Тонкослойная хроматография нингидрин

Анализ. Обычно анализ а-А. основан на взаимод. с нин-гидрином, в результате к-рого А. расщепляется до альдегида, СО2 и NH3, а NH3 образует с нингидрином фиолетовый краситель. Для количеств, определения измеряют объем выделившегося Oj или, чаще, фотометрируют образующийся краситель. Последний метод используется в автоматич. хроматографах, позволяющих разделять на сульфокатионитах и количественно анализировать сложные смеси аминокислот и пептидов. Еще более чувствителен флуоресцентный анализ продуктов реакции А. с о-фта-левым диальдегидом. Быстро развивается лигандообменный хроматографический анализ А. и пептидов на си-ликагельных сорбентах в присутствии ионов меди. Бумажная и тонкослойная хроматография чаще используются для качественного анализа. Измерение объема N3, выделяющегося при дезаминировании А. азотистой к-той, а также титрование А. щелочью в избытке формалина (методы Ван Слайка и Сёренсена) сохранили лишь историческое значение. [c.138]

Тонкослойная хроматография [70]. Пантотеновую кислоту можно идентифицировать с помощью хроматографии на силикагеле О. Подвижным растворителем служит вода или смесь ледяная уксусная кислота — ацетон — метиловый спирт — беиз ол (5. 5 20. 70) Для обнаружения пятен хроматограмму нагревают в течение 30 мин до 160°С, опрыскивают раствором нингидрина (см. IX. 3. а) и снова нагревают в течение короткого времени. [c.489]

Для тонкослойной хроматографии фенилтиогидантоиновых производных аминокислот в качестве сорбента использовали также силикагель, а в качестве растворителей системы ксилол — метанол (80 10) и гептан — дихлорэтан — пропионовая кислота (45 25 30) [186]. Проявление велось при помощи 1,7%-ного раствора нингидрина в смеси метанол — коллидин — уксусная кислота (15 2 5). Этим методом можно разделять фенилтиогидантоины, имеющие близкие значения Rf. [c.115]

В литературе имеются данные о хроматографической подвижности некоторых метиловых эфиров глюкозамина при нисходящей хроматографии в системах бутанол — этанол — вода (4 1 5, по объему [135, 136] 4 1 1, по объему [141]), а также для восходящей хроматографии в системах этилацетат — пиридин — уксусная кислота — вода (5 5 1 3, но объему [147] и 5 5 3 1 [114]). В некоторых случаях для разделения использовали тонкослойную хроматографию на силикагеле в системе бензол — метанол (3 2, но объему восходящая) [139]. Эти вещества можно обнаружить на хроматограммах с помощью нингидрина. [c.258]

Этерификацию можно контролировать с помощью тонкослойной хроматографии, так как отсутствие реакции с нингидрином указывает на ацилирование а-аминогруппы. Будучи полезной на первом этапе исследования, методика, однако, не является удовлетворительной для определения процента превращения малых количеств аминокислоты. Сравнение площадей пиков в ГХ аминокислот, прошедших все микроколиче-ственные синтетические операции, с пиками высокоочищенных стандартных образцов позволяет провести точную количественную оценку методики получения соответствующих производных [41, 84]. Намного труднее поставить опыты для доказательства того, что вещество устойчиво на колонке, а площадь регистрируемого пика действительно отвечает известному количеству аминокислоты. Большинство исследователей довольствовалось предположением, что пик правильной формы измеряет все количество аминокислоты, нанесенной на колонку. Частичное решение этой проблемы было предложено Блау [И], рекомендовавшим сравнивать площади пиков, полученных на выбранной фазе и на очень неполярных фазах (5Е-30). Для того чтобы компенсировать потери, связанные с обработкой или различными условиями ввода пробы, необходимо включать внутренний стандарт. В пламенно-ионизационных детекторах молярная интенсивность сигналов для всех аминокислот различна, но линейность интенсивности сигнала в нормальных рабочих пределах позволяет проводить количественное измерение неизвестных соединений, поэтому между ними существует прямо пропорциональная зависимость. Для вычисления молярных соотношений (например, в пептидном гидролизате) внутренний стандарт не требуется. Его нужно включать в одинаковой концентрации в стандартную анализируемую смесь в том случае, если нужно рассчитать абсолютное количество каждой аминокислоты (см. разд. обсуждение в работе [41]), [c.127]

Чистоту БОК-аминокислот наиболее удобно проверять методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) (см. стр. 134—139). БОК-группу из производных удаляют действием паров НС1 после выдерживания пластинок для ТСХ в подходящем растворителе затем проводят опрыскивание нингидрином. Чистые БОК-аминокислоты устойчивы при комнатной температуре В течение длительного времени, но оставшиеся в нцх [c.70]

Для тонкослойной хроматографии применяют подвижный растворитель хлороформ-метанол-вода (65 25 4) или хлороформ-метанол-уксусная кислота-вода (25 15 4 2) проявляют раствором родамина или йодом. Для идентификации аминофосфатидов (кефалина) хроматограмму опрыскивают раствором нингидрина для холинсодержащих фосфолипидов (лецитина) применяют реактив Драгендорфа [15]. Идентифицированы следующие фосфолипиды [9J лецитин (R — 0,6) и кефалин (Rf —0,32). В качестве метчиков применяли синтетический лецитин и фосфолипиды желтка яйца. [c.374]

Весьма ценной разновидностью обычной тонкослойной или бумажной хроматографии является диагональная хроматография. Сначала нанесенный материал хроматографируют в одном направлении, затем в тонком слое на пластинке или бумаге проводят определенную химическую реакцию, после чего осуществляют разделение в другом направлении. Немодифицированные соединения располагаются по диагонали пластинки, тогда как продукты реакции оказываются смещенными по отношению к ней. Этим методом исследовали фотохимические [149] и другие [147] реакции флавинов. Аналогичный диагональный электрофорез применялся для идентификации пар —8Н-групп, образующих в белках дисульфидные мостики [150]. Пептидные фрагменты, содержащие 8—8-мостики, разделяли с помощью электрофореза на бумаге, затем обрабатывали бумагу парами надмуравьиной кислоты, разрывающей мостики [уравнение (2-20)], и после электрофореза в перпендикулярном направлении опрыскивали бумагу нингидрином. Пятна, расположенные вне диагонали, соответствовали фрагментам, которые участвовали в образовании 8—8-мостиков. По положению пятен подбирали [c.180]

Для тонкослойного хроматографирования аминокислот рекомендуется пользоваться пластинками с силикагелем и гипсом, которые после нанесения слоя достаточно просушить на воздухе. Проявление ведут в системе к-бутанол — уксусная кислота — вода, взятая Б соотношении 60 20 20. Окрашивают хроматограмму раствором нингидрина и азотнокислой меди. Указывают, что такой способ в 10 раз чувствительнее, чем хроматография на бумаге. [c.297]

Гидролитический и восстановительно-гидролитический процессы имеют наибольшее значение для деструкции антрахиноновых производных, содержащих гидроксильные и замещенные аминогруппы в положениях 1,4, 1,5, 1,4,5 и 1,4,5,8, простые или иногда более сложные алкоксильные группы в положении 2 и сульфогруппы в случае кислотных красителей. Отщепление ацильных и алкильных групп, присоединенных к азоту или кислороду, с последующей заменой аминогрупп на гидроксильные группы происходит в результате гидролиза [19] в соляной кислоте при 180 °С, восстановительного гидролиза при действии хлорида олова и соляной кислоты при высоких температурах [50], нагревания в адсорбированном виде на силикагеле или окиси алюминия [2], а также в результате пирогидролиза [51]. Образующиеся простые амино-, аминогидрокси- и гидроксиантрахиноны легко могут быть идентифицированы с помощью бумажной и тонкослойной хроматографии. Для хроматографирования на бумаге гидроксиантрахинонов (хинизарин, пурпурин) лучше всего использовать 1-бром-нафталин/80% уксусную кислоту для аминоантрахинонов подходит система 1-бро мнафталин/пиридин — вода (1 1) [52]. Отщепляющиеся ароматические амины обнаруживают описанным выше методом, алифатические амины идентифицируют с помощью бумажной хроматографии, используя бутанол — концентрированную соляную кислоту (4 1) и нингидрин [53]. [c.306]

Почти все 2-тио-З-фенилгидантоины можно разделить, используя двумерную тонкослойную хроматографию на силикагеле. Используют две системы растворителей хлороформ — этанол (98 2, по объему) и хлороформ — этанол — метанол (88,2 1,8 10, по объему). Если силикагель содержит флуорофор, можно наблюдать зоны в УФ-свете (254 нм). Альтернативно, пластинки можно опрыскать раствором нингидрина или раствором иод-азида. Тонкослойная хроматография — дешевый метод, однако ему присущи два недостатка малая чувствительность и невозможность количественной оценки. Эти недостатки устраняются использованием для ступенчатой деградации фенил [ 5] изотиоцианата. В этом случае обнаружение проводят либо авторадиографически, либо одним из выше- [c.270]

Еще большей чувствительностью обладает метод, основанный на тонкослойной хроматографии . Разделение ведут на безводной окиси алюминия ПХ-67. В качестве растворителя используют смесь к-бутанол—уксусная кислота—вода. Проявление ведется нингидрино-вым реактивом, содержащим сульфат меди. Проявленное пятно извлекают метанолом и колориметрируют. Чувствительность 0,02 мг/л, точность определения 2,8—8,2%. [c.254]

Вещества для проявления хроматограмм. Если осадки или пятна на хроматограмме, полученной методами бумажной или тонкослойной хроматографии, бесцветны, то для их проявления пользуются специальными реактивами, образующими с адсорбированными веществами окрашенные соединения. Число таких реактивов, применяемых в тонкослойной и бумажной хроматографии, более 300. Это, как правило, специфические реактивы на катионы, анионы и функциональные группы органических соединений, обычно применяемые в аналитической практике (см. 7 настоящей главы). Для удобства обработки хроматограмм некоторые реактивы выпускаются в аэрозольной упаковке (анилинфталат, нингидрин, бромкрезоловый зеленый и др.). [c.68]

Тонкослойная хроматография на силикагеле G была применена для разделения фосфолипидов и сфинголипидов из мозга крыс, обезьян, человека. Обнаружение проводят раствором нингидрина с нагреванием при 110° в течение 15 минут и обработкой парами йода. Цереброзиды, фосфатидилэтаноламин, фосфатидилхолин, сфингомиелин, лизофосфатидилхолин хорошо разделяются при использовании в качестве растворителя смеси хлороформ — метанол — вода (65 25 4). Наилучшее разделение кефалинов достигалось добавлением ацетата натрия или бората натрия к силикагелю с растворителем хлороформ — метанол — гидроокись аммония (65 25 4 или 75 25 4). Холестерин, триглицериды и альдегиды жирных кислот во всех системах движутся с фронтом. [c.93]

Содержащиеся в речной и в морской водах аминокислоты могут быть как естественной примесью, так и следствием биологического загрязнения воды. Их можно концентрировать и выделять из воды путем адсорбции на сильнокислотной катионообменной смоле при низких значениях pH среды. Затем, если необходимо, их можно разделить методами ионообменной хроматографии на колонке с катионитом, тонкослойной хроматографии или хроматографии на бумаге, используя общепринятые методики. Согласно типичной методике [62], образцы воды объемом 1 л пропускают через небольшую колонку, заполненную Н+-формой сильнокислотной катионообменной смолы. Аминокислоты затем вымывают небольшим объемом концентрированного водного раствора аммиака. Элюат выпаривают досуха и фотометрически с использованием реагента нингидрин — хлорид кадмия рпределяют суммарное со- [c.514]

Все гидрогалогениды 2-галогенэтиламинов перед кинетическими исследованиями перекристаллизовывали из безводного этанола до получения стабильных температур плавления.Чистоту указанных соединений контролировали микротитрованием ионного галогена по методу Фольгарда и тонкослойной хроматографией на целлюлозе и силуфоле (система для хроматографирования бутиловый спирт-уксусная кислота-вода, 4 1 5 вдетной реактив нингидрин). Свойства гидрогалогенидов 2-галогенэтиламинов представлены в таОл.5. [c.342]

А. осаждают из безбелкового фильтрата в виде комплекса с HgS04. Обработкой последнего H S выделяют А. Для его определения используют тонкослойную или бумажную хроматографию (проявитель-нингидрин). Может бьггь количественно определен совместно с карнозином фотоме-трированием при 640 нм продуктов их взаимод. с о-фта-левым альдегидом. [c.164]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология