Аминокислоты буферов

В сосуд для хроматографии наливают цитратный буфер с pH 5,28 на высоту 1 см и помещают пластинку с нанесенными образцами. Стартовая позиция смеси аминокислот должна быть выше уровня налитого буферного раствора. Для разделения аминокислот буфер должен подняться по пластинке ровным фронтом на высоту 15 см. Для этого требуется около 2 ч. Процесс разделения можно значительно ускорить, предварительно пропитав пластинки разбавленным (в 10 раз) буфером и высушив их. [c.56]

Аминокислоты открывают цветной реакцией с нингидрином. Две капли 0,1%-ного раствора нингидрина в нитратном буфере наносят на фильтровальную бумагу. Высушивают в шкафу при 100— 105" С. На сухое пятно наносят две капли исследуемого раствора. Бумагу вновь сушат при той же температуре 5—10 мин. В присутствии аминокислот или аминов возникает синее, фиолетовое или красное пятно либо кольцо. Реакцию дают все а-аминокислоты (кроме пролина и оксипролина). [c.126]

Катионит КБ-4 применяют для умягчения высокоминерализованной воды, для очистки рассолов (в Ыа-форме), для извлечения поливалентных катионов из растворов, содержащих значительные количества моновалентных катионов, для хроматографического разделения аминокислот, выделения цветных металлов, в виде буфера для регулирования pH при очистке воды и других реакциях катионного обмена. Для извлечения стрептомицина из растворов и очистки других антибиотиков, имеющих большие органические ионы, применяют катионит с 2,5%-ным содержанием дивинилбензола (катионит КБ-4П-2), характеризующийся более высокой величиной обменной емкости. [c.293]

Соляная кислота, которой титруют буферы, должна быть трижды перегнанной и храниться в запаянных ампулах. Посуду следует выдерживать в течение ночи при температуре 400°. Растворы элюентов необходимо готовить не более чем за сутки до использования, фильтровать через фильтры с порами не крупнее 0,45 мкм и хранить в герметически закрытых пластмассовых сосудах, желательно под азотом. Во избежание попадания в растворы аминокислот и аммиака за счет воздушной флоры и загрязнений время контакта их с воздухом (в процессе приготовления) должно быть сведено до минимума. Нельзя готовить и хранить растворы вблизи мест хранения солей [c.524]

При анализе смеси, состоящей из небольшого числа хорошо разделяемых аминокислот, пластинку можно не уравновешивать буфером. [c.134]

В отличие от нейтральных и кислых аминокислот значение pH, основных аминокислот вычисляют как среднее арифметическое значений p/fj и рК , например для лизина pH, = 9,82 = (9,12 + 10,53) 2. Большое биологическое значение имеет поведение гистидина в качестве буфера. Это единственная протеиногенная аминокислота, которая действует в физиологической области pH 6 — 8. [c.32]

Основанием, или акцептором протонов, обычно является анион аминокислоты (практически для приготовления буфера используют соль данной аминокислоты), а кислотой (донором протонов) является собственно аминокислота. Уравнение для расчета pH буфера можно записать в такой форме [c.13]

Значение рК в данном случае равно величине р1, т.е. изоэлектрической точке - такому значению pH, при котором суммарный заряд аминокислоты равен нулю эту величину находят как среднее арифметическое значений рАГ функциональных групп данной аминокислоты. Например, величина р1 для гистидина равна (1,82 + 9,17 + 6,0)/1 = 5,66 подставляя в приведенное выше уравнение концентрации основной и кислотной формы гистидина, мы можем рассчитать pH буфера, образуемого этой аминокислотой. [c.13]

В то время как амины и аминокислоты, несущие положительный заряд, более прочно удерживаются при более высоких значениях pH, для отрицательно заряженных сорбатов справедливо обратное. Систематические исследования, проведенные на серии N-бензоил-о, L-аминокислот, позволили глубже понять механизм взаимодействия сорбата с белком. Влияние изменения свойств подвижной фазы на величины к VI а демонстрирует рис. 7.10. Во-первых, удерживание в значительной степени возрастает с усилением гидрофобного характера аминокислоты (Ser > А1а> Phe). Во-вторых, увеличение суммарного отрицательного заряда белка с увеличением pH вызывает уменьшение к для всех шести соединений (вследствие ионного взаимодействия). Далее, влияние концентрации буфера можно объяснить усилением адсорбции вследствие ионных взаимодействий при низкой ионной силе. Небольшое, но вполне заметное возрастание к для наиболее сильно удерживаемых сорбатов при высоких концентрациях буфера вероятнее всего является результатом усиления гидрофобных взаимодействий. Поскольку ионные (кулоновские) и гидрофобные взаимодействия по-разному подвержены влиянию ионной силы, то оба эффекта приводят к возникновению минимума в адсорбции сорбата (к ) в определенной точке. И наконец, совершенно очевидно влияние органического растворителя-модификатора он всегда приводит к понижению удерживания сорбата и тем сильнее, чем более гидрофобен сорбат. Влияние pH и ионной силы на удерживание незаряженных соединений невелико, но выражено вполне отчетливо. Оно связано исключительно с изменениями в связывающем центре ХНФ. Добавление пропанола-1 вызывает уменьшение удерживания по сравнению с наблюдаемым у заряженных сорбатов, что свидетельствует о преимущественном вкладе в удерживание гидрофобных взаимодействий. Это подтверждает также наблюдаемое очень большое влияние на удерживание длины цепи алканола-1. Высшие спирты являются значительно более эффективными конкурентами за связывающий центр, а потому вызывают более быстрое элюирование сорбата. Возможность регулирования удерживания путем изменения подвижной фазы, которую демонстрирует схема 7.6, говорит о том, что эту особенность данных хроматографических систем можно использовать в целях оптимизации разделения. [c.135]

Рис. 80. Разделение 16 ФМОК-аминокислот методом МЭКХ. Идентификация пиков - в буквенном коде для аминокислот. Буфер 50 мМ борат, 50мМДДСН, pH 9.5.

В основу работы анализатора положена ионообменная хроматография на полимере полистирольной природы, содержащем сульфогруппы (точнее натриевую соль сульфобензокислоты). Смесь АК наносят в буфере pH 3,3, в результате чего с полимером первыми будут связаны основные АК (арг, ЛИЗ, гис), затем - менее основные и нейтральные аминокислоты и последними будут связываться кислые АК (для чего постепенно сдвигают pH буфера до 6,5-8,0). При элюировании смеси аминокислот буфером, имеющим pH 6,5-8, первыми выходят наименее прочно связанные кислые АК (глу, асп), затем - менее кислые и нейтральные АК и последними элюируются основные аминокислоты. Определение АК в анализаторе основано на нингидри- [c.18]

Добавьте раствор эфира биотин-сукцинимида (фирма Miles Ltd., концентрация 10 мг/мл) в ДМСО к раствору антител (концентрация I--3 мг/мл) в свободном от аминокислот буфере, таком как боратный или Na-бикар-бонатный при pH 8,8. На 1 мг белка вносят 25—250 мкг эфира. Хорошо перемешайте и инкубируйте 4 ч при комнатной температуре. [c.202]

Эти данные были использованы для ступенчатого последовательного гидролиза и анализа пептидов с N-конца, что сравнимо с действием аминонептидазы. Для большинства аминокислот выход реакции гидролиза составляет 30—50%. Для иовышения выхода предложен другой подход с использованием твердофазного носителя. В щелочном буфере при 60°С только N-концевой остаток остается связанным с твердофазным носителем, а остальные ненрореагировавшие вещества могут быть отмыты и использованы вновь [230]. [c.358]

Кроме описанных способов рекомендуется перед анализом аминокислот, аминов и белков подвергать бумагу следующей обработке. Бумагу тщательно отмывают 0,3 н. раствором НС1, затем нейтрализуют кислоту 0,5 н. раствором щелочи, избыток NaOH отмывают дистиллированной водой до отрицательной реакции иа фенолфталеин, обрабатывают 0,1 %-ным фосфатным буфером с pH 7,0—7,5 и высушивают. Если бумага не содержит ионов тяжелых металлов, то ее можно не подвергать предварительной обработке. [c.110]

Опыт 8- На фильтровальную бумагу наносят две капли 0,170-ного раствора нннгидрина в цнтратном буфере и высушивают в шка-фу при 100... 105°С. На сухое пятно наносят две капли исследуемого раствора и вновь сушат при той же температуре 5... 10 мин. Б присутствии аминокислот возникает сииее, фиолетовое или красное пятно либо кольцо. Эту реакцию дают все а-амииокислоты. кроле пролина и гидроксипролииа. [c.97]

Метод основан на образовании окрашенных продуктов ароматических аминокислот с реактивом Фолина в сочетании с биуретовой реакцией на пептидные связи. Метод характеризуется высокой чувствительностью (10—100 мкг белка в пробе). На развитие окраски влияет большое количество веществ компоненты буферных систем (трис-буфер в концентрации 0,2 мМ, глицилглицин), восстановители (цистеин, дити-отреитол в концентрации 0,01—0,4 мМ, аскорбиновая кислота), комп-лексоны (ЭДТА в концентрации 0,5 мМ), детергенты (тритон Х-100 в концентрации 0,1—0,2% вызывает выпадение осадка), сернокислый аммоний в концентрации 0,15%, сахароза в концентрации 10% и др. [c.81]

Сухую бумагу размечают так, что линия старта находится на расстоянии одной трети (20 см) от катода. Гидролизат, растворенный в смеси ацетон — 1 н. НС1 или в 50%-ном растворе пиридина, наносят на сухую бумагу в минимальном объеме (10—20 мкл). С обеих сторон от образца-гидролизата на расстоянии 2—3 см наносят образцы отдельных ДНС-аминокислот- свидетелей , а также 2 стандартные смеси ДНС-аминокислот. Смесь А состоит из ДНС-производных аспарагиновой кислоты, пролина, треонина, валина, фенилаланина, бис-ДНС-лизина, а-ДНС-лизина, в-ДНС-лизина и ДНС-ЫНг. Смесь Б состоит из ДНС-производных цистеиновой кислоты, глицина, глутаминовой кислоты, серина, аланина, лейцина, изолейцина, гистидина, аргинина, а-ДНС-тирозина, о- и б с-ДНС-тирозина. На бумагу необходимо наносить не менее 1—5 нмоль каждой из ДНС-аминокислот. После нанесения образцов бумагу увлажняют буфером (с. 138), помещают в прибор для средневольтного электрофореза с источником пи- [c.150]

Определение. 0,5—1 мкмоль белка растворяют в 10—20 мл воды и осаждают на холоде, добавляя трихлоруксусную кислоту до конечной концентрации 5%- Осадок промывают 5%-ным раствором трихлоруксусной кислоты, а затем 3—4 раза ацетоном для удаления ее следов. Указанные стадии позволяют удалить свободные аминокислоты, которые могут загрязнять препарат белка, и приводят к денатурации белка, повыщающей доступность С-концевых аминокислот к действию карбоксипептидаз. При определении С-концевых аминокислот в пептидах первые стадии необходимо опустить. Промытый осадок белка или пептид растворяют в 0,2 М аммоний-бикарбонатном буфере или в [c.155]

ЕЮ реакцию 5-ацилтиогликолевой или тиосалициловой кислоты или их эфиров с натриевой солью аминокислоты можно закончить нагреванием при 80—85° или кипячением с обратным холодильником Б растворе метилового спирта в течение 1 час. Рас творитель отгоняют в вакууме, остаток растворяют в воде и смесь подкисляют, чтобы Продукт реакции выпал в осадок [336]. Такая методика в случае тиофенилового зфира позволяет получить 90% аналитически чистого карбобензилоксиглкцилаланн-на. Обычно в метаноле получают лучшие выходы, чем в водных растворах. Реакция тиолового эфира с аминокислотой в нейтральном растворе не идет, так как происходит образование кислоты, которая снижает концентрацию незаряженных аминогрупп и прекращает реакцию. Если в качестве буфера применять пиридин, то можно получить хорошие выходы прн кипячении с обратным холодильником в течение 1 час [336]. [c.274]

Многие исследователи отмечали, что желательно контролировать величину pH. При реакции карбобензилоксиглицилтиогли-колевой кислоть) с анилином в буферных растворах диметилформамида выходы повышались с 14,5 до 66% с увеличением pH с 2 до 4, но затем выходы снижались по мере увеличения pH свыше 4. Оптимальное значение pH, как было найдено, может быть различным в зависимости от амина. БеНзиламин реагирует с З-гиппурилтиогликолевой кислотой при pH 8, причем выход амина составляет 43%, а при pH 9 — 73% [344], Реакция п-1штротиофениловых эфиров с аминокислотами в растворе диоксана при 18 в течение 18 час привела к прекрасным выходам, когда буфером служил избыток твердого углекислого магния при кажущемся pH 6,8 [335]. [c.274]

И. X. применяется для разделения катионов металлов, напр, смесей лантаноидов и актиноидов, 2г и НГ, Мо и W, КЬ и Та последние разделяют на анионитах в виде анионных хлоридных комплексов в р-рах соляной и плавиковой к-т. Щелочные металлы разделяют на катионитах в водных и водно-орг. средах, щел.-зем. и редкоземельные металлы-на катионитах в присут. комплексонов. Большое значение имеет автоматич. анализ смесей прир. аминокислот на тонкодисперсном сульфокатионите.в цитратном буфере при повыш. т-ре. Аминокислоты детектируют фотометрически после их р-ции с нингидрином или флюориметрически после дериватизации фталевым альдегидом. Высокоэффективная И. X. (колонки, упакованные сорбентом с размером зерен 5-10 мкм, давление для прокачивания элюента до 10 Па) смесей нуклеотидов, нуклеозидов, пуриновых и пиримидиновых оснований и их метаболитов в биол. жидкостях (плазма крови, моча, лимфа и др.) используется для диагностики заболеваний. Белки и нуклеиновые к-ты разделяют с помощью И. X. на гидрофильных высокопроницаемых ионитах на основе целлюлозы, декстранов, синтетич. полимеров, широкопористых силикагелей гидрофильность матрицы ионита уменьшает неспецифич. взаимод. биополимера с сорбентом. В препаративных масштабах И. х. используют для вьщеления индивидуальных РЗЭ, алкалоидов, антибиотиков, ферментов, для переработки продуктов ядерных превращений. [c.264]

Иногда для устранения нежелательного эффекта адсорбции полезно заменить водную фазу буфером с соответствующим pH. Так как коэффициент распределения ионизирующихся веществ непосредственно зависит от pH, можно очень точно найти оптимальные условия разделения. Так, например, при разработке метода разделения динитрофенильных про1й-водных аминокислот на диатомите [90] был построен график зависимости [c.451]

По сравнению с хроматографией на бумаге разделение веществ при помощи электрофореза происходит гораздо быстрее (время разделения при высоковольтном электрофорезе составляет от 1 до 2 час). Подбором соответствующего pH при помощи буфера можно добиться разделения даже очень близких веществ. На рис. 486 показаны примеры разделения смеси аминокислот и пептидов на приборах со средним и высоким напря кением. [c.541]

Рис. 79. Разделение смеси 11 ФМОК-аминокислот методом КЗЭ. Капилляр 50мкм х 50/75 см, буфер бора г 50 мМ, pH 9.5 УФ-детектирование 200 нм поле 330 В/см.

АК обладают способностью поддерживать определенные буферные свойства клеточного содержимого, поскольку они содержат функциональные группы, ионизирующиеся при различных значениях pH. Чтобы рассчитать значения буферов, образуемых аминокислотами и их солями, надо знать величины функциональных групп аминокислот. [c.13]

Для расчета величины pH буфера, образуемого данной аминокислотой, пользуются уравнением Хендерсона-Хассельбаха [c.13]

В первь х работах по применению систем ЖХ низкого давления с изократическим элюированием фосфатными и боратными буферами на колонках с БСА, связанным с сефарозой, показали, что хиральное разделение заряженных сорбатов, подобных немодифицированным аминокислотам триптофану, кинуренину [3-(2-амино-бензоил)аланин], и их 5- и 3-оксипроизводным соответственно чрезвычайно сильно зависит от pH подвижной фазы [87]. В дальнейшем [c.132]

Смотреть страницы где упоминается термин Аминокислоты буферов: [c.508] [c.276] [c.139] [c.171] [c.200] [c.211] [c.212] [c.227] [c.258] [c.299] [c.413] [c.435] [c.515] [c.516] [c.517] [c.519] [c.523] [c.99] [c.280] [c.291] [c.165] [c.165] [c.157]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология