Агар с антибиотиками

Из биологических методов количественного определения антибиотиков наибольшее распространение получил метод диф- фузии в агар с турбидиметрическим определением, основанным на измерении концентрации клеток тест-микроба, образующих определенную оптическую плотность среды (мутность) в. результате их роста в присутствии небольшого количества антибиотиков. [c.414]

При биологическом испытании антибиотиков методом диффузии в агар на лотках наиболее употребительна схема латинского квадрата, позволяющая рандомизировать неоднородность бактериальной культуры по обоим направлениям поверхности [c.233]

П.5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ АНТИБИОТИКОВ МЕТОДОМ ДИФФУЗИИ В АГАР НА ЧАШКАХ ПЕТРИ [c.236]

Определение антимикробной активности антибиотиков основано на их способности угнетать рост микроорганизмов. Определение проводят методом диффузии в агар на плотной питательной среде путем сравнения размеров зон угнетения роста тест-микробов, образующихся при испытании растворов определенных концентраций Государственного стандартного образца и испытуемого препарата. [c.210]

Определение антимикробной активности антибиотиков методом диффузии в агар [c.347]

При использовании метода штриха на питательный агар в чашки Петри по диаметру высевают культуру продуцента антибиотика. К выросшему организму вплотную подсевают перпендикулярно штрихи тест-культуры. Нечувствительные к антибиотику тест-куль-туры развиваются от края штриха продуцента. Чем чув- [c.85]

Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам и другим ХТП необходимо определять в каждом случае инфекции и периодически — в ходе лечения. Главным показателем чувствительности является минимальная ингибирующая концентрация — МИК (мкг/мл), т.е. минимальная концентрация антибиотика, задерживающая рост микроба-возбудителя в стандартном опыте. Значение величины МИК определяют методом серийных разведений или методом диффузии в агар (дисками или Е-тестами). [c.42]

Чувствительность к полимиксину определяют путем посева выделенной культуры на чашки Петри с питательным агаром, содержащим 50 ЕД полимиксина М или 5 в 1 мл питательной среды. Вибрионы Эль-Тор не чувствительны к антибиотику и хорошо растут на чашках, в отличие от классических холерных вибрионов. [c.170]

Солодово-дрожжевой агар с глюкозой (г/л) пептона — 5, дрожжевого экстракта — 3, экстракта солода — 3, глюкозы — 10, агар-агара — 20. Стерилизуют при 120 °С 15 мин, pH после стерилизации 6,2. Для придания селективных свойств после стерилизации среды доводят pH до 4 или добавляют антибиотики. [c.317]

Количественно активность антибиотика выражается в единицах действия в 1 мг (должно быть не менее 860 ЕД), определяемая методом диффузии в агар, засеянный спорами тесткультуры Л . 1 ЕД соответствует 1 жг чистого тетрациклина-гидрохлорида. Применяют для тех же целей, что и тетрациклин. Более эффективен применяемый для внутривенного введения в дозах 150 000 ЕД 2 раза в сутки морфоциклин — М-морфолин-метилтетрациклин, получаемый взаимодействием тетрациклина, формальдегида и морфол ина по реакции Манниха. [c.700]

Отбор бактерий-трансформантов можно продемонстрировать, используя плазмиду pBR322 (см. рис. 5.10), содержащую два гена устойчивости к тетрациклину и ампициллину. Для отбора этих бактерий в агар добавляют антибиотик — или ампициллин, или тетрациклин в зависимости от того, какой из генов (Ыа или tet) остался интактным после введения чужеродной ДНК. На такой среде клоны образуют клетки только с плазмидами. Для отделения рекомбинантных бактерий часть материала каждого клона переносят на другую чашку Петри, содержащую антибиотик, ген устойчивости к которому был разрушен при создании рекомбинантов. На этих чашках Петри дают клоны только те бактерии, которые содержат исходную плазмиду, а рекомбинантные бактерии их не образуют. Такая тщательная селекция клонов по устойчивости к антибиотику позволяет идентифицировать рекомбинантные клоны. При поиске рекомбинантных клонов успешно применяют метод авторадиографии. [c.121]

Очень элегантный метод был разработан для обнаружения веществ, которые тормозят или, наоборот, стимулируют рост микроорганизмов. Хроматограмму с невидимыми пятнами прикладывают к агаровой плите, содержащей среды с привитыми микроорганизмами, и оставляют на некоторое время. В местах, где на хроматограмме присутствуют вещества, стимулирующие рост, возникают непросвечивающие пятна, образованные колонией растуищх микробов в тех местах, где находятся вещества, тор-мозяище рост (антибиотики и т. д.), наоборот, возникает пятно чистого агара на затемненном фоне. [c.464]

Описанная в предыдущем параграфе методика определения активности антибиотиков по схеме латинского квадрата предполагает использование лотков. Возможен и другой способ определения этой активности — по диффузии в агар на чашках Петри. Ниже описан трехдозный вариант этого метода. [c.236]

Определение антимикробной активности антибиотиков с использованием трехдозного варианта метода диффузии в агар. Для проведения испытания готовят три раствора стандартного образца (Сь Сг, Сз) и три раствора испытуемого образца (Иь Иг, Из). Концентрации растворов, содержащих малую, среднюю и большую дозы, должны находиться между собой в кратном соотнощении (1 2 4). При необходимости это соотношение может быть изменено. Концентрация раствора Ся должна быть близка контрольной концентрации раствора стандартного образца, указанной в табл. 17. [c.213]

Диско-диффузионный метод. При определении чувствительности методом диффузии в агар чистую культуру возбудителя засевают газоном на питательный агар в чашке, например, тампоном, смоченном в стандартизованной (10 КОЕ/мл) суспензии микроорганизма. Затем на поверхность агара укладывают стандартные бумажные диски, пропитанные антибиотиками, которые диффундируют в агар, создавая градиент концентрации. На чашку диаметром 90 мм равномерно укладывают не более шести дисков с определенным количеством антибиотика. После инкубирования в термостате измеряют диаметры зон задержки роста вокруг дисков и по специальным таблицам определяют степень чувствительности к тому или иному антибиотику (см. цв. вклейку, рис. 13). Поскольку опыт диффузии ставят в стандартных условиях (состав V) количество среды, количество засеваемых микробов, температура и сроки инкубирования, стандартные диски и др.), каждому значению диаметра зоны вокруг диска с ан1Ибиотиком соответствует определенное значение МИК. Исходя из этих значений, для каждого антибиотика рассчитаны величины терапевтического индекса, что позволяет по диаметру зоны определить степень чувствительности к тому или иному антибиотику чувствительные (S), умеренно устойчивые (/) и устойчивые (/ ). К категории S (от англ. sensitive, чувствительный) относят те, для которых использование средних терапевтических доз будет достаточным для трехкратного превышения МИК. В категорию / (от англ. intermediate, промежугочный) относят те микробы, для подавления которых потребуются максимальные терапевтические дозы. Категорию R [c.44]

Бактериологическое исследование. Гной, отделяемое слизистой оболочки, мочу, мокроту, спинномозговую жидкость сеют в чашку Петри с 5%-м кровяным агаром (лучше использовать дефибрини-рованную баранью кровь) и в пробирку с сахарным бульоном. Для выделения стрептококков из контаминированного материала используют селективные среды (в кровяной агар и среду накопления вводят антибиотики — колистин, налидиксовую кислоту, которые подавляют рост сопутствующих микроорганизмов). Хотя стрептококки дают рост на воздухе, посевы лучше инкубировать в анаэробной атмосфере при 37 °С. Инкубация в атмосфере СО2 стимулирует рост бета-гемолитических стрептококков, не относящихся к группе А. С этими целями применяют анаэростат или эксикатор с горящей свечой. [c.110]

Бактериологическое исследование. Для выделения энтерококков применяют посевы на 5%-й кровяной агар, а для материалов, контаминированных сопутствующей микрофлорой, — на селективные среды, содержащие азид натрия или антибиотики (колистин, налидиксовую кислоту, цефалексин, азтреонам). Для обогащения материала применяют посев на сахарный бульон (МПБ + + 0,2 % глюкозы). Посевы инкубируют на воздухе при 37 °С 24 — 48 ч. На кровяных средах энтерококки образуют мелкие или средних размеров округлые колонии серо-белого цвета с ровным краем, иногда с зоной р-гемолиза Е. fae alis) или а-гемолиза. На жидкой среде дают диффузное помутнение. [c.115]

Бактериологическое исследование. Менингококк растет на специальных питательных средах с нативным белком (бульон или агар с сывороткой, асцитической жидкостью или кровью). Для исследования материала, обильно контаминированного нормофлорой (мазки из носоглотки), применяют посев на плотные селективные среды с антибиотиками (ристомицином, ванкомицином, ко-листином и нистатином). Спинномозговую жидкость лучше сеять после центрифугирования (3000 об/мин в течение 5 мин). Засевают 2— 3 капли полученного осадка на поверхность подогретой пи- [c.117]

Выделить культуры возбудителя от больного путем непосредственного посева материала на среды почти никогда не удается. Более надежным является биологический метод. Материал (по возможности взятый до начала антибиотикотерапии) вводят 3 — 5 мышам или 2 морским свинкам подкожно, накожно, внутрибрюшинно и/или через рот. Зараженных животных содержат в особых условиях (как при диагностике чумы). Если экспериментальные животные на протяжении 7—15 дней не погибают, их забивают и трупы вскрывают. При наличии туляремии обнаруживают патологоанатомические изменения продуктивный процесс с некрозом, увеличенные лимфоузлы, селезенка, печень, геморрагический компонент не выражен. Кровь, костный мозг, участки внутренних органов и лимфатических узлов трупа животного сеют, втирая в поверхность одной из сред желточной, МакКоя, глюко-зоцистинового агара с кровью и антибиотиками. [c.125]

Бактериологическое исследование. Взятый материал засевают на МПА, кровяной агар, МПБ с 3 — 5 % глицерина. Для подавления роста сопутствующей микрофлоры используют селективные среды, содержащие красители — кристаллический фиолетовый (1 200 000), бриллиантовый зеленый (1 1 000 000) и др., а также антибиотики (гентамицин, колистин и др.). Для выделения возбудителя мелиоидоза можно использовать среду МакКонки с добавлением колистина или без него. [c.132]

Бактериологическое исследование. Биопсийный и другой материал засевают на специальные среды (например, угольно-дрожжевой агар с -цистеином и пирофосфатом железа, селективные среды с антибиотиками, шоколадный агар и др.). Питательной основой этих сред, как правило, является дрожжевой экстракт и а-кетоглютарат. Активированный уголь необходим для связывания токсических продуктов, образующихся в процессе роста культур, и оптимизации показателя поверхностного натяжения. Для придания селективных свойств в состав сред для легионелл обычно вводят 3 антибиотика (полимиксин В, анизомицин и ванко-мицин или цефомандол), которые задерживают рост грамположительных бактерий, грибов и грамотрицательных бактерий соответственно. Посев желательно делать одновременно на селективную и неселективную среду, так как встречаются чувствительные к антибиотикам штаммы возбудителя. [c.137]

Тест кальцийзависимости. Тест ставят на кальций-дефицитном агаре (в качестве основы для него лучше использовать среду АГВ для диффузионного метода определения чувствительности к антибиотикам). Для связывания ионов кальция на 100 мл расплавленной среды АГВ добавляют 8 мл 0,25М раствора оксалата натрия и после перемешивания вносят 4 мл 0,5М раствора хлорида магния для восполнения двухвалентного иона). Ночную бульонную культуру испытуемого штамма в дозе 100—300 клеток засевают шпателем на 2 чашки с кальций-дефицитным агаром и инкубируют 24 — 48 ч одну чашку при 37 °С, другую — при 26 — 28 °С. Если культура вирулентна (обладает плазмидой вирулентности pYV), то в условиях дефицита кальция у клеток, инкубированных при 37 °С (но не 26 —28°С) наступает бактериостаз (прекращение роста и делений). При этом колонии на чашке либо имеют карликовые размеры ( Y. entero oliti a), либо отсутствуют совсем (чаще у Y. pseudotuber ulosis). При 26 — 28 °С так же, как у непатогенных иерсиний при двух температурных режимах, наблюдается рост 100 — 300 колоний обычных размеров. [c.159]

Изучают и отбирают подозрительные колонии (см. ниже) на всех плотных средах. Чашки с посевами просматривают в косопроходящем свете под стереомикроскопом. На щелочном агаре холерный вибрион растет с образованием круглых, гладких, плоских, голубоватых, просвечивающихся в проходящем свете, гомогенных, с ровными краями колоний диаметром 1 — 2 мм. Консистенция колоний маслянистая, они легко снимаются петлей и эмульгируются. При исследовании материала от выздоравливающих, бактерионосителей, а также лиц, леченных антибиотиками, могут встречаться атипичные колонии. Колонии сопутствующей микрофлоры обьгчно имеют другую морфологию и дают ро- [c.167]

Бактериологическое исследование. Выделение чистой культуры и ее идентификация необходимы для подтверждения диагноза листериоза. Листерии растут на простых питательных средах, но более интенсивный рост отмечается на кровяном агаре или средах, обогащенных глюкозой, глицерином, дрожжевым экстрактом, сывороткой, печеночной тканью. Материал засевают на плотные среды. Для подавления роста сопутствующих микроорганизмов используют специально разработанные селективные среды с антибиотиками и/или красителями, хлоридом лития, фенилэтано-лом (агары Оксфордский, PAL САМ яла др.). Те же добавки используют в составе бульонных сред для обогащения исследуемого материала (накопление листерий ведут при 30 °С в течение 24 — 48 ч). Иногда используется также метод холодового обогащения (материал выдерживают при 4 °С в течение 10 — 50 сут). Посевы на плотных средах инкубируют при 37 С до 7 сут. [c.179]

Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают на фруктозный агар с лошадиной кровью и антибиотиками (циклосерином и цефокситином). Циклосерин (500 мкг/мл) подавляет рост эшерихий и других грамотрицательных бактерий, цефокситин является антибиотиком широкого спектра действия. Засеянные чашки инкубируют при 37 °С в анаэробных условиях в течение 24 ч. Выросшие колонии клостридий и среда вокруг них окрашиваются индикатором нейтральным красным в желтый цвет. Посев издает запах крезола или конского навоза. Колонии могут иметь правильную или неправильную форму, плоские с фестончатым краем и матовой поверхностью. При облучении их длинноволновым ультрафиолетом колонии дают золотисто-желтую флюоресценцию. [c.195]

Бактериологическое исследование. Для выделения чистых культур материал засевают на селективные плотные среды с кровью и антибиотиками (как и при диагностике кампилобактериоза). Для инактивации образуюш ихся в процессе роста ингибиторов в среды иногда добавляют активированный уголь, крахмал, сыворотки. Обычно посев ведут одновременно на селективную и неселективную среду, чтобы не пропустить антибиотикочувствительные штаммы. Наиболее подходящими неселективными средами являются агары для бруцелл с 5 — 7 % лошадиной крови. Для придания селективности в состав сред обычно вводят три антибиотика ванкомицин, амфотерицин В (по 10 мкг/мл) и цефсулодин или триметоприм (5 мкг/мл). Посевы инкубируют до 7 сут при 37 °С в атмосфере, содержащей 5 % кислорода и 10 % углекислого газа. Для этого используют анаэробные контейнеры с газогенераторными пакетами (метод зажженной свечи не рекомендуется, так как концентрация кислорода при этом остается выше 15 %). [c.223]

Среда Джонсона— Трассела пептона — 32 г, агар-агара — 1,6 г, цистеина солянокислого — 2,4 г, мальтозы — 16 г, печеночного экстракта — 320 мл, раствора Рингера — 960 мл, 1 М раствор NaOH — 13 мл. Смесь нагревают до расплавления агара, фильтруют, добавляют 0,7 мл 0,5 %-го раствора метиленового синего и доводят pH среды до 5,8 —6,0. Среду разливают в пробирки по 9 мл и стерилизуют. Перед посевом в каждую пробирку добавляют по 1 мл сыворотки человека или лошади и антибиотики (пенициллин и стрептомицин) для подавления роста сопутствующей микрофлоры. [c.366]

Скрининг с использованием чашек с агаром вместо колб на качалках позволяет обследовать гораздо больше мутантов. Образование антибиотиков или метаболитов нередко оценивается методом биопроб, когда в агар вводят индикаторные Ьрганиз-мы. Разработаны устройства для автоматического скрининга чашек. В них используются механические приспособления для инокуляции и производится периодическое фотографирование и последующий компьютерный анализ изображений. [c.297]

Уже в прошлом веке было известно, что между различными микроорганизмами могут существовать как симбиотические, так и антагонистические взаимоотношения. Толчком к выяснению материальной основы антибиоза послужило наблюдение Флеминга, обнаружившего (1928), что колония гриба Peni illium notatum подавляла рост стафилококков. Выделяемое этим грибом вещество, которое диффундировало в агар, получило название пенициллина. С тех пор было выделено множество веществ с антибиотической активностью. Антибиотики-это вещества биологического происхождения, способные даже в низких концентрациях подавлять рост микроорганизмов. Различают вещества, подавляющие рост микробов (бактериостатические, фунгистатические) и убивающие их (бактерицидные, фунгицидные и т.д.). [c.337]

Методы выявления антибиотиков. Первые антибиотики были обнаружены случайно, по образованию зон подавления роста. В чашках с питательным агаром, густо засеянным тест-организмом (индикаторными бактериями), вокруг колоний гриба или стрептомицета рост отсутствовал антибиотик, диффундирующий из колонии в агар, вызывал образование прозрачных участков в сплошном бактериальном газоне (рис. 10.4). Видами-индикаторами (тест-объектами) в таких опытах служат типичные представители различных групп микроорганизмов. Для качественного испытания продуцента антибиотика достаточно посеять его в середину чашки с питательным агаром, а индикаторные бактерии-в виде радиальных штрихов [штрих-тест, рис. 10.5). После инкубации по степени торможения роста различных индикаторных организмов судят о спектре действия антибиотика. Антибиотики различаются по действию на грам-положительные и грам-отрицательные бактерии, на дрожжи, дерматофиты и другие микроорганизмы. [c.338]

Рис. 10.4. Выделение антибиотиков бактериями или грибами можно обнаружить по образованию зон подавления роста индикаторных бактерий [Staphylo o us aureus), равномерно рассеянных на агаре.

Количественное определение. Для количественной оценки действия нтибиотика пользуются методом диффузии в агар (рис. 10.7), методом последовательных разведений и некоторыми другими методами. Для проведения теста с диффузией чашки заполняют до определенной высоты агаризованной средой, содержащей суспензию тест-организма. Затем в чашки вносят испытуемые растворы антибиотика. Их помещают в лунки, либо в стеклянный или металлический цилиндр, или же накладывают на агар пропитанные антибиотиком диски из фильтровальной бумаги. При положительной реакции во всех случаях после инкубации становится заметной зона подавления роста тест-организма. Диаметр этой зоны при соблюдении постоянных условий опыта (состав питательной среды, толщина слоя агара, плотность посева, время инкубации, температура и т.д.) пропорционален логарифму концентрации антибиотика (рис. 10.7). [c.339]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология