Антитела FIT-меченные

Другим перспективным направлением в разработке амперометрических биосенсоров является создание устройств, основанных на иммунологических реакциях. Принцип иммунного анализа заключается во взаимодействии исследуемого вещества, называемого антигеном (АГ), со специфически связывающимся с ним антителом (АТ) с образованием комплекса АГ -АТ. При фиксированной концентрации антитела (антигена) равновесное отношение концентраций связанного и свободного антигена (антитела) зависит от его общей концентрации. Таким образом, неизвестную концентрацию антигена (антитела) можно определить при помощи фиксированного количества меченых антител (антигенов). Для этого антиген или антитело метят ферментами. Разработанные к настоящему времени иммуноферментные амперометрические датчики можно классифицировать следующим образом [c.506]

Рис. 6-35. Измерение скорости латеральной диффузии гликопротеина плазматической мембраны. А. Спепифический гликопротеин метят флуоресцирующим моновалентным антителом, связывающим только этот белок. После обесцвечивания антител лазерным лучом малого сечения измеряют восстановление интенсивности флуоресценции за счет диффузии обесцвеченных молекул из, а необесцвеченных в область облучения. Б. График, показывающий скорость восстаповлепия флуоресценции Чем больще коэффициент диффузии мембранного гликопротеина, тем быстрее

Принцип использования флуоресцирующих антител был приспособлен и для электронной микроскопии антитела или гаптены соединяются с электроноплотными веществами (например, с железосодержащим белком ферритином) или такими, которые могут быть сделаны электроноплотными уже после реакции антиген — антитело (например, с антителом связывается пероксидаза из хрена, которой после связывания дают возможность реагировать с диаминобензидином). На практике используется множество комбинаций, включающих антисыворотки с различными специфичностями, фрагменты антител, гаптены, а также такие маркеры для визуализации, как небольшие вирусы и т. п. Эти методы, применимые к целым бактериям, позволяют локализовать поверхностные антигены точнее, чем это делают с помощью оптического микроскопа. Преимущества электронной микроскопии становятся еще более очевидными, когда меченые антитела применяют еще до фиксации, заливки и приготовления срезов, так что метка видна в тонких срезах. В некоторых случаях аналогичным образом метят не антитела, а другие вещества с известной специфичностью чаще всего применяются лектины растений, такие, как конканавалин А, которые специфично связываются с сахарными остатками [88]. [c.125]

Эти методы основаны на специфичности антител при выявлении на срезах тканей клеток локализации антигенного белка среди всех других белков. Для идентификации антител в местах их специфического связывания антитела метили флюоресцентны- [c.105]

Чаще всего в настоящее время антиген или антитела метят радиоактивным иодом Иод включается по [c.261]

Мероцианиновый краситель Н-7 Ы-Металлирование оснований Шиффа К-26, Р-Зд а-Металлирование тиоэфиров Л-5[а, б Металлоорганические реакции ВЧ 3.1.5 Метано[10]аннулен Л-29 Метилгликозиды Р-18а Михаэля присоединение И-6, К-7, К-13, Л-17, Л-18, Л-25а, М-26, М-Юа, Р-бг, Р-14в Моноалкилирование двухатомных фенолов М-286, 0-1 Моноклональные антитела ВЧ 7 Мочевины синтез М-2ба [c.681]

В первом варианте, селекционированном в присутствии продуцируемого мышиной гибридной моноклонального антитела к НА Мет/71, пролин в положении 143 в НА1 заменен на гистидин. При второй селекции исходный вариант продуцировался в присутствии антитела к новому антигенному сайту на этом варианте, образованном изменением в последовательности пролина в положении 143 на гистидин. Это антитело получали абсорбцией с вирусом Мет/71 дикого типа гипериммунные кроличьи антисыворотки получали к НА варианта. [c.139]

Иммунная система животных реализуется таким образом, чтобы ответная реакция наступала в нужный момент, была направлена на определенный антиген, была адекватна и строго ограничена во времени. Такая защитная функция возникла давно в процессе эволюции из клеток двух типов —лимфоцитов и макрофагов. Если эти условия защиты в силу определенных причин не могут обеспечить устойчивое состояние организма, он заболевает и погибает. Чтобы предотвратить заболевание, антиген метится специфическим антителом и присоединяется к Т-клетке или макрофагу. Роль макрофагов состоит в превращении антигенов в иммуноген, т. е. в соединение, способное индуцировать образование антител, и т. д. Механизм этого процесса и природы иммуногенов пока до конца не выяснены. [c.28]

Необходимым условием для осуществления гомогенного иммуноанализа такого типа, по-видимому, является различие в коэффициентах диффузии между свободным меченым антигеном и антигеном, связанным с антителами. Следовательно, такие мето- [c.218]

До.менная организация хроматина, как уже говорилось, проявляется на уровне метафазных хромосом. Если обработать мета-фазную хромосому при высокой концентрации Na l, удаляющей гистоны, то происходит ее деконденсация и ДНК отделяется ог остова метафазной хро.мосомы в виде большого количества петель (рис. 129). Для сохранения структуры эукариотических хромосом совершенно необходимы ионы Са (и, возможно, Си- ). Остов-сохраняет общую форму метафазной хромосомы и состоит главным образом из полипептидов двух типов. Один из них, по-видимоМу, топоизомераза П. Если окрасить метафазные хромосомы антителами к топоизомеразе И, выяв тяется структура, очень сходная с остовом, видимым при удалении гистонов. Начало и конец каждой Пстли ДНК в таких распушенных метафазных хромосомах локализуются в одном и том же-месте остова. Размер одной петли для млекопитающих составляет в среднем обычно 40—50 т. п. н. [c.246]

Развитие гистохимической техники позволило использовать антитела, специфичные по отношению к разным ферментам. Эти антитела метят либо флуоресцентными группами, с тем чтобы их можно было исследовать оптическими методами [3337], либо ферритином, что позволяет исследовать их в электронном микроскопе, либо же пероксидазой, которую можно затем определить гистохимически с помощью бензидина [5124]. По локализации конъюгированных антител судят о локализации исследуемого фермента. [c.86]

В первых работах по применению ПВОФ в иммуноанализе (18, 27, 32] использовались меченые реагенты. В этих работах антитела метили флуоресцеином, а гаптены (например, фенилмышь-яковую кислоту или морфин) иммобилизовали в виде конъюгата с альбумином на поверхности кварцевой пластины. Количество меченных флуоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ) антител, связавшихся с иммобилизованными гаптенами, определяли с помощью [c.248]

Иммунометрическим анализом называют такой вариант иммунологического анализа, при котором роль количественно определяемого компонента играют меченые антитела. Это отличает его от конкурентных радиоиммунологического или иммуноферментного вариантов анализа, проведение которых основано на использовании меченых антигенов, конкурирующих с тестируемым антигеном за ограниченное число центров связывания антител. Антитела метят с помощью радиоизотопов, ферментов, флуорофоров, люминофоров или каким-либо иным способом, позволяющим в конечном итоге зарегистрировать сигнал, хотя бы и опосредованно, через некую сложную систему промежуточных звеньев. Описаны две существенно различающиеся схемы проведения иммунометрического анализа — одноцентровый анализ и двухцентровый (или сэндвич-анализ). [c.244]

В качестве маркеров применяют также ферменты. Основгшная на этом принципе специальная аппаратура для высокочувствительного ферментативного иммунохимического анализа выпускается серийно. В этом случае определяемый компонент метят ферментом. С антителами взаимодействуют как свободные, так и связанные с ферментом соединения, причем активность фермента при образовании комплексов АГ-АТ. как правило, подавляется (иногда усиливается). Концентрацию исследуемого вещества определяют путем измерения активности фермента по отношению к соответствующему субстрату. Чем больше концентрация немаркированного соединения, тем меньше фермента связьшается антителами и тем выше его активность. При этом достигается высокая чувствительность определений, характерная для ферментативных методов анализа. Использование ферментов-маркеров для контроля за ходом иммунохими- [c.299]

Исследования зависимости констант равновесия (связывания) от структуры Г или соответствующей детерминантной группы АГ были проведены Полингом и Прессманом (1944—1957). В частности, были получены АТ к ионам орто-, мета- и /гара-азобеизол-арсоната. Антитела к каждой из этих групп действуют так, как если бы они вступали в структурное соответствие с ваи-дер-ваальсовой поверхностью детерминантной группы. [c.125]

Чтобы определить, произошло ли лигирование, 5 -конец зонда X метят биотином, а З -конец зонда V — дигоксигенином, низкомолекулярным соединением, связывающимся с соответствующим антителом. После гибридизации и лигирования проводят денатурацию ДНК для высвобождения гибридизовавшегося зонда и переносят смесь в небольшую пластиковую лунку, покрытую стрептавидином. Лунку промывают, чтобы удалить весь материал, кроме связавшегося со стрептавидином биотинилированного зонда. Затем добавляют в лунку антитела к дигоксигенину, предварительно соединенные со щелочной фосфатазой. После промывания, в ходе которого происходит удаление несвязанного конъюгата, добавляют бесцветный хромогенный субстрат. Окрашивание раствора в лунке свидетельствует о связывании антитела к дигоксигенину с зондом, меченным дигоксигенином, т. е. о том, что этот зонд был лигирован с зондом, меченным биотином. Если же окрашивания не происходит, значит лигирования не было. [c.198]

Для повышения чувствительности тестов антигены или антитела адсорбируют на эритроцитах (РНГА, РОНТА, РТОНГА, РГадсТО, РРГ), метят их ферментами (ИФА), радиоактивными изотопами (РИА, РПГ), флюорохромами (РИФ) или же используют принцип лизиса эритроцитов при взаимодействии антигенов и антител в присутствии комплемента (РСК, РРГ). [c.273]

ЗИН и альдобионовая кислота камеди акации ингибируют, а метил-2 4-ди-О-метйлглюксзуронид не ингибирует образование этих осадков. Возможно, что эти перекрестные реакции зависят от сродства лошадиных антител с глюкуроновой кислотой и поскольку вишневый клей образует значительный осадок с анти-SII-сывороткой, альдобионовая кислота SII сходна с альдобионовой кислотой вишневого клея. [c.679]

Т. И. Гришина [16] применила этот метод приготовления эритроцитарного диагностикума для выявления антигаптенных антител к продукту синтеза витамина Ве (2-метил-3-нитро-4-1метокси1метил-5-циан - 6 - хлоридпири-дин) у рабочих комбината синтетических витаминов. Эти исследования были проведены с целью выявления этиологии наблюдавшихся у рабочих поражений кожи и верхних дыхательных путей. Так как рабочие подвергались воздействию комплекса токсических веществ, в том числе и обладающих раздражающим действием, аллергическая природа этих поражений высказывалась клиницистами лишь предположительно. Исследования [c.219]

Далее Кон произвел кинетический эксперимент с у-глобули-ном путем введения в суспензию отдельных клеток лимфатического узла, синтезирующих антитела, смеси радиоактивных аминокислот в виде короткого (3—5 мин.) импульса. Оказалось, что обе части А и С макромолекулы у глобулина метятся в точности одинаково. Что касается части В, то за короткое время данный фрагмент не метится совершенно, откуда следует что он — инертный носитель, синтезируемый клеткой впрок и используемый при синтезе антител для скрепления активных фрагментов ковалентными связями. [c.505]

Совсем недавно было опубликовано сообщение о том, что стереоизо-мерные формы одного и того же полимера образуют ассоциаты, возникновение которых сопровождается резким снижением растворимости. Вата-набе и др. [204] обнаружили, что смешение разбавленных растворов изотактического и синдиотактического полиметилметакрилата в хорошем растворителе приводит к мгновенному образованию геля. Полученный гель давал картину резкой дифракции рентгеновских лучей и имел хорошо выраженную температуру плавления, на которой совершенно не сказывалось соотношение двух полимерных компонентов при смешении. На основе этих данных можно предположить, что из двух стереоизомерных полимеров образуется стехиометрический комплекс. Природа этого комплекса была выяснена Ликвори и др. [205]. Их результаты будут обсуждены в гл. VIII. Подобный вывод может быть сделан на основе данных, полученных Иошида и др. [206], о том, что смешение растворов поли-у-метил-L-глутамата и поли-у-метил-В-глутамата в диметилформамиде приводит к осаждению оптически неактивного материала, в каком бы соотношении оптически активные полимеры ни смешивались. Эти результаты имеют очень большое значение, так как они показывают, что характерное для специфического взаимодействия белков образование комплексов в соответствии со стереохимическими соотношениями (например, образование комплексов фермент-субстрат и антиген-антитело) не всегда ограничивается макромолекулами, возникающими в живых организмах. [c.84]

Процесс взаимодействия антитело—антиген отличается высокой селективностью (рис. 18.3), что наглядно демонстрируется в опытах с синтетическими антигенами. Низкомолекулярные вещества сами по себе не индуцируют синтез антител, но после их присоединения к молекуле белка стимулируется образование антител как к белку, так и к присоединенному низкомолекулярному веществу. Если в роли последнего выступают сходные по химической природе вещества, например пара-, мета-и ор о-изомеры бензойной кислоты, то по отношению к каждому из них синтезируются специфические антитела, не реагирующие с другими изомерами. Избирательность взаимодействия обусловлена строгой компле-ментарностью между структурой активного центра антитела и структурой некоторого участка антигена. [c.487]

Рис. 6-37. Три домена плазматической мембраны сперматозоида морской свинки, выявляемые с помощью моноклональных антител. Сперматозоид показан схематически в верхней части рисунка. На каждой из трех микрофотографий (А, Б и В) иммунофлуоресцентное окращивание клеточной поверхности различными моноклональными антителами сочетается с фазово-контрастным изображением тех же клеток. Антитела на (AJ метят только верхнюю часть головки, на (Б) - только нижнюю часть головки, а на (В) - только хвост. (АнБ предоставлены D. G. Myles et al.. ell, 23, 434-

Активируются ли различные единицы репликации случайным образом или же существует строгий порядок, согласно которому и удваиваются определенные области генома Для того, чтобы ответить на этот вопрос, была проведена серия экспериментов. Синхронизированную клеточную культуру, находящуюся в S-фазе, в течение коротких промежутков времени метили аналогом тимидина 5-бромдезоксиуридином (BrdU). Области митотических хромосом, включившие метку в свою ДНК. можно обнаружить в М-фазе по снижению окрашивания определенным красителем или по связыванию со специфическими антителами. Такие опыты показали, что области хромосом реплицируются в виде больших единиц, а очередность их удвоения в S-фазе для каждой хромосомы строго регламентирована (рис. 9-60). [c.139]

Антигенная специфичность гаптенов сильно зависит от их химической структуры. Так, введение дополнительных групп может сильно исказить антигенный портрет того или иного соединения. Например, тироксин и трийодтиронин отличаются только одним остатком I, чего вполне достаточно, чтобы антитела против этих гормонов сильно различались перекрестной реактивностью. Классическими примерами стали исследования с пара-, орто- и мета-аминобензойной кислотами, которые практически не дают перекрестных реакций при сопоставимых концентрациях. [c.16]

Карты триптических пептидов (растворимых при pH 6.5) из S-карбокси-метилированпого НА1 вируса Мет/71 дикого типа и одного из четырех вариантов, отобранных с продуцируемым гибридомой моноклональным антителом Н14/А2. [c.134]

С другой стороны, когда сыворотку против варианта Мет/123/4 (Про 143- Гис, см. табл. 8) абсорбировали с вирусом Мет/71 дикого типа, высокие уровни ингибирующей активности к варианту оставались после того, как вся ингибирующая активность к вирусу была удалена. Это антитело к варианту не было отделено после повторной абсорбхщи сывороток с вирусом дикого типа и, таким образом, должно быть направлено против единственного нового антигенного сайта на НА варианта. В этом отношении он ведет себя как моноклональное антитело. Подобные результаты были получены, когда антитело к НА варианта, который показал изменение в 143-м положении НА1 с пролина на треонин (см. табл. 8), абсорбировали с вирусом дикого типа. [c.139]

Наконец, показательно, что у большинства алкоголиков возрастает уровень антител к морфиноподобным соединениям. Понятна поэтому настойчивость, с которой современные исследователи после открытия опиоидных пептидов (а это произошло позже обнаружения сальсолинола и других морфиноподобных веществ, образующихся после пофебления алкоголя) ищут корреляции между уровнем последних, а также состоянием опиоидных рецепторов, с одной стороны, и глубиной и фазой алкоголизма, с другой стороны. Найденные сейчас корреляции, подтверждающие более или менее значительное участие системы опиоидов в механизмах алкоголизма, свидетельствуют о довольно сложных отношениях, подчас противоречивых. Так, например, показано меньшее содержание мет-энкефалина в мозге предрасположенных к алкоголю животных и меньшая концентрация в гипоталамусе р-эндорфина у живот- [c.420]

Радиоиммунологический метод. Постановку РИМ осуществляют следующим способом. На предварительном этапе готовят препарат иммуноглобулина кролика против иммуноглобулинов мыщи и метят его радиоактивным иодом. Приготовление меченых вторичных антител проводят следующим образом. [c.115]

Исследуемые антитела взаимодействуют с иммобилизованным штигеном. После промывки добавляют конъюгат антивидовых ан- ител с лектином в присутствий избытка специфического для лекти-[а углевода (например, метил-р-О-маннозида в случае конканава-[ина А) для предотвращения связывания лектина с углеводным сомпонентом антител и иммобилизованного антигену. [c.108]

Одним из первых производных ферроцена [бис(циклопента-диенид)железа] в качестве метки для антител был применен 3-карбокси-4-ферроценид-фенилнзотноцианат, выполняющий роль маркера в электронной микроскопии [30]. Кане и др. [31, 32] впервые предложили использовать в иммуноанализе металлсодержащие метки. Они метили низкомолекулярные гаптены в основном металлоорганическими соединениями. В принципе любой металл может реагировать с подходящим органическим лигандом, однако Кане уделил основное внимание соединениям ртути и железа, хотя были получены также гаптены, меченные хромом, медью, [c.217]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология