Выделение меченой ДНК

В атмосфере сухого азота разлагают 0,100 г карбоната-С бария, прибавляя к нему 5—8 мл 5 н. хлорной кислоты. Через всю систему в течение 15 мпн. пропускают ток азота. При этом двуокись углерода-С осушается, проходя через ловушку с сухим льдом, охлаждаемую до температуры от —50 до —55° (примечание 3), и замерзает в ловушке, охлаждаемой жидким азотом. Для полного выделения меченой двуокиси углерода через 15 мпн. осторожно нагревают смесь кислоты с карбонатом-С бария. [c.103]

XII. Выделение меченых пептидов из частичных гидролизатов белков [c.240]

Рис. 6.11. Общая схема выделения меченых пептидов из аффинно-меченого белка [62].

Поступление, распределение и выведение из организма, О. накапливается в жире, где длительно задерживается. 10,2 % населения южных штатов США содержит О. в среднем 0,286 млн . При введении О. мышам в печени накапливалось 21—29 % радиоактивной метки. После в/ж введения масляного раствора О. выделение меченного С продукта с мочой составило 0,26 %, а с калом 18 % введенной дозы, при этом в первые 48 ч выводилось 85 %. [c.569]

Препаративная хроматография совершенно незаменима при выделении меченых соединений. Так, на [c.198]

Рачинский В. В. 1955. Метод определения поглощения и выделения меченой двуокиси углерода растениями. Физиология растений, 2, 2, 182—186. [c.87]

Выделение меченых соединений после анализа [c.224]

Если выделенный меченый элемент (субцепь) может находиться в произвольном месте цепи, то следует рассматривать величину u(r) (0) = (1/ЛО uj(0)uj(t)) = (u, которая, в силу орто- [c.60]

Однако необходимо помнить, что обоснование механизма этой реакции зависит от выделения меченых продуктов, поскольку окисление идет слишком быстро для кинетического исследования, и система сразу же становится гетерогенной, в которой любой ион марганца (V) быстро исчезает. [c.148]

ГО энантиомера высокой энантиомерной чистоты небольшим количеством немеченого рацемата. Если меченый энантиомер имел оптическую чистоту 99,5, то разбавление г этого вещества г немеченого рацемата с последующим выделением меченого энантиомера приведет к разбавлению метки до величины 99,5/105 от ее первоначальной величины (рис. 7). Любой энантиомер в исходном образце теперь будет содержать 0,5/5,5 его первоначальной метки. Если повторять этот процесс, то можно получить отношение меченого нужного энантиомера к меченому имеющемуся энантиомеру, равное 106-10 [c.74]

Обычно в качестве исходных продуктов при этерификации рекомендуется брать спирт и карбоновую кислоту [6, 7]. Однако этот метод не всегда может оказаться наилучшим. Как указывалось выше, при получении карбоновых кислот нами использовалась методика выделения меченых кислот из реакционной среды в виде натриевой соли, что упрощало работу и позволяло более полно использовать изотоп. [c.343]

На рис. 3 приведены результаты исследования способности различных присадок препятствовать выделению меченой сажи на поверхности электрода под действием электрического поля напряженностью 2500 е/см. За 100% принято количество сажи, выделявшейся на электроде [c.263]

При желании на этой стадии очистки к меченому л-изо-меру можно добавить меченый л-изомер, полученный при выделении меченого о-изомера. [c.29]

Глюкозилфермент слишком лабилен, чтобы выдержать даже мягкое расщепление пептидной цепи и выделение меченного гликозилом фрагмента. Однако косвенные данные убедительно свидетельствуют о том, что —В является карбоксилатной группой (—СОО ) [9]. [c.97]

Карбоксилированне реактива Гриньяра проводят при температуре —20°, постоянно перемешивая содержимое колбы (примечание 9). Для получения двуокиси углерода-С к карбонату-С бария из капельной воронки медленно прибавляют концентрированную серную кислоту, следя за тем, чтобы давление в приборе не превышало 50 см рт. ст. Для полного выделения меченой двуокиси углерода в конце реакции осторожно нагревают колбу с карбонатом-С бария до окончательного его растворе- [c.74]

Большое различие в температурах кипения амилового спирта и цетилового спирта (131 и 340° соответственно) обеспечивает легкое выделение меченого спирта с очень высоким выходом и с относительно высокой степенью чистоты. Спирт может быть получен с хорошим выходом в одну стадию восстановлением исходной кислоты алюмогидридом лития. Однако в этом случае [3, 4] за счет растворителей образуются трудноудаляе-мые примеси. [c.231]

Для выделения меченной по углероду двуокиси углерода из бариевых солей Буханан [13] использовал 5 н. молочную кислоту, Спектор [14] —8 н. соляную кислоту и Лесли [15] — 6 н. соляную кис тоту. [c.671]

Из [2- ,e- N]- и [2- ,a- N]лизина в спартеин (105) переходит в три раза больше С, чем N. Это согласуется с происхождением спартеина из кадаверина именно таким должно быть отношение С если учесть, что в (105) включаются три остатка лизина (или кадаверина) и только два атома азота [101,104]. Другими доказательствами роли кадаверина как промежуточного соединения в биосинтезе алкалоидов этого типа служат выделение меченого кадаверина из люпинов после их подкормки меченым лизином [105], а также подавление включения меченого лизина [в термопсин (108)] неактивным кадаверином [106]. [c.566]

Выделение меченых аминокислот достигается следующим образом. Водоросли настаивают в 80% этиловом спирте, затем отделяют центрифугированием и подвергают гидролизу 6н. H I в запаянной ампуле при 105—110° С. Белковый гидролизат упаривают в вакууме и очищают от углеводов, органических кислот и гуминоподобных веществ. Раствор, содержащий смесь аминокислот пропускают через катионит КУ-2 в Н+-форме. Использование в качестве элюента соляной кислоты различной концентрации позволяет разделить смесь на отдельные группы аминокислот (рис. 14). Разделение групп аминокислот на индивидуальные соединения можно осуществить методом препаративной бумажной хроматографии. [c.57]

Если определяемые аминокислоты расположены в активном центре или на поверхности белковой молекулы, успешно используется химическая модификация белков с последуюашм выделением меченых пептидов. Однако выделение пептидов, содержащих модифицированный остаток, достигается не легко главным образом потому, что модифицирующий реагент часто реагирует с другими остаткалш, давая продукты с различными выходами. По этой причине гидролизат белка содержит несколько модифицированных пептидов, каждый из которых присутствует в количествах, меньших эквимолярных по отношению к белку. Традиционные методы выделения пептидов включают трудоемкие и длительные операции, каждая стадия которых обычно значительно снижает конечный выход пептида. Использование аффинной хроматографии на сорбенте, специфичном к модифицирующему реагенту, позволяет в одну стадию выделить модифицированный пептид. Вилчек [62] различает три категории модификаций белков [c.126]

Области применения аффинной хроматографии расширяются, поокольку метод основан на специфических взаимодействиях биологически активных веществ. Как видно из табл. 11.1, этот метод успешно используется при выделении самых разных соединений. Наряду с этим он полезен при изучении различных систем на аффинных сорбентах можно разделять низкомолекулярные энан-тиомеры и удалять нежелательные вещества из живых организмов. -Например, аффинной хроматографией можно разделить на оптические антиподы 0,Ь-триптофан. Используя специфическое выделение меченых пептидов, можно определить пептиды активного центра фермента, связывающего участка антител или участка пептидных цепей на поверхности молекулы. Аффинная хроматография может быть использована для изучения возможности замены природных пептидных цепей ферментов различными модифицированными синтетическими пептидами. Активные центры ферментов или антител, связывающие свойства субъединиц, специфичность ферментов по отношению к различным ингибиторам, комплементарность нуклеиновых кислот, взаимодействие нуклеотидов с пептидами, влияние присутствия различных соединений на образование специфических комплексов и т. д. могут быть исследованы с помощью аффинной хроматографии. [c.282]

Ряд примеров применения иммобилизованных ферментов в аффинной хроматографии приведен в гл. 11. В табл. 11.1 перечислены ферменты, функционирующие как аффииные лиганды при выделении ряда веществ. В разд. 11.3 обсуждается использование иммобилизованной нуклеазы для выделения меченых пептидов из ее ак- [c.436]

При наблюдении процесса выделения меченой СОа из растеии можно рассчитать приближенно его скорость только в относительных единицах, так как изотопный состав выделяемого газа не известен. [c.55]

Рассмотренные выше методы анализа -[-изомера недостаточно точны и значительно уступают новому методу, предусматривающему применение радиоактивного - --изомера гексахлорциклогексана. Последний получается хлорированием бензола меченым хлором-36, выделяется тем или иным приемом, например экстракцией, из технического продукта и добавляется к известному количеству анализируемого образца гексахлорана Точность метода составляет 0,2%, и за 8 часов можно провести 4определения. Метод рекомендуется для анализа гексахлорана, содержащего не более 50 о у-изомера. Сложность метода состоит в получении и выделении меченого - --изомера высокой степени чистоты. [c.158]

Выделение -меченых нуклеиновых кислот. Осевшие ретикулоциты суспендируют в четырех объемах лизирую-шей среды [ 0,01 М трис, 0,015М K I, 0,005W мер-каптоэтанол ( pH 7,4)], содержащей 0,1 мг бентонита на [c.252]

Препаративная хроматография может найти широкое применение при выделении меченых соединений из реакционной смеси. В приведенных опытах выделяли дейтерирован-ные метилэтоксисиланы, полученные по реакции Гриньяра. Анализ реакционной смеси на аналитическом хроматографе показал наличие в ней триметил-, диметилди- и метилтриэто-ксисилана, непрореагировавшего тетраэтоксисилана и большого количества эфира (рис. 3, а). Сравнительно небольшое количество исходной смеси (около 80 мл, из Них не менее 80% эфира), необходимость довольно большого числа теоретических тарелок для удовлетворительного разделения и, наконец, высокая стоимость продукта определили выбор [c.40]

Поскольку приготовление молекул ведется хорошо известными химическими процессами, постольку возможно количественное определение коэфициентов потерь и У ,. Хуже обстоит дело, когда молекула получается биологическим путем, как, например, при получении меченого холестерина из куриного яйца путем впрыскивания в яйцо меченого гликокола. Тут возможны только самые грубые оценки с учетом участвуюш,их объем ов и посторонних веществ. Второй процесс заключается в выделении меченой молекулы в возможно более чистом виде. При этом наблюдаются только потери в весе. Оба типа потерь могут присутствовать в третьем процессе, при котором меченад молекула, введенная в объект, усваивается или перерабатывается при возможном уча- [c.74]

Для полноты выделения меченого препарата к остатку в перегонной колбочке добавляли диметилацетиленил- [c.359]

Выделение меченых соединений методом газовой хроматографии. (Выделение с помощью препаративной ГХ чистого диметилди-этоксисилана и триметилэтоксисилана, меченных D.) [c.163]

Быстрое выделение меченных по углероду оксипроизводных атразина и симазина из организма крыс наблюдается и тогда, когда крысам скармливают сами оксипроизводные. Основное количество оксипроизводных выделяется с калом в почти неизмененном виде. В моче, кроме оксипроизводных, обнаружено несколько других метаболитов. Отсюда следует, что в отличие от исходных гербицидов оксисоединения ресорбируются лишь в незначительной степени [142, 161]. [c.75]

Значительный вклад в исчезновение гербицидных тиокарбаматов, заделанных в почву, вносят микрооргагшзмы [21—23]. Шитс [23] сообщил, что в стерилизованной в автоклаве почве эптам разлагается в три раза медленнее, чем в нестерилизованной следовательно, можно считать, что разложение микроорганизмами — основной путь разложения эптама в почве. Поэтому персистентность эптама в полевых условиях можно значительно увеличить в случаях, когда рост микроорганизмов затруднен. Мак-Рей и Александер [22] исследовали разложение эптама в почве с помощью биологических методов анализа и определяли количество сОг, выделенного меченым эптамом. Согласно полученным ими данным, микроорганизмы метаболизируют эптам, но скорость выделения [c.160]

Керни и Кауфман [116] инкубировали неидентифицированные почвенные микроорганизмы с ТХК-1- С и ТХК-2- С метаболизм обоих соединений сопровождался быстрым выделением меченого углекислого газа. Одновременно с декарбоксилированием происходило выделение хлор-ионов в раствор. Хотя рост на одной ТХК ограничен, метка из ТХК-1- С и ТХК-2- С включалась во все компоненты клетки низкомолекулярные метаболиты, липиды, нуклеиновые кислоты и молекулы белков. Одним из самых ранних продуктов метаболизма ТХК оказалась аминокислота серин. [c.230]

Меченые атомы в органические соединения можно вводить либо химическими, либо биологическими методами. Например, меченую никотиновую кислоту можно получать как путем химических реакций 15], так и при помощи биологических процессов. В последнем случае табак выращивают в атмосфере Ю2 и из растения экстрагируют никотин, который затем окисляют до никотиновой кислоты. Следующие факторы ограничивают эффективность биологического метода 1) неизбежные потери радиоактивного изотопа вследствие реакций элиминирования, происходящих в процессах обмена веществ 2) возможный биосинтез побочных соединений 3) нежелательное разбавление меченого соединения немеченым, которое присутствует в организме 4) биосинтез соединения, меченного изотопом с коротким периодом полураспада, не всегда возможен ввиду фактора времени 5) выделение меченого соединения из сложной биологической системы обычно затруднительно 6) некоторые соединения синтезируются живыми организмами очень медленно или только лишь на определенных стадиях своего развития. Очевидно также, что слишком большая радиоактивность может привести к гибели организма. Вообще к биологическому синтезу следует прибегать лишь в тех случаях, когда меченое соединение невозможно получить иным методом. Несмотря на эти недостатки, биосинтез-привлекает большое внимание. Отделение изотопов Ок-Риджской национальной лаборатории в 1950 г. опубликовало отчет о биологическом методе введения меченых атомов в органические соединения. В отчете имеются данные о большом числе органических соединений, которые были уже получены или могут быть получены в будущем путем биосинтеза. [c.312]

Хотя в предыдуи1,их главах уже дано подробное описание методов работы с микроко,личествами веществ, по некоторые операции, особенно связанные с выделением меченых соединений, еще раз кратко рассмотрены в настоящем разделе. В гл. П и И1 подчеркивалось, что при работе с микроколичествами веществ следует избегать операций, связанных с перенесением продуктов, и следить, чтобы )азмер1>1 аппаратуры были возможно меньшими. При синтезе меченых соединений эти факторы приобретают еще большее значение. [c.319]

Местоположение подвергшихся гидролизу связей определяют, вводя метку в одну из цепей ДНК, причем только в один ее конец. Как показано на рис. 11.4, фрагменты ДНК, полученные после нуклеазной обработки, разделяют по размеру при помощи электрофореза в геле. (Принцип, лежащий в основе частичного расщепления каждого гидролизуемого участка с последующим выделением меченных по концу фрагментов, тот же самый, который был использован при определении последовательности ДНК см. рис. 3.4.) Каждой гидролизованной связи на геле соответствует полоса, подвижность которой определяется расстоянием от меченого конца до места разрыва. В участке, защищенном от гидролиза РНК-полимеразой, разрывов не происходит и соответствующие полосы на геле отсутствуют. Каждая из двух цепей ДНК, меченных радиоактивным изотопом, может быть проанализирована по отдельности. Сравнивая полученные отпечатки с результатами определения последовательности ДНК, устанавливают нуклеотидную последовательность участка связывания и его местоположение. [c.141]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология