Аминокислоты с нингидрином

Образование окрашенного вещества при взаимодействии а-аминокислот с нингидрином описывается уравнениями [c.217]

Реакция аминокислот с нингидрином имеет большое значение для обнаружения аминокислот на хроматограммах и для их [c.33]

При нагревании с нингидрином (трикетогидринденгидрат) растворов аминокислот, продуктов распада белков, первичных или вторичных аминов возникает темно-синее окрашивание. Химизм этих цветных реакций довольно сложен вследствие возникновения различных побочных реакций. При взаимодействии а-аминокислот с нингидрином вначале происходит окисление аминокислоты, сопровождающееся восстановлением нингидрина (I) СООН [c.370]

Работа 18. Реакция аминокислот с нингидрином [c.32]

Количественное определение аминокислот методом элюции и последующим фотоколориметрированием [105, 106]. С помощью этого метода можно определять в растворе или гидролизате белка 0,05—0,15 мкг аминокислоты. Метод основан на реакции аминокислот с нингидрином в слабокислой среде с последующим превращением полученного в результате реакции синего производного — дикетогидринделидендикетогидриндиамина (ДИДА) в стабильное производное меди оранжево-красного цвета, имеющее максимум поглощения при 530 ммк. [c.117]

Продукты реакции аминокислот с нингидрином экстрагируются органическими растворителями [128]. Это свойство используют для определения пролина в гидролизатах белков. Гидролизуют 1 г исследуемого белка кипячением с 1 мл 4 н. хлористоводородной кислоты в течение 15 ч, после чего раствор выпаривают досуха. Сухой остаток обрабатывают одновременно 4 мл 3%-ного раствора трихлоруксусной кислоты и 1 мл 10%-ного раствора фосфорномолибденовой кислоты (для удаления пептонов) и фильтруют. Отбирают 0,5 мл фильтрата, вводят 0,5 мл 2%-ного водного раствора нингидрина и нагревают 10 мин при 100 °С. После охлаждения добавляют 50 мл воды и экстрагируют продукт реакции 10 мл изобутилового спирта в течение 3 мин. Верхний слой отделяют и измеряют оптическую плотность при 533 нм. [c.169]

Как уже указывалось, степень гидролиза или деструкции белков может контролироваться несколькими методами [41]. Вероятно, наиболее общей является реакция, основанная на взаимодействии а-аминокислоты с нингидрином с выделением аммиака, углекислого газа и альдегида и конечным образованием соединения, известного под названием фиолетовая Руэмана , и гидриндантина. Механизм этого превращения одинаков для аминов и иминокислот. При реакции с аминокислотами сначала ибра уется компглекс, характерный для первой ступени расщепления по Штреккеру. Последующий электронный сдвиг делает возможным протекание реакции декарбоксилирования и дегидратации с образованием цвиттернона. Гидролиз цвиттериона и реакция с избытком нингидрина приводят к образованию фиолетовой Руэмана П [c.400]

В современной химии аминокислот и белков важную роль играет цветная реакция на аминокислоты с нингидрином (синее окрашивание) [c.313]

При взаимодействии а-аминокислот с нингидрином образуется окрашенное вещество [c.293]

Важной реакцией, использующейся при количественном и качественном определениях аминокислот, является реакция с нингидрином, или трикетогидринденом. При нагревании большинства аминокислот с нингидрином они окисляются и распадаются на соответствующий альдегид, углекислоту и аммиак [c.190]

Некоторые аминокислоты были определены по этой реакции в 1947 г., когда альдегиды фракционировали перегонкой с паром. Затем последовало ограниченное число разработок этого метода [4, 6, 7, 65], были также предприняты попытки сократить процедуру, проводя реакцию аминокислот с нингидрином в хроматографической колонке при повышенной температуре [148, 149]. В качестве декарбоксилирующих агентов использовали также дифенилметан и п-диметиламинобензальдегид, однако удалось получить выходы лишь от 40 до 80% [7, 33]. [c.89]

Однако попытки использовать такие методы при определении аминокислот в пробах природных вод встретили серьезные затруднения не отделенные полностью нри концентрировании окрашенные органические вещества сильно мешают определению, маскируя образующуюся окраску пятна. Поэтому более целесообразным представляется проведение реакции непосредственно в растворе. С этой целью была изучена зависимость окраски, образующейся в результате реакции аминокислот с нингидрином в водном растворе, от соотношения реагентов, величины pH раствора, температуры и времени проведения реакции. Было найдено, что реакция (при низких концентрациях аминокислот) протекает тем полнее, чем выше концентрация аминокислот. [c.64]

Все а-аминокислоты, взаимодействуя с нингидрином, образуют продукты, окрашенные в синий или фиолетовый цвет. Эту реакцию дают также и белки. Взаимодействие аминокислот с нингидрином может быть рассмотрено на примере гликокола [c.32]

Окраска, возникающая при взаимодействии аминокислот с нингидрином, варьирует в зависимости от строения взятой в опыт аминокислоты, от pH раствора и ряда других условий опыта. [c.33]

Количественное определение аминокислот с нингидрином. . . [c.124]

Следующая часть этого раздела посвящена оценке результатов. В процессе анализа аминокислот оценивается интенсивность окраски (обычно при 570 нм) продуктов реакции аминокислот с нингидрином. В начале элюирования самописец регистрирует только нулевую линию, которая может сдвигаться при изменении состава подвижной фазы. Если проводится количественный анализ, такие сдвиги следует учитывать. Интегратор обрабатывает сигнал детектора очень быстро (40— 2000 имп/с), в результате чего регистрируется прохождение даже одиночного компонента. В интеграторе можно предусмотреть автоматическую коррекцию нулевой линии, и он начнет интегрирование, только когда нулевая линия существенно изменится за несколько секунд. Некоторые управляющие элементы, которые ранее являлись частью анализатора, теперь функционально включены в интегратор. Чтобы результаты расчета были правильными, важно принять во внимание форму пиков. [c.75]

В качестве детектора используют фотометр видимой области (А, = 440 и 570 нм), либо флуориметр. Разделенные аминокислоты переводят в производные, используя специальную гидравлическую схему, устанавливаемую между ионообменной колонкой и детектором. С помощью отдельного насоса подают раствор реагента (чаще всего нингидрина), который смешивается с элюатом. Полученная смесь поступает в реактор, который в простейшем случае представляет собой отрезок тефлонового капилляра. Объем реактора, его температура и расход раствора реагента подбирают таким образом, чтобы при минимальном размывании зон Лримерно за 1 мин реакция аминокислот с нингидрином произошла полностью. [c.329]

Предложите принцип работы детектора без потери разрешения, в котором аминокислоты по мере элюирования реагируют с нингидрином, образуя окрашенные продукты, идентифицированные на рис. 21-5. Подумайте о возможности взаимодействия смеси аминокислот с нингидрином до разделения на колонке. Схема реакции [c.447]

Наиболее простым и удобным по технике выполнения, воспроизводимости результатов и наименее длительным является метод хроматографии на бумаге [5, 6]. В большинстве случаев для хроматографического определения используют цветную реакцию аминокислот с нингидрином [4, 6, 7]. [c.16]

В настоящей работе реакция аминокислот с нингидрином была использована для количественного определения аминокислотного состава гидролизатов желатина, казеина, жмыха поджелудочной железы, а также в аминокислотных фракциях при получении индивидуальных /-аминокислот из вышеуказанного природного сырья. Определение проводили методом нисходящей распределительной хроматографии на бумаге. [c.16]

Новый метод анализа аминокислот быстро развивался. Появилась возможность с его помощью приступить к решению ряда сложных, казавшихся неразрешимыми проблем, и прежде всего проблёмы определения первичной структуры белков. Вскоре стало очевидным, что анализ аминокислот в его первоначальном варианте слишком трудоемок и недостаточно эффективен. Ввиду этого был поставлен ряд исследований по механизации трудоемких операций и совершенствованию организации эксперимента. Основной вклад в решение этих задач вновь внесла группа исследователей под руководством Мура и Стайна [4]. Благодаря проведению реакции аминокислот с нингидрином в проточном капиллярном реакторе и измерению интенсивности окраски на регистрирующем проточном фотометре трудоемкая обработка фракции была преобразована в непрерывный процесс. Таким образом, на основе аналитического метода был создан новый прибор — аминокислотный анализатор. Выпуск и дальнейшее усовершенствование этого прибора были предприняты промышленными фирмами. Последующие усилия были направлены на повышение эффективности и чувствительности анализа. Первое время причиной низкой эффективности прибора служила длительность элюирования. Основой для дальнейшей оптимизации процесса послужила теоретическая работа Гамильтона [5], в которой было показано, что повышения эффективности можно достигнуть путем увеличения скорости подачи элюента и уменьшения размеров зерен ионита. В результате многочисленных модификаций ионитов (а эта работа все еще продолжается) удалось более чем в 10 раз сократить время элюирования без снижения разрешения. Сокращение продолжительности анализа [c.306]

По скорости и эффективности хроматография аминокислот уже начала превосходить классические системы детектирования, и дальнейшее усовершенствование анализаторов продолжалось на основе более глубокого изучения кинетики реакции аминокислот с нингидрином и отработки конструкции реактора и колориметра [7, 16, 17]. В результате удалось еще более повысить разрешение и чувствительность анализа. Время одного анализа составляло уже менее 8 ч, и, следовательно, появилась возможность увеличить эффективность за счет круглосуточной работы прибора. Большинство операций уже осуществлялось в автоматическом режиме, однако для полной автоматизации необходимо было иметь блок ввода образцов (автосамплер). Первая модель устройства с одной петлей для ручного ввода образца уже была разработана [18], поэтому не составляло труда преобразовать ее в блок для автоматического ввода большого числа образцов. В дальнейшем для этих целей были созданы специальные патроны [19]. Теперь рабочая программа, заложенная в программирующее устройство, стала включать и управление автосамплером. Высокая эффективность прибора потребовала включения в систему интегратора или ЭВМ для автоматического обсчета результатов анализа. В последующих разделах дано описание неавтоматического базового анализатора и анализатора Te hni on, а затем совсем коротко приведены основные характеристики современных аминокислотных анализаторов. [c.316]

Предлагаемый нами метод основан на реакции аминокислот с нингидрином в слабокислой среде с последующим превращением полученного производного дикетогидринделиденди-кетогидринамина (ДИДА) синего цвета в медное производное оранжево-красного цвета с максимумом поглощения 530 ммк. [c.150]

Метод основан на реакции аминокислот с нингидрином в слабокислой среде с последующим превращением полученного в результате реакции синего производного дикетогидринделиденди-кетогидриндиамина (ДИДА) в стабильное производное меди оранжево-красного цвета, имеющее максимум поглощения при 530 ммк. [c.150]

Весьма существенна зависимость интенсивности окраски раствора от времени проведения реакции, т. е. от времени нагревания. Графически эта зависимость представляет собой кривую с максимумом, характерную для консекутивной реакции, указывающую на то, что в данном случае одновременно протекают, по крайней мере, две реакции образование окрашенного соединения (ди-кетогидриндилидендикетогидринамина) и разрушение его с образованием неокрашенных продуктов. Интересно, что увеличение концентрации нингидрина в реакционной смеси, способствуя более полному протеканию первой реакции, в то же время ускоряет вторую, т. е. избыток нингидрина разрушает образующееся окрашенное соединение. Вследствие этого чувствительность реакции аминокислот с нингидрином в водном растворе сравнительно невелика. Таким способом можно определять аминокислоты в количествах 25—80 мкг и более в пробе (в пересчете на аминный азоту. Окраска раствора неустойчива и развивается довольно неравномерно. Более равномерное развитие окраски наблюдается при связывании образующегося в результате реакции аминокислот с нингидрином соединения в комплекс с ионами некоторых тяжелых металлов, например с ионами двувалентного кадмия. [c.64]

Наиболее удачный вариант этого метода разработан Златки-сом и другими [И, 12], которые осуществили непосредственный анализ водных растворов альдегидов, образующихся при реакции алифатических нейтральных аминокислот с нингидрином. С хроматографом соединяют последовательно два реакционных сосуда один до колонки, а другой — между колонкой и детектором. Первый реактор заполняют нингидрином (30%), нанесенным на огнеупорный кирпич, и температуру его поддерживают при 140° С. Водный раствор аланина, а-аминомасляной кислоты, валина, норвалина, лейцина, изолейцина и норлейцина предварительно [c.257]

Количественное определение аминокислот. После получения хроматограмм количественно определять отдельные аминокислоты можно двумя методами при помощи нингидриновой реакции с метилцеллосольвом (мономе-тиловый эфир этиленгликоля) и по интенсивности окраски медных производных аминокислот с нингидрином. [c.42]

Количественное определение аминокислот по интенсивности окраски медных производных аминокислот с нингидрином проводят следующим образом. Хроматограммы обрабатывают 0,5%-ным раствором нингидрина в 95%-ном ацетоне, содержащим 1% уксусной кислоты. Для хроматограмм, у которых растворителем служил фенол в фосфатном буфере, концентрацию уксусной кислоты повышают до 3%. Обработанные хроматограммы выдерживают над серной кислотой и глицерином в течение 16 часов при комнатной температуре. После этого окрашенные пятна аминокислот вырезают из хроматограмм и кладут в пробирки. В каждую пробирку наливают по 8 мл 75 /о-ного этилового спирта, насыщенного Си504 бИаО. Пробирки выдерживают в течение 1 часа в темноте и затем растворы колориметрируют на фотоэлектроколориметре ФЭК-М против контроля. При ко-лориметрировании растворов, элюированных из хроматограмм, у которых одним из растворителей служил бутиловый спирт, используют синий светофильтр, а при использовании в качестве растворителя фенола в фосфатном буфере (pH 12,0) более точные результаты получаются с зеленым светофильтром. Оптическую плотность растворов определяют по сравнению с контролем. [c.43]

Элюирующие буферные растворы отводятся из запасных бутылей через приспособление для деаэрации и нагнетаются через ионообменные колонки с постоянной скоростью. Нингидриновый реактив подается насосом в оттекающий поток в точке А смесь элюата с нингидрином проходит по спирали из тефлона через кипящую водяную баню для развития окраски, образующейся при взаимодействии аминокислот с нингидрином. Величины экстинкции окрашенного раствора непрерывно измеряются в фотометрической установке с самопишущим прибором, / — масло 2 — присоединение к водяной бане (50°) 5 —давление воздуха 25 см 4 — ионообменные колонки 5 —резервуар для нингидрина 5 —азот 7 — воздух 5 —масло 9 — хронометр для солсноидп —указатель уровня //—полка, расположенная выше деаэратора па 20 см /2—деаэратор /. —кран, регулируемый соленоидом насос I /5 —насос 2 /6-насос 3 /7 —много- [c.76]

Для определения концентрации аминокислот в собранных фракциях применяется колориметрический метод, использующий цветную реакцию аминокислот с нингидрином. Разработанная методика позволяет провести от 500 до 1С00 анализов в течение недели. Чувствительность колориметрического нингидринового метода позволяет определить аминокислоту в водной или спиртовой среде при концентрации 1 10- . [c.162]

Для количественного онределепия а-аминокислот применяли колориметрический метод, в основе которого лен ит реакция взаимодействия а-аминокислот с нингидрином (трикетогидринденгидратом). Метод был использован в модификации, предложенной К. А. Кононовой и А. Л. Фаворской [5]. По указанному методу при нагревании смеси раствора аминокислоты, 2%-ного водного раствора нингидрина и 10%-ного водного раствора пиридина образуется соединение, окрашенное в сине-фиолетовый цвет. Максимум поглощения окрашенного раствора находится при длине волны 570 ммк. Оптическую плотность растворов змеряли на приборе ФЭК-М с применением зеленого светофильтра толщина слоя раствора 10 мм. [c.153]

Вышеуказанные ангидриды подвергались далее гидролизу серной кислотой, и для анализа образующихся смесей аминокислот опять применялся метод хроматографии распределения на бумаге. Небольшие количества ангидридов помещались в маленькие ампулки с 25%-ной серной кислотой. Ампулки заплавля-лись и нагревались на глицериновой бане при 130—135°. Через 10 час. ампулки вскрывались, раствор каждой ампулки тщательно нейтрализовался едким кали до pH 7, если нужно упаривался, фильтровался и затем употреблялся для анализа на содержание в нем аминокислот методом хроматографического распределения на бумаге, основанном на качественной реакции аминокислот с нингидрином. Техника метода подробно описана выше на стр. 356 в применении к ангидридам аминокислот. [c.346]

Реакция аминокислот с нингидрином, вероятно, протекает аналогично реакции с мурексидом. Трикетогидринден дегидрирует аминокислоту, превращая ее в иминокислоту (I), а сам превращается при этом в соответствующий спирт. Иминокислота разлагается, образуя альдегид (содержащий на один атом углерода меньше, чем кислота), двуокись углерода и аммиак (2), который конденсируется с не вошедшим [c.703]