Эффект маркера

Жизнеспособность гомозигот дикого типа по сравнению с маркированными гетерозиготами не представляет особого интереса, так как ген-маркер может оказывать существенное влияние на жизнеспособность своего носителя. Для устранения эффекта маркера гетерозиготы из двух независимо полученных линий скрещивают, с тем чтобы получить гетерозиготы дикого типа, а не гомозиготы. Так, скрещивание X Mi/+2 Даст [c.59]

Ввиду неизотермических условий заполнения формы и зависимости вязкости от температуры и степени превращения в процессе течения будет неизбежно происходить перестройка профиля осевой составляющей скорости, связанная с появлением поперечной компоненты. Однако, согласно условию /Я>1, осевая составляющая скорости V в области основного течения значительно превосходит поперечную компоненту, что позволяет последнюю не учитывать. В этом случае траектории движения частиц жидкости будут прямолинейными и параллельными продольной оси полости. В области фронта необходимо учитывать двухмерность течения, так как здесь имеет место фонтанный эффект [131], при котором свежая масса из центральной области потока выносится в пристеночные слои (см. рис. 4.53), оказывая влияние на распределение степени превращения и температуры. Точное описание течения в этой области требует решения задачи со свободной поверхностью [263]. Для этой цели может быть использован метод маркеров и частиц в ячейках. Однако, даже если не учитывать реальных свойств жидкости и явления тепло- и массопереноса во фронте, такой подход приводит к значительному усложнению модели. В то же время на практике оправдывают себя упрощенные способы аналитического задания во фронтальной области распределения скоростей, соответствующие экспериментальным данным по фонтанному эффекту. [c.175]

Тот факт, что рестрикционные маркеры сохраняются при изменениях генома, затрагивающих фенотип, лежит в основе чрезвычайно эффективного метода идентификации генетических локусов на молекулярном уровне. Типичным примером могут служить мутации с известным фенотипическим эффектом, которые локализованы на генетической карте, хотя функция соответствующего гена или белка не известна. К этой категории относятся некоторые тяжелые заболевания человека. Это, например, кистозный фиброз, хорея Гентингтона и многие другие серьезные и даже смертельные болезни, которые наследуются по законам Менделя. Во всех этих случаях молекулярная природа мутантной функции неизвестна и, вероятно, она сможет быть выяснена только после того. [c.48]

То же, что для РТГА. Возможны осложнения в связи с эффектом прозоны. В качестве АГ могут быть использованы целые клетки (для теста на определеиие поверхностных маркеров), если розетки образуются с АГ-положительными клетками [c.25]

Фирма ВОН для своего стандартного набора белков-маркеров в интервале М 56—280 тыс. дальтон предлагает использовать гели с 7 =3,3, а в интервале 14—72 тыс.— с 7 =10 в обоих случаях С=2,6. Отметим попутно, что эффект торможения миграции биополимеров в слабосшитых гелях с С<2,6 быстро ослабляется с уменьшением С при неизменном значении Т. По-видимому, в этом случае ярко проявляется способность жесткого комплекса белок—ДДС-Ка раздвигать гибкие, слабосшитые нити акриламида. [c.59]

Избыточное содержание в клетке клонированных центромер приводит к токсическому эффекту. Так, в клетках дрожжей за счет введения разных плазмид, имеющих независимые селективные маркеры, удалось повысить копийность СЕЮ до 13. В результате культуры содержали большое число погибших клеток и плаз- [c.303]

В качестве вспомогательного средства для качественного анализа с использованием полупроводникового спектрометра в работе представлены графически рентгеновские линии, наблюдаемые в спектрах, полученных с помощью высококачественного спектрометра с дисперсией ло энергии (интегральная интенсивность 5 000 000 импульсо В) в диапазоне 0,70—10 кэВ (рис. 6.1). С помощью такого графика удобно определять энергии рентгеновских линий и, кроме того, быстро оценивать возможные эффекты их взаимного влияния. Показано также влияние спектрального уширения для полупроводникового спектрометра с разрешением 155 эВ, что позволяет оценить перекрытие пиков. Рис. 6.1 в сочетании с таблицей (или / LM-маркерами ) энергий рентгеновских линий является вспомогательным для качественного анализа средством. Для правильной идентификации пиков необходимо знать точные (до 10 эВ) значения энергий рентгеновских линий. [c.270]

Реальные хроматограммы, показывающие влияние предварительного насыщения слоя при употреблении смесей растворителей в качестве подвижной фазы, приведены на рис. 191, 193. Из рис. 191,а видно, каким образом характерные для смеси значения Ег первоначально увеличиваются при повышении концентрации метанола (дезактивирующее воздействие преобладает над последствиями предварительного насыщения), проходят через максимум и, наконец, начинают снижаться (поскольку воздействие предварительного насыщения, приводящего к снижению Ег, начинает сказываться сильнее дезактивации слоя). Этот же эффект показан и на рис. 193 при работе с другим типом силикагеля и с другой подвижной фазой, но при большем периоде предварительного насыщения (60 мин) в результате действительный фронт занимает довольно низкий уровень (Яг.= 0.6), что подтверждено маркером (краситель с Кг случай б). Хроматограмма на рис. 193, в получена при употреблении чистого ацетонитрила (как и в случае а, но при элюировании в насыщенной обычной камере, в которой смесь еще не удается разделить, хотя степень предварительного насыщения меньше (К ж 0.75 вместо 0.6). В том и в другом случаях элюирование только одним сильным компонентом подвижной фазы (ацетонитрилом) приводит к перемещению образца (без разделения) до действительного фронта (с К, = 1) разделение оказывается невозможным из-за низкого уровня этого фронта. Когда степень предварительного насыщения достигает характерной для сорбционного насыщения, ни одно из веществ не может иметь Ег свыше 0.5-0.6 при любой элюируюшей способности растворителя. [c.134]

ОТ отца, а другая-от матери. П )и нормальном митотическом делении материнская и отцовская хромосомы не обмениваются генетическим материалом, и поэтому каждая из дочерних клеток получает от родителей полный ин-такгный набор отцовских генов и такой же набор материнских. В норме обмен генами между материнским и отцовским гомологами происходит только в половых клетках при кроссинговере во время мейоза. Иногда, однако, кроссинговер между гомологами происходит и при делении обычных соматических клеток. Это называют митотической рекомбинацшей. Если материнская и отцовская хромосомы обмениваются идентичными участками, т.е. если клетка по этим участкам гомозиготна, то такой обмен остается незамеченным. Но если обмениваться будут участки, по которым клетка гетерозиготна, то может возникнуть выраженный фенотипический эффект. В результате рекомбинации могут, например, появиться дочерние клетки, имеющие различную пигментацию, и тогда при дальнейшем размножении эти клетки образуют участки ткани разного цвета. Механизм этого иллюстрируют схемы на рис. 15-33, где показано, как после единичного акта митотической рекомбинации на фоне нормальных клеток может появиться двойное пятно, образованное двумя клонами клеток с различными генетическими маркерами. [c.83]

Далее Вольман и Жакоб ввели гипотезу о замкнутости хромосомы Е. oli в клетках F и F . В силу именно этой структуры хромосома неспособна переходить из одной клетки в другую при конъюгации. Подобная конъюгация может происходить часто (как это явствует из большой вероятности передачи фактора F), но не дает генетического эффекта. Однако в популяции клеток F" происходят с некоторой вероятностью (порядка 10" —10 на время генерации) спонтанные мутации, нри которых клетки F" превраш,аются в Hfr, и только последние являются истинно донорными клетками и приводят к переносу генетических маркеров. [c.321]

Подобные генетические эффекты получаются и под влиянием радиоактивного распада Р , если ввести горячий фосфор в хромосому Hfr, Подвергнуть клеткп конъюгации и, заморозив их, дать распасться фосфору уже в зиготе (а не в донорной клетке Hfr до конъюгации, как это проделывалось в рассмотренном ранее опыте). Как и в опыте с ультрафиолетовым облучением клеток Hfr, раснад Р нарушает связи между близкими локусами и приводит к возрастанию вероятности рекомбинации между близкими маркерами. Опыты с радиоактивными зиготами позволяют определить время копирования , в течение которого внутри материнской клетки образуется дочерняя хромосома. Ясно, что если заморозить зиготы не сразу после конъюгации, а после некоторого периода развития, в течение которого происходила редупликация хромосомы, то дальнейший распад Р уже не будет влиять на образование дочерних клеток со свойствами рекомбинантов. Опыт показывает, что иримерно после 40—60 мин. от начала конъюгации дочерняя хромосома уже образована и последующий распад Р в зиготе не оказывает действия на судьбу будущей дочерней клетки. Следовательно, время редупликации хромосомы у рекомбинанта порядка 40—60 мин. (в обычных условиях культивации бактерий). При этом время деления бактерий гораздо меньше, так как бактериальная клетка многоядерпая, и те ядра, которые пе получили отрезка мужской хромосомы, продолжают редуплицироваться нормально, в то время как оплодотворенное ядро задерживается в развитии. [c.342]

Первоначально Ds-элемент был идентифицирован благодаря его способности обеспечивать сайт хромосомного разрыва при активации регулятором Ас. Последствия такой активации показаны на рис. 37.12. Рассмотрим гете-розиготу, в которой Ds-элемент расположен на одном из гомологов между центромерой и серией доминантных маркеров ( I, Bz, Wx), эффекты которых могут быть прослежены по цвету клеток или при соответствующем окрашивании. (С/ представляет собой регулятор, который вызывает обесцвечивание алейрона Bz гликозили-рует антоцианиновые пигменты Wx обусловливает образование крахмала, окрашивающегося синим при добавлении Ij-KI. Другой гомолог утрачивает Ds и содержит рецессивные маркеры (С, bz, wx). Разрыв в локусе Ds [c.483]

Появившиеся в последнее время методы позволяют составлять подробные карты очень больших геномов. Есть две категории карт 1. Физические карты, основывающиеся на строении молекул ДНК, составляющих каждую хромосому. Сюда относятся рестрикционные карты и систематизированные библиотеки клонов геномной ДНК. 2. Карты генетического сцепления их строят, основываясь на частоте совместной передачи потомству двух или нескольких признаков - генетических маркеров, различных у отца и матери и приписываемых определенному участку хромосомы. В качестве маркеров издавна принято использовать те гены, экспрессия которых обнаруживается по их эффекту (таковы, в частности, гены, вызывающие генетические болезни, например мышечную дистрофию). Разработанные сравнительно недавно новые методы с применением рекомбинантной ДНК дали возможность использовать в качестве генетических маркеров короткие последовательности ДНК, содержащие один из сайтов рестрикции и различающиеся у отдельных индивидуумов, такие последовательности особенно удобны для генетического картирования, потому что под действием рестрикционной нуклеазы возникают фрагменты, различающиеся по своей длине, и этот полиморфизм длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ) легко может быть выявлен блот-анализом по Саузерну с помощью подходящего ДНК-зонда (рис. 5-90). [c.342]

Векторы для спаренных генов с внутреннйм промотором не эксплуатируют вирусную систему сплайсинга. Однако нередко и они не могут обеспечить эквивалентную экспрессию обоих генов. Кроме тех случаев, когда LTR или внутренний промотор оказываются неспособными эффективно функционировать в инфицируемых клетках конкретного типа, экспрессия любого маркера может подавляться также вследствие неблагоприятного взаимодействия двух промоторов. Эмерман и Темин [23], работая с вектором, содержащим внутренний промотор, обнаружили, что селекция, направленная на экспрессию 5 -гена, вызывает эпигенетическую супрессию З -промотора и наоборот. Хотя Э шт эффект, зависящий от специфического сочетания используемых промоторов, по-видимому, наиболее ярко проявляется в векторах, основанных на ретровирусах птиц, он также свойствен я векторам, принадлежащим к семейству MLV [24]. [c.304]

Другой, по-видимому чаще используемый, подход основывается на количественном исследовании ферментативной активности в случаях с хромосомными аномалиями. Большинство ферментов характеризуются четко различимым эффектом дозы гена, т.е. гетерозиготы по ферментативной недостаточности обнаруживают примерно 50%-ную ферментативную активность. Сходный эффект дозы гена можно ожидать и в том случае, когда ген теряется вследствие делеции. Такой подход к картированию использовался для большого числа генетических маркеров. Чаще всего результат оказывался отрицательным, но такого рода исключающее картирование полезно тем, что может сузить область вероятной локализации генов-маркеров. Следует, правда, учесть, что на основе этого подхода были сделаны и неправильные выводы, поскольку наличие молчащего (нулевого) аллеля, т.е. непроявляющейся мутации, может имитировать эффект делеции. [c.199]

Белковые маркеры. Полиморфные генетические системы, биохимически и патофизиологически связанные с болезнью, служат генетическим фоном , который повышает вероятность для определенных индивидов оказаться пораженными. Анализ таких полиморфизмов может привести к идентификации группы маркеров, которые вносят существенный вклад в подверженность заболеванию. При коронарном атеросклерозе исследовали много разных маркеров. Вклад большинства из них в этиологию невелик. У индивидов с группой крови А с большей вероятностью может образоваться в сердце тромб более высок у них и уровень холестерина. Минорные эффекты новышения уровня холестерина связаны с несекреторным геном, генами гап-тоглобина 2 и От -генами. Генетический [c.303]

Мутации могут происходить и в половых, и в соматических клетках. Эффект соматической мутации обнаруживается у потомков мутантной клетки, такая мутация делает индивида мозаиком. Мозаик-это особь со смешанной клеточной популяцией. В простейшем случае популяция нормальных клеток и популяция мутантных клеток сосуществуют у одного индивида. Это доказано для фибробластов и для клеток других типов. Например, можно убедиться в том, что клетки из разных участков характеризуются разными маркерами, например разными типами СбРВ. [c.196]

Эту путаницу между эффектами аллоферментного маркера и всей хромосомы не удается разрешить, используя две или три хромосомы каждого типа в качестве основного материала. Так же мало поможет получение рекомбинантов между двумя линиями или возвратные скрещивания их с любой из исходных линий в течение ряда поколений. Для того чтобы разрушить первоначальную ассоциацию локусов, требуется гораздо больше времени, чем это обычно кажется. Допустим, ген расположен на расстоянии г сантиморганид от маркерного локуса. Ассоциация р между двумя локусами будет ослабевать экспоненциально, и у дрозофилы при отсутствии кроссинговера у самцов [c.256]

Прямое окрашивание включает инкубацию клеток с флуоро-хром-конъюгированным реагентом, специфичным по отношению к исследуемому клеточному маркеру. Непрямое окрашивание предполагает два этапа. Сначала клетки обрабатывают реагентом, специфически взаимодействующим с выявляемым маркером клеточной поверхности, а потом добавляют конъюгированный с флуорохромом агент, специфически связывающийся с реагентом, использованным на первом этапе. Для обоих вариантов окрашивания основная процедура одна и та же. Клетки инкубируют с насыщающими концентрациями реагентов в течение 30 мин, а затем отмывают от несвязавшихся агентов. Для определения оптимального при окрашивании количества реагентов проводят предварительные эксперименты. В идеале следует использовать минимальные дозы реагентов, при которых наблюдается насыщение лиганда. При этом сводятся к минимуму эффект неспецифического окрашивания и ошибка в дозировке соответствующих реактивов. Некоторые реагенты, например агглютинин из проростков гороха или некоторые IgM-aнтитeлa, нужно использовать в более низких концентрациях, для того чтобы избежать агглютинации клеток. [c.336]

Ацикловир дает определенный эффект — временное уменьшение сывороточных вирусных маркеров — при хроническолг гепатите В [183] и при местном лечении подошвенных бородавок [14]. Какие-либо механизмы, объясняющие специфический эффект ацикло-вира при этих заболеваниях, неизвестны. [c.113]

Технология рекомбинантных ДНК открывает новые замечательные возможности для дальнейшего изучения экспрессии генов и функционирования их белковых продуктов у самых разных организмов. Что касается вируса гриппа, то молекулярное клонирование позволило не только быстро накопить обширную информацию о первичной структуре всех вирусных генов (хотя, например, для НА-гена этот подход оказался наиболее продуктивным), но и конструировать in vitro определенные мутанты. В настоящее время гены, кодирующие белки НА, NA, М и NS, уже вводятся в составе бактериальных плазмидных векторов в эукариотические клетки, где и экспрессируют соответствующие полипептиды [20]. В этих опытах обычно используют плазмидные конструкции, несущие промоторы SV40, поэтому клеточные РНК-полимеразы II могут эффективно инициировать синтез РНК, содержащих генетическую информацию вируса гриппа. Правда, экспрессия носит обычно временный характер и ограничена цитопатическим эффектом. С другой стороны, интеграция НА-гена вместе с селективным маркером (таким, как клеточный ген тимидинкиназы) приводит к стабильной экспрессии [20]. [c.469]

В целом следует заключить, что возможность направленной инактивации генов мышей в результате гомологичной рекомбинации революционизировало изучение генетического контроля развития и физиологии млекопитающих. Однако использование технологии получения нокаутных животных не всегда обеспечивает положительный результат. Это обусловлено тем, что инактивация ряда генов приводит к летальному эффекту. Кроме того, вводимый селективный маркер может влиять на фенотипическое проявление мутации. Данные ограничения можно преодолеть, создавая систему регулируемого включения-вьпслючения целевого гена в процессе индивидуального развития животного во всем организме или в определенных органах. [c.454]

На молекулярном уровне ранние эффекты РК проявлялись в ингибировании транскрипции генов, специфичных для переднемозговых структур. При этом экспрессия общих нейро-специфичных генов и маркеров, характерных для заднемозговых отделов, не нарушалась (рис. 4.6). [c.99]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология