Гаптены простые

Реакции белков, ферментов и т. д. Кинетические исследования взаимодействий белков с красителями и антител с гаптенами показали [28], что это простые реакции ассоциации с константами скорости порядка 10 — 10 Кажется вероят- [c.78]

Антитела, индуцируемые определенными антигенами, характеризуются значительной гетерогенностью. При использовании простых химически определенных гаптенов причины для такой гетерогенности могут быть следующими [35] [c.114]

Рис. 7-8. Простой гаптен ДНФ, ковалентно связанный с боковой цепью лизина в белке. Гаптены могут индуцировать иммунный ответ, только будучи связанными с подобным макромолекулярным носителем.

При описании реакций антител с простыми веществами (гаптенами) указывалось, что для нахождения, например, антител к метаниловой кислоте (анти-М) мы использовали соединенный с диазотиро-ванной метаниловой кислотой белок, отличный от того, который применяли как носитель гаптена при иммунизации. У читателя может возникнуть вопрос, [c.24]

Ответ будет таким с простыми гаптенами, такими, как метаниловая кислота, обычно видимой реакции не происходит. Вначале предполагали, что молекула простого гаптена слишком мала, чтобы участвовать в реакции преципитации. Однако сейчас мы больше склоняемся к предположению, что, хотя размеры молекулы и могут иметь значение, основным недостатком метаниловой кислоты и других простых гаптенов является то, что они обладают лишь одной точкой присоединения к антителу (одной реактивной группой). Гаптены, содержащие две или более реактивные группы, в некоторых случаях вступают в реакцию и преципитируют с соответствующими антителами. [c.25]

Далее, применение закона все или ничего при трактовке результатов реакции задержки представляет собой упрощение. Опыт, результаты которого суммированы в первой строке табл. 2, на самом деле дает больше сведений, чем их содержится в простом утверждении, что в пробирках 1—4 отмечается отрицательный результат, а в пробирках 5, 6 и других — положительный. Степень реакции в пробирке, стоящей непосредственно справа от последней пробирки, где реакция отрицательна, также позволяет сделать некоторые заключения, так как реакция может варьировать от слабой до сильной. Например, формально на основании табл. 2 можно было бы сказать, что гаптен Г только в 4 раза менее эффективен как ингибитор, чем гаптен Г, так как его нужно взять в 4 раза больше, чтобы получить полное торможение. Однако если мы примем во внимание, что в пробирке, следующей за той, в которой обнаружено полное [c.32]

Еще более убедительные данные были получены при изучении реакций с конъюгированными антигенами, содержащими комплексные гаптены. На основании количественных исследований подавления реакции антител к простым гаптенам Хукер и Бойд [13, 14] сделали вывод, что на специфичность антител в некоторой степени влияют остатки тирозина или гистидина в белке, с которыми соединялись диазотиро-ванные амины. Это наводит на мысль, что антигенная детерминанта в конъюгированных антигенах не такая простая структура, как гаптен (фиг, 13). Ланд- [c.52]

Два из перечисленных методов—(I) и (IV) — применимы только к простым системам антитело — гаптен, причем первый из них может быть использован только в случае одновалентного гаптена. Метод [c.166]

Метод равновесного диализа в его различных модификациях — общепринятый способ оценки реакции антител с простыми гаптенами. Его чувствительность зависит только от чувствительности методов оценки концентрации гаптена. Наиболее чувствительным, разумеется, яв- [c.246]

Помимо вопроса о сравнении биологически близких белков, несомненно, что конечные аминокислоты в каждом простом белке имеют серологическое значение, по крайней мере, как место связи, подобно синтетическим гаптенам [55]. [c.215]

Рис. 18-7. Простой гаптен ДНФ, ковалентно связанный с боковой цепью лизина в белке. Гаптены могут индуцировать иммунный ответ, только

Известно несколько способов нахождения количества молекул гаптена, пришитых к носителю. Самый простой спектрофотометрический способ заключается в регистрации изменения поглощения раствора конъюгата при определенной длине волны по сравнению с исходным белком-носителем. Можно также рассчитать соотношение компонентов конъюгата из данных по молекулярной массе, полученных электрофорезом в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия или по аминокислотному гидролизу конъюгата. Если конъюгат получили путем пришивки гаптена к аминогруппам белка-носителя, то его состав можно определить по титрованию свободных аминогрупп в исходном белке и конъюгате. Наиболее точный расчет состава конъюгата получается с помощью радиоизотопного метода, в котором используют меченный радиоактивным изотопом гаптен. [c.177]

Получение экспериментальных данных, необходимых для вычисления основных параметров реакции антитела со специфическим лигандом, возможно с достаточной точностью лишь в том случае, когда лиганд одновалентен и как всякий одновалентный гаптен не Ведет к образованию больших по размеру и сложных по составу агрегатов. В случае образования комплексов, состоящих из нескольких молекул антигена и антитела, система настолько усложняется, что реакция не может быть описана простыми уравнениями. [c.104]

Антитела могут быть нацелены против различных частей молекулы гаптена, С антителами против белков ситуация еще более сложная, потому что белок содержит различные антигенные группы, которые еще менее определенны, чем в случае простых гаптенов. Более того, сыворотка содержит несколько классов белков с активностью антител, та кие, как им 1уноглобулины gG, IgM и 1 А. [c.114]

За последние годы удалось получить антитела ко многим простым гаптенам. Особенно удобной моделью оказались динитро-феиильные гаптены, взаимодействие которых с антителами можно исследовать флуоресцентными методами. [c.172]

Наш опыт работы с полимерными соединениями различных классов свидетельствует о весьма относительной ценности внутрикожных методов воспроизведения сенсибилизации (метода Алексеевой — Петкевич или введения полимера в ПАФ). В отличие от простых химических соединений, молекула которых является гаптеном, аллергенность полимера определяется лишь отдельными аллергенными ингредиентами и активными группами, и доза каждого из них при внутрикожном введении 40—500 мкг полимера является по существу подпороговой, а следовательно, недостаточной для развития и проявления аллергических реакций. Методы внутрикожной сенсибилизации могут быть использованы только при изучении полимеров и сложных полимерных композиций с выраженной аллергенной активностью, как, например, замасливателей стекловолокна, на модели которых О. Г. Алексеевой и А. И. Петкевич [5] и была разработана методика однократного внутрикожного введения химического аллергена в ушко морской свинки. [c.148]

Для получения информации о связи химического строения с иммунологической специфичностью в системах углевод — антиуглевод применяют следующие типы иммунологических исследований а) количественное осаждение близкородственных полисахаридов гомологичными антисыворотками с последующим построением кривых осаждения [9, 10] б) количественное осаждение гетерологичными или перекрестно реагирующими антисыворотками [11 — 13] в) ингибирование осаждения в гомологичных или перекрестно реагирующих системах олигосахаридами или простыми сахарами [6—8, 11] г) специфическое связывание олигосахаридов с антителом, определяемое методом равновесного диализа [14] д) связывание комплемента и ингибирование связывания комплемента [15, 16] е) получение искусственных антигенов с углеводными детер-минантными группами конденсацией простых сахаров известного строения с белками через азофенильную группу и сравнение специфичности появляющихся антител с известными изменениями в структуре введенных групп [17, 18] или использование, гаптенного ингибирования для выяснения специфичности антисыворотки [19—22]. [c.431]

Гаптенное ингибирование представляет собой достаточно простой метод определения относительной стабильности приципитатов, образованных конканавалином А и рядом полисахаридов. Мерой стабильности служит число микромолей метил-а-в-маннопиранозида, вызывающее 50%-ное ингибирование реакции преципитации с данным полисахаридом. Стабильность преципитатов, несомненно, связана с такими особенностями структуры молекулы полисахарида, как природа и относительное количество терминальных невосстанавливающих гликозильных остатков, а также длина боковых цепей. Если боковые цепи полисахарида содержат по одному моносахаридному остатку, комплекс конканавалина А с этим полисахаридом очень легко диссоциирует под действием метил-а-о-маннопиранозида. [c.96]

Получение конъюгатов-носителей с гаптенами, содерж ими карбоксильную группу. Наиболее широко распространен метод сме-шанных ангидридов, который состоит в простом эквимОлярном смешивании гаптена (Г) и БСА (Б) с изобутилхлорформиатом и основанием (N-метилморфолин, трибутиламин, триэтиламин) [c.178]

Получение конъюгатов ферментов с гаптенами, содержащими аминогруппы. Метод с применением гомобифункциональных сшивающих реагентов. Самый простой способ получения конъюга- [c.194]

TOB ферментом с гаптенами, содержащими активные КНг-группы, состоит в простом смешении в щелочной среде фермента, гаптена и сшивающего реагента — глутарового альдегида или диметил-адипимйдата [c.195]

Хотя наборы для мониторинга лекарственных препаратов на дому еще не производятся, уже разработаны простые методы определения некоторых лекарств вне крупных централизованных лабораторий. Например, компания Syva под торговым названием A ulevel производит наборы в виде индикаторных бумажек, с помощью которых в небольших специализированных лабораториях можно определять теофиллин и фенобарбитал. В наборе A ulevel проба и конъюгат гаптен - фермент находятся в одном реакционном сосуде, в который помещают конец бумажной полоски с иммобилизованными на ней антителами к данному гаптену [c.99]

Приведенные в разд. 3.2 данные о сходстве антигенного строения активных центров ряда изученных к настоящему времени рецепторов, с одной стороны, и антител к тем же лигандам — с другой, согласуются с изложенной выще гипотезой. Однако оставался вопрос, на который еще не было получено ответа. Как известно, гормоны белковой природы (например, инсулин) и еще более сложные по строению белки, каким является lq-компо-нент комплемента, имеют различные по строению антигенные детерминанты. При изучении рецепторов нелимфоидных клеток, распознающих такие сложные по строению лиганды, как перечисленные белки, невозможно достаточно простыми средствами строго доказать, действительно ли одни и те же структуры в молекуле лиганда распознаются клеточным рецептором и антителами к тому же лиганду, так как к каждой антигенной детерминанте этого лиганда образуется особое по специфичности антитело. При сравнении строения активных центров рецептора сложного по строению лиганда, с одной стороны, и антитела к одной из детерминант этого лиганда — с другой, недостаточно установить факт конкуренции за лиганд рецепторного белка и антиидиотипического антитела. Следует считаться с тем, что рецептор через свой активный центр может распознать значительно больший по величине участок молекулы лиганда, нежели активный центр сравниваемого антитела. Антиидиотипическое антитело и в этом случае может создать стерическое препятствие для связывания рецептором лиганда. Вот почему для более строгого доказательства обсуждаемой гипотезы необходимо обнаружить на нелимфоидных клетках рецепторы, способные распознавать простые по строению гаптены, и изучить строение активных центров таких рецепторов, сопоставив его со строением активных центров антитела к тому же простому гаптену. [c.53]

В других опытах о присутствии на поверхности макрофагов рецепторов для простых гаптенов судили по специфичности связывания эгими клетками изологичного белка (IgG), боковые аминокислотные остатки которого (лизин) были модифицированы с помощью диннтрофторбензола. Такой антиген с ДНФ-груп- [c.55]

Приведенные выше данные указывают на то, что нелимфоидные клетки различного происхождения синтезируют мембранные белки, специфически взаимодействующие с простыми гаптенами. К этим гаптенам без труда могут быть получены антитела, способные специфически их распознавать. С целью обозначения внеклеточных участков рецепторов нелимфоидных клеток, солюбилизируемых с помощью трипсина (рис. 13), был предложен термин R-белки (А. Я. Кульберг, 1985) (от англ. regulator). [c.55]

Как было показано в гл. 3, все указанные клетки экспрессируют рецепторы к простым гаптенам — азофениларсанилат-тиро-зину (АРС) и динитрофениллизину (ДНФ). В материале, снятом с поверхности клеток с помощью трипсина, содержатся [c.79]

В недавнее время появились сведения о том, что,фрагменты рецепторов, сбрасываемых с клетки, включают внеклеточные участки их молекул (/ -белки). Это было установлено при изу-чении состава культуральной жидкости от клеток макрофагоподобной линии Р3880ь выращивание которых производили в присутствии С-глицина. При пропускании культуральной жидкости через колонку с иммобилизованным арсанилаттирозином был обнаружен и выделен меченый белок. Последний характеризовался избирательным сродством к указанному выше гаптену и имел молекулярную массу, не превышающую 60 000. Аналогичный по специфичности белок, как показано в гл. 3, удается снять с поверхности тех же клеток с помощью трипсина. Поскольку макрофаги не продуцируют антител, белок, содержащийся в культурной жидкости этих клеток, который взаимодействует с простым гаптеном, можно отнести к продуктам катаболического распада рецепторов, распознающих указанный гаптен. [c.83]

Для точной оценки структуры детерминантной группы синтезируют гаптены. В рассматриваемом примере гаптеном послужит конъюгат тирозина с сульфаниловой кислотой Такой гаптен не преципитирует антител, но, соединяясь с ними, блокирует активные центры. В результате антитела утратят способность взаимодействовать с тест-антигеном. Реакция ингибирования — эффективный метод тестирования антител против простых по химическому строению гаптенов. [c.24]

Рецепторы для антигена на поверхности Т-супрессоров сходны, если не иаентичны, но специфичности с рецепторами В-лимфоцитов и антителами, что было убедительно продемонстрировано в опытах с конъюгированными антигенами. Достоверные сравнительные данные о сродстве (аффинность) антигенсвязывающих рецепторов В-лимфоцитов и Т-супрессоров к простым гаптенам еще не получены. [c.49]

Источником антител для оценки кинетических параметров реакции служили до последнего времени очищенные антитела против простых гаптенов и моноклональные миеломные иммуноглобулины с гаптенсвязывающей активностью. Первые из них неоднородны в том числе и по степени сродства (скорость реакции) с лигандом. Поэтому в подобных случаях получают лишь усредненные значения тех пли иных параметров. [c.104]

Реализация иммуноглобулинами, продуктами их про-теолпза илн комплексами антиген-антитело биологических функций выражается в том пли ином эффекте, феномене, реакции. Вот почему биологические функции иммуноглобулинов, складывающиеся часто из нескольких более простых реакций, целесообразно обозначать как эффекторные, подразумевая под ними наиболее простые реакции. Что касается взаимодействия антител с антигеном (гаптеном), то если исключить биологические последствия этого взаимодействия, эту функцию иммуноглобулинов южно назвать афферентной. [c.123]

НИИ всех этих данных Р. Петров, Р. Хантов н др. (1977—1983) разработали и исследовали ряд искусственных антигенов. В качестве детерминант служили различные ароматические соединения, белки, комплексные бактериальные антигены. Было показано, что комплексы простых гаптенов и белков с поликатионами обеспечивают тимуснезависимость иммунного ответа. Углубленное изучение действия поликатионов на лимфоидные клетки и в первую очередь на цитоплазматическую мембрану (Р. Атауллаханов и др., 1983) позволит расшифровать молекулярные механизмы, определяющие особенности действия этих соединений при иммунном ответе. [c.228]

Мы убедились на опыте, что эритроциты предпочтительнее конъюгировать с гидрофильным гаптеном п-азофениларсонатом (арс), чем с такими гидрофобными гаптенами, как динитрофенол. тринитрофенол и нитроиодофенол, по той простой причине. [c.316]

На введение чужеродного вещества животное отвечает об разованием антител нескольких типов, способных узнавать Этот чужой антиген. Даже если антиген очень прост по строении и практически полностью гомогенен (как, напрнмер, простое химическое вещество — гаптен), все равно в сыворотке рецнпи ента можно обнаружить по меньшей мере 5—10 различных типов антител, способных связаться с таким антигеном. Ил следует рассматривать лишь как ничтожно малую выборку из всего репертуара разных по специфичности антител, которые способна синтезировать особь данного вида (Shulman, Kohler. [c.12]

Клетки остаются связанными с частицами иммуносорбента и не могут быть отделены от них простым отмыванием сывороткой плода коровы. Конъюгат желатины с гаптеном можно отделить от клеточной поверхности с помощью трипсина или коллагеназы. В большинстве случаев необходимо пользоваться высокоочи-щенной коллагеназой марки А, которая не действует на поверхностные белки клеток. К 0,9 мл клеточной суспензии в СРЭЗ или ЗФР (содержащей до 10 клеток) прибавляют 0,1 мл 0,1 /о-ного раствора коллагеназы. При достаточной активности препарата коллагеназы можно применять более низкие концентрации. [c.285]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология