Агароза стабильность

Сильный подъем в применении КЭ, особенно КГЭ, а также появление в продаже промышленных приборов связаны с американским проектом "Геном человека". С помощью метода КГЭ практически полностью были разделены молекулы ДНК в реакции определения последовательности нуклеотидов ДНК или остаточных фрагментов. Из применяемых типов гелей в классическом планарном гелевом электрофорезе в капиллярах в качестве матриц применяют в основном акриламид, агарозу и целлюлозу. Эти гели очень сильно различаются по своим физическим свойствам, таким как вязкость, стабильность в электрическом поле, пористая структура и размер пор. [c.96]

Идея методов разделения белков, основанная на сродстве молекул, которое обнаружено в биологических системах, известна несколько десятилетий (с тех пор, как стали привязывать ферменты к нерастворимым носителям). Нерастворимые гетерогенные катализаторы имеют определенные преимущества легкость выделения из реакционной смеси, возможность осуществления непрерывного катализа и повышение стабильности ферментов. Тем не менее по ряду причин полного развития аффинная хроматография и связывание ферментов с нерастворимыми носителями достигли лишь в последние годы. Развитие обоих направлений началось с использования высокопористых гидрофильных носителей, главным образом агарозы, после разработки подходящих методов связывания (Аксен и др. [1], Порат и др. [32]). [c.10]

Далее описан один из таких путей, начинающийся со стадии введения стабильных карбоксиметильных групп через простую эфирную связь в шарики поперечно-сшитой агарозы. Затем концевые карбоксильные группы могут активироваться и вводиться в реакции конденсации со специфическими лигандами или вставками или же превращаться в первичные аминогруппы реакцией с этилендиамином, как описано в разд. 11.2.3. [c.77]

Н. Андерсон) рекомендуют использовать всю, очень стабильную совокупность белков сердца крысы. Подробно описана воспроизводимая процедура получения соответствующего гомогената. Его подмешивают к агарозе, которой заливают цилиндрик геля первого направления при фиксации его по торцу пластины второго направления. Равномерно распределенные по всей длине цилиндрика, белки сердца после электрофореза во втором направлении образуют на пластине ряд параллельных полос. 80 характерных полос этого набора пронумерованы от нижнего до верхнего края пластины. Они перекрывают щирокий диапазон молекулярных масс, так что с ними можно соотносить положе- [c.57]

Были также разработаны другие методы привязывания лигандов к различного типа матрицам, но активация агарозы бромцианом с последующим присоединением аминов остается наиболее широко используемым и гибким методом приготовления специфических адсорбентов для аффинной хроматографии. Агарозы с привязанными лигандами довольно стабильны и обладают отличными характеристиками как носители для колоночной хроматографии. Поэтому, если у специфического лиганда отсутствует аминогруппа, то ее вводят искусственно. [c.159]

Стабильность агарозы. Агарозу необходимо хранить и работать с ней при температуре 5—20°. Неорганические растворители, такие, как хлороформ или толуол, яри использовании в качестве антимикробных агентов [c.143]

К матрице аффинного сорбента, помимо общих для всех хроматографических матриц требований (нерастворимость п гидрофильпость, жесткость, подходящая форма и размер гранул, химическая стабильность в условиях модификации и в самом хроматографическом процессе, отсутствие неспецифической адсорбцип ж др.), предъявляется требование наличия химических групп, позволяющих с помощью несложной химической реакции ковалеитио связывать с матрицей разнообразные биологические молекулы (лиганды и спейсе-ры). Наиболее удобными с этой точки зрения оказались гидроксильные группы полисахаридных матриц — агарозы и сефадексов, а также амидные группировки полиакриламидного геля. Если иметь в виду аффинную хроматографию белков или использование белко- [c.342]

Связывание олигоадениловой кислоты с полиуридиловой кислотой носит кооперативный характер, и стабильность комплекса зависит от температуры и концентрации олигоадениловой кислоты. Следовательно, характер кривых элюирования олигоадениловой кислоты, хроматографируемой на агарозе с иммобилизованной полиуридиловой кислотой, зависит от концентрации олигоадениловой кислоты и температуры, как это следует из рис. 3.9 и 3.10. [c.55]

О стабильности агарозы известно, что она устойчива в области pH 4—9 не рекомендуются температуры ниже 0°С и выше 40 °С. Сефароза устойчива к высоким концентрациям солей, мочевине (7 моль/л) и гуавидинхлориду (6 моль/л) [12]. Она не [c.186]

Стабильность матрицы агарозы можно значительно повысить путем сшивания эпихлоргидрином [34, 56], 2,3-дибромпропанолом [34, 36] или дивинилсульфоном [34, 58] перед активацией бромцианом. Устойчивость в водной среде как в кислой, так и в щелочной областях (pH 3—14) растет с увеличением числа сшивок. Возможность использования хаотропных солей, главным образом для элюирования антител, обсуждается в разд. 10.2. Благодаря сшиванию гели приобретают большую устойчивость в органических растворителях, таких, как спирт, диметилформамид, тетра-гидрофуран, ацетон, днметилсульфоксид, хлороформ, хлористый метилен, дихлорэтан и дихлорэтан — пиридин (1 1). [c.188]

Высокая стабильность бромциана в Ы-метил-2-пир-ролидоне использована Ниши,кавой и Бэйлоном [49] при изучении влияния колп-чества бромциана на активацию агарозы. На рис. 8.2 показано влияние бромциана на связывание 6-аминогексановой кислоты 6, 4 и 2%-ной агарозой. Бромциан прибавлялся в виде 16%-ного (по объему) ВОДНОГО раствора в Ы-ме-тил-2-пирролидоне. [c.192]

Считается, что сефароза устойчива в области pH 4—9 с ней не рекомендуется работать при температурах иже 0°С или выше 40 °С. Сефароза устойчива к действию концентрированных растворов солей или мочевины. Куатреказас [14] указывает,, что на частицы агарозы существенно не влияет продолжительное воздействие 6М раствора гуанидинхлорида или 7М раствора мочевины. Поэтому агарозные аффинные сорбенты можно отмывать от белков этими денатурирующими растворами. В течение 2—3 ч при комнатной температуре на агарозу не действуют 0,1М гидроксид натрия или 1М хлорная кислота. Ни 50%-ный (по объему) водный диметилформамид, ни 50%-ный (по объему) водный этиленгликоль не меняют структуру агарозы. Эти растворители полезны при аффинной хроматографии относительно плохо растворимых в воде соединений, например тироксина и стероидов. Аффинные сорбенты на основе сефарозы можно хранить при 4° С в виде водной суспензии с до бавкой антибактериального агента. Длительность хранения определяется лишь стабильностью связанного аффинного лиганда. Однако агарозные аффинные сорбенты полностью разрушаются при высушивании или замораживании. Согласно данным Аксена и Эрнбека )[3], эти сорбенты можно лиофилизовать, если добавить к ним декстран, глюкозу и сывороточный альбумин. Химическая стабильность биогеля А такая же, как у сефарозы. [c.16]

Мы пришли к выводу, что для самых разнообразных иммунологических исследований необходимо получать максимально возможное количество нативного белка. Это легче всего достигается с помощью классических хроматографических методов, детально описанных в разд. 5.3.3.3, которые наиболее успешно работают при использовании экспрессирующих систем на основе плазмид pUR. Другие методы применяют, когда возникают сложности с выходом, растворимостью или стабильностью гибридного белка. Например, к выделению гибридных белков методом ДСН-электрофореза в ПААГ следует прибегать в последнюю очередь, а не использовать его сразу из-за его простоты, поскольку денатурированные ДСН белки меняют свои иммуно-генные свойства и с их помощью не всегда удается получить антисыворотку к нативному белку. Если антисыворотка в основном будет использоваться в вестерн-блот-анализе, то в этом случае денатурированные под действием ДСН иммуногены могут оказаться пригодными. Иммуноаффинные методы очистки можно эффективно использовать в ограниченном масштабе, поскольку, к сожалению, элюируемые белки, как правило, необратимо денатурированы реагентами, используемыми для разрушения комплексов антиген—антитело. С помощью хроматографии на АФТГ-агарозе можно получить чистый растворимый белок, но метод не очень эффективен и дает очень низкий выход белков, содержащихся в клетке в небольшом количестве или обладающих низкой стабильностью. Выбор того или иного метода поможет сделать анализ результатов прикидочного выделения и очистки. [c.155]

Для придания большей химической и термической стабильности препараты сефарозы обрабатывают 2,3-дибромпропанолом в сильно щелочных условиях. В результате такой обработки получается поперечносшитый гель агарозы — сефароза L (препарат фирмы Pharma ia ). [c.14]

Ранее был описан активированный перйодатом сефадекс (0-50 или 0-75) [6]. После присоединения иммуноглобулина и восстановления шиффовых оснований полученные иммуноадсорбенты характеризовались очень низким неспецифическим связыванием, но гели оказались механически весьма неустойчивыми и быстро забивались. Кроме того, гели имели очень низкую емкость, потому что антитела исключались из внутреннего объеме шариков. Хотя агароза имеет больший размер пор, этот гель активируется периодатным окислением в незначительной степени, так как реакция протекает только по концам цепей полисахаридных молекул. Однако периодатным окислением может быть активирована поперечно-сшитая агароза. В результате побочной реакции, сопровождающей процесс поперечной сшивки с эпихлорогидрином, на геле образуются гликоли. Периодатное окисление этих гликолей приводит к альдегидам, которые могут реагировать с аминогруппами белка. Образовавшиеся шиффовы основания могут быть далее восстановлены, как описано для других матриц. Иммуносорбенты, полученные таким путем, характеризуются очень хорошими хроматографическими свойствами, сочетая жесткость агарозных шариков с химической стабильностью и низким неспецифическим связыванием. Могут быть достигнуты высокие скорости потока даже при использовании таких хаотропных агентов, как 6,0 М солянокислый гуанидин [7]. [c.68]

Для получения специфических сорбентов используют носители полисахаридной природы агарозу, сефарозу, различные сефадексы, а также полиакриламидные гели и пористые стеклянные поверхности. Чаще всего прилГе-няют сефарозу благодаря ее пористой структуре, обеспечивающей хороший ток жидкости и проходимость для макромолекул, и почти полному отсутствию еспецифи-ческой сорбции. Химические группы сефарозы, будучи активированы бромцианом, могут связывать в мягких условиях различные лиганды, содержащие аминогруппы (схема V). Активированная сефароза стабильна по отношению к изменениям pH, температуры, ионной силы растворов, а также к действию денатурирующих агентов— мочевины и гуаяидинхлорида. [c.216]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология