение к распределительным и адсорбционным эффектам. Все аминокислоты, найденные в белках, проявляют амфотерные свойства прежде всего за счет карбоксила и аминогруппы, присоединенных к а-углеродному атому. Присутствие дополнительных кислотных или основных групп в боковой цепи аминокислоты значительно меняет ионизационные характеристики и общий заряд молекулы нри данном pH. В результате изменения pH раствора, используемого для проявления хроматограммы, происходят характерные изменения суммарного заряда всех аминокислот. Это можно использовать в качестве эффективного и чувствительного способа контроля их относительных скоростей миграции. [c.136]

Миллер [38, 40] воссоздал в закрытом стеклянном приборе (в замкнутой системе) вторичную примитивную атмосферу, которую подвергал непрерывному воздействию тихих электрических разрядов в течение 1 недели, а затем анализировал образовавшуюся в результате смесь нелетучих продуктов. Исходная газовая смесь состояла из метана, аммиака, водорода и паров воды (общее давление 1 атм). С помощью хроматографии на бумаге Миллер обнаружил в образовавшейся реакционной смеси несколько а-аминокислот, встречающихся в белках современных организмов. [c.46]

Общая методика разделения оргяничйских неществ на бумаге огисана выше (см. Распределительная хроматография аминокислот на бумаге ). [c.172]

Техника получения бумажных хроматограмм была уже изложена в общих чертах выше. При хроматографировании аминокислот на бумаге было замечено (Консден и др., 1944), что аминокислоты вступают в реакцию с металлами (например, медью), которые способны образовывать соли с аминокислотами. Это обстоятельство мешает получению достаточно четких хроматограмм. Для устранения указанного дефекта к растворителям добавляют в небольшом количестве такие соединения, которые осаждали бы подобные металлы или образовывали с ними комплексные соедипепия. Такими добавками могут служить HgS, H N, NHg, а-бензоиноксим (купрон). Можно также предварительно обработать бумагу слабым раствором K4Fe(GN)g. Наиболее употребительными растворителями для бумажной хроматографии аминокислот и пептидов являются фенол и коллидин, предварительно насыщенные водой. [c.147]

Хроматография на бумаге. Впервые в современной форме метод бумажной хроматографии был описан Консденом, Гордоном и Мартином [16]. Хроматографирование на бумаге может быть применено для разделения микрограммовых количеств многих веществ, таких, как алкалоиды, нуклеозиды, нуклеотиды, сахара, аминокислоты, флавоноиды, таннины, стероиды, птеридины и фосфолипиды. Метод имеет много общего с распределительной хроматографией в качестве носителя используется фильтровальная бумага. Однако в этом случае не происходит распределения в истинном смысле этого слова (между несмешивающимися растворителями), так как разделение достигается с помощью растворителей, смешивающихся с водой. Согласно Ледереру [2], вопрос о том, обусловлен ли процесс хроматографирования на бумаге адсорбцией на водно-целлюлозном комплексе или же распределением внутри этого комплекса, рассматриваемого в качестве стационарной фазы, относится скорее к области терминологии, чем к существу дела . [c.21]

Общая методика разделения двадцати ФТГ-аминокислот включает хроматографию на двух колонках (/ и //) и идентификацию ФТГ-аргинина и ФТГ-гнстидина—хроматографией на бумаге. На колонку / с скоростью 15 мл/ч подают систему А, а после выхода ФТГ-фенилаланина—систему Б. [c.383]

Для выявления адсорбционных свойств различных смол применялись колонки, содержавшие 1—2 г тонкозериенных катионитов при высоте слоя адсорбента в колонке 10—14 см или 1—4 г анионитов. Через колонки фильтровались со скоростью 15—20 капель в мин. 0,1—0,2 н. растворы аминокислот или их смесей в количестве, необходимом для полного илтг частичного насыщения адсорбента. После промывания колонок водой адсорбированные аминокислоты вытеснялись 0,05 п. растворами пиридина, аммиака или соляной кислоты. Фильтрат собирался небольшими порциями, в 1 оторых производились определения кислотности, аминного азота и аминокислотного состава качественно — методом распределительной хроматографии на бумаге и, в случае необходимости, количественно колориметрическими или весовыми методами. В некоторых опытах определялись также общий азот и аммиак. [c.136]

Ионообменные целлюлозы как слабые кислоты или основания являются плохими сорбентами авлинокислот. КМ-целлюлоза в Н -форме задерживает яхшхь диаминокарбоновые кислоты, а ДЭАЭ-целлюлоза в ОН -форме — только моноаминодикарбоновые кислоты [37]. Большая часть аминокислот (14—15 из 18 ь общей смеси) разделяется при двухмерной хроматографии на ДЭАЭ-бумаге в ОН -форме. Смесь аминокислот сначала проявляют 0,02 М раствором ацетата натрия с pH 7,5, При этом аминокислоты разделяются в последовательности значений рК их аминогрупп. Затем проявляют насыщенным водой т-крезолом в атмосфере аммиака [35]. [c.214]

Бумажная хроматография была впервые предложена именно для разделения смесей аминокислот в гидролизатах белков В настоящее время это широко используемый и лучший способ разделения естественных смесей аминокислот в фильтратах крови, тканей, в моче. Методика бумажной хроматографии и ее различные варианты описаны в общей части, здесь нужно только упомянуть, что для разделения аминокислот пригодны как восходящий, так и нисходящий способы хроматографии, но в обоих случаях для хорошего разделения обычно применяется двухмерная хроматография. Для этого на четырехугольном листе фильтровальной бумаги ( для хроматографии ) 30X30 см или больше, на двух соседних сторонах, на расстоянии 3—5 см от края, проводится простым карандашом черта. В углу на месте пересечения этих двух линий помечают место, на которое наносят 2—5 мкл (0,002—0,005 см ) исследуемого раствора и тщательно высушивают. Затем одним краем погружают лист в рас- [c.151]

Когда еще не было приборов для двухмерного электрофореза (по Гроссу), удовлетворительные результаты получали сочетанием электрофореза с хроматографией. Диксон и др. [15] проводили электрофорез при pH 3,6 с последующим хроматографированием на бумаге в другом направлении с растворителем н-пропанол—пирофосфатный буфер. Лист бумаги ватман № 3 Т-образной формы с размерами, указанными на фиг. 23, свертывают до горизонтальной части т. Последнюю увлажняют с обоих концов буфером пиридин — уксусная кислота, pH 3,6, и проводят электрофорез при 1500 в в течение 20 мин. Диксон и др. применяли прибор Михля с жидким теплоносителем, но столь же успешно может быть использован прибор для электрофореза между горизонтальными пластинами. В последнем случае, прежде чем приступать к разделению, концы горизонтальной части Т, находившиеся в контакте с бумажными фитилями, следует отрезать. При pH 3,6 кислые аминокислоты (глутаминовая, аспарагиновая и цистеиновая) разделяются основные дают одно общее пятно, а нейтральные — другое. Если использовать для хроматографии систему П — Э — ФФ Хейнса и др. (см. [c.52]

В работах [47—53] описано разделение аминокислот на тонких слоях целлюлозы. Обычно в этом случае вполне приемлемы растворители и реактивы для опрыскивания, применяемые в хроматографии на бумаге. Фон Арке и Негер [54] разработали методику разделения и идентификации 52 амйнокислот (табл. 17.3) на слоях целлюлозы с четырьмя смесями растворителей с применением пяти цветных реакций. С этой целью были приготовлены шесть пластинок раз.мером 20x20 см, покрытых целлюлозой (всего авторы использовали четыре цветные реакции при двумерной комбинации / и //), Пластинки сушили 12 ч при комнатной температуре в горизонтальном положении и наносили водный раствор пробы в угол пластинки на расстоянии 25 мм от края. Объем пробы не должен превышать 1 мкл, а общее количество данной аминокислоты не должно превышать 10 мкг. [c.484]

В настоящее время хроматография является одним из методов, наиболее щироко используемых для фракционирования белков. Первоначально этот метод был разработан для фракционирования низкомолекулярных соединений - Сахаров и аминокислот. Наибольщее распространение получила распределительная хроматография - метод, нащедщий щирокое применение для разделения небольших молекул. В общей форме этот метод состоит в следующем. Каплю образца наносят на специальную бумагу (хроматография на бумаге) или пластинку стекла или пластмассы, покрытую тонким слоем инертного сорбента, например, целлюлозы или силикагеля (хроматография в тонком слое или тонкослойная хроматография). Затем такую пластинку одним концом помещают в смесь растворителей (например, воды и спирта). По мере движения растворителей по пластинке, они подхватывают те молекулы образца, которые растворяются в них. Растворители выбирают таким образом, чтобы они связывались сорбентом по-разному. В результате молекулы образца, более растворимые в связанном растворителе, движутся медленнее, а другие, более растворимые в слабо сорбированном растворителе, движутся быстрее. Через несколько часов пластинку сущат, окрашивают и определяют положение различных молекул (рис. 4-44). [c.211]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология