ПОЛИСАХАРИДЫ Общие методы выделения полисахаридов

ПОЛИСАХАРИДЫ В ПРИРОДЕ. ОБЩИЕ СВОЙСТВА И МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ [c.477]

Общие методы выделения полисахаридов [c.259]

Общие метода выделения полисахаридов 293 [c.293]

Гликоген является резервным полисахаридом, общим для всех животных организмов, а также некоторых бактерий и дрожжей. Значительным содержанием гликогена отличаются клетки печен и имышц животных. Для выделения этого полисахарида разработано несколько методов экстракция тканей водой , 30%-ным едким кали, трихлоруксусной кислотой или диметилсульфоксидом . [c.540]

Основным резервным полисахаридом животных организмов является гликоген. Он обнаружен в большинстве животных тканей наиболее удобными источниками для его экстракции обычно слу- кат печень или мышечная ткань. Печень человека содержит до 10% гликогена (от сухой массы). В отличие от крахмала выделение и очистка гликогена — непростая задача. По классическому методу ткань нагревали в сильношелочном растворе при 100°С в течение 3 ч для ее растворения и затем осаждали гликоген этанолом. После обнаружения факта щелочного распада (см. разд. 26.3.2.5) была разработана другая методика. При экстракции холодным разбавленным раствором трихлоруксусной кислоты был выделен продукт, молекулярная масса которого была в 10 с лишним раз больше, чем у продукта, полученного традиционным методом [158]. В настоящее время разработаны методы, позволяющие еще надежнее исключить распад в процессе выделения [159] с их помощью можно определить действительную молекулярную массу выделенного полисахарида. Было найдено, например, что молекулярная масса гликогена из печени при общем нарушении процесса отложения в ней гликогена меньше нормальной. [c.257]

Последовательность мономеров в пептидных и олигосахаридных цепях. Для определения этой последовательности используются два пути— изучение последовательности мономеров в выделенных после глубокой деструкции фрагментах гликопротеинов и установление строения концевых групп гликопротеина. Нужно при этом иметь в виду, что общие методы, используемые при анализе структуры полисахаридов, — метилирование и периодатное окисление (см. гл. 19) в применении к самому гликопротеину могут дать пока крайне ограниченную информацию. Дело в том, что метилирование гликопротеинов, видимо из-за особенностей их вторичной структуры, с большим трудом проходит до конца и чаще всего [c.573]

В заключение следует отметить, что присутствие в составе культуральных жидкостей и биомассы микроорганизмов огромного количества ценных биологически активных веществ, зачастую недоступных для других способов их синтеза, ставит перед промышленной биотехнологией, проблему развития методов переработки своих продуктов для обеспечения максимально широкой номенклатуры и гаммы товарных форм. Поясним это на примере уже упоминавшегося белково-витаминного концентрата, целью производства которого являются кормовые концентраты, сбалансированные по незаменимым аминокислотам при общем повышении содержания усвояемого белка. Очевидно, что создание методов выделения белка из биомассы (50—70% ее состава) позволило бы получить концентрированный целевой продукт, а другие компоненты клетки — нуклеиновые кислоты, липиды, полисахариды и т. п. — использовать как самостоятельные продукты, зачастую крайне дефицитные и необходимые, но малоценные для кормопроизводства и даже вредные для него, как, например, нуклеиновые кислоты. В перспективе можно было бы поставить вопрос о деполимеризации (гидролизе) белковых молекул и выпуске необходимых в кормопроизводстве дефицитных аминокислот — лизина, треонина, триптофана и других, с тем чтобы остальные аминокислоты использовать в технических целях. [c.30]

Количественное определение целлюлозы основано на выделении ее в возможно более чистом вид- Все предложенные для этой цели методы основаны на сравнительной устойчивости целлюлозы к действию ряда химических реагентов — воды, спирта, разбавленных щелочей и кислот, хлора, двуокиси хлора и др., которые растворяют или разрушают другие полисахариды и лигнин, превращая их в растворимые продукты Принципиальным недостатком всех методов, предложенных для определения содержания целлюлозы, является отсутствие точного критерия для характеристики чистоты полученной целлюлозы и невозможность учета потерь целлюлозы в процессе определения. Целлюлоза, выделяемая при анализе по любому методу, всегда содержит большее или меньшее количество других полисахаридов, в частности, пентозанов, не удаляемых в условиях анализа. В тех случаях, когда требуется определить содержание чистой целлюлозы, необходимо Б параллельных пробах определять содержание гексозанов (маннан, галактан), пентозанов и уроновых кислот и вычитать их количество из найденного общего количества полисахаридов. Невозможностью выделения целлюлозы в чистом виде [c.118]

Общего метода очистки для всех полисахаридов не существует, и используемые методики в каждом случае зависят от характера отдельных полисахаридов и от возможных загрязнений. Второй том книги Пигмана и Хортона [1] посвящен химии и биохимии полисахаридов, их выделению, разделению и очистке, так что мы решили в этом обзоре рассматривать только взаимное хроматографическое разделение полисахаридов. [c.129]

Содержание полиоз в древесине можно определять различными методами выделением всех или части полиоз и косвенными методами без их выделения. В анализе древесины общепринятая методика выделения и определения полиоз заключается в последовательной обработке хлоритной холоцеллюлозы 5 %-ным и 24 %-ным КОН [2491. Щелочные растворы полиоз нейтрализуют уксусной кислотой и обрабатывают большим количеством этанола. Осаждающиеся фракции называют полиозами А (из 5 %-ного КОН) и полиозами В (из 24 %-ного КОН). После поправки на золу сумма этих двух фракций соответствует содержанию полиоз, но не равна точно количеству всех полиоз в образце древесины. Это обусловлено частично их потерей, главным образом пентоза-нов, при делигнификации (см. 3.2.6), неполным осаждением из спиртовых растворов кроме того, в альфа-целлюлозе остается существенная примесь полиоз (см. 3.2.7) [201 ]. Для определения содержания полиоз в древесине хвойных пород предложена модификация этого метода с использованием 5 %-ного и 17,5 %-ного NaOH [691. Описан комбинированный метод выделения из древесины полисахаридов по Уайзу [249] с дополнительным определением содержания пентозанов, уроновых кислот и ацетильных групп непосредственно в древесине после экстрагирования водой [202]. В принципе, для определения содержания полиоз можно использовать любую методику их фракционного выделения при условии, что сумма фракций характеризует общее количество полиоз или, по крайней мере, преобладающую часть. [c.37]

В группе методов получения растворимых лигнинов наиболее важное значение имеет метод выделения сравнительно неизмененного лиг h4i на молотой древесины (ЛМД), или лигнина Бьеркмана, заключающийся в размоле древесины в вибрационной мельнице с последующим извлечением лигнина диоксаном. Разработан ряд модификаций этого метода с изменением условий предварительной обработки древесины, размола, извлечения лигнина и его очистки [16, 33, 129, 174, 182]. Применение ультразвука при извлечении лигнина значительно снижает его продолжительность [238, 239, 240]. Выделенные лигнины близки (по содержанию ме-токсильных групп, остаточных полисахаридов и ММР) к ЛМД, полученным по исходной методике. Выход сырых ЛМД достигает 60 % общего количества лигнина в древесине, однако в случае древесины хвойных пород выход ЛМД после очистки не превышает 25 %, а чаще он много ниже. Выход ЛМД из древесины лиственных пород выше [16, 129]. Препараты ЛМД рассматриваются как наиболее пригодные для исследования, хотя они, вероятно, не идентичны с природным лигнином и, по-видимому, не могут быть представительными для всего лигнина клеточной стенки. [c.42]

В первой и второй главах практикума даются краткие сведения общего характера о методах выделения, разделения, очистки и идентификации индивидуальных соединений. В препаративной части приведены эти методы в приложении к представителям отдельных классов, причем такие вещества, как белки, нуклеотиды, полисахариды и другие биополимеры, не включены в перечень работ. [c.10]

Подробнее всего, как указывалось, представлены методики, касаю щиеся химии полисахаридов, где приведены общие и некоторые частные методы выделения, физические и х)амические методы исследования. [c.6]

Ниже приведены общие методы [1, 5] окисления полисахаридов. Обычно полисахарид окисляют разбавленным раствором перйодата натрия на холоду, измеряя через определенные промежутки времени количества образовавшейся муравьиной кислоты и израсходованного перйодата. Концентрацию перйодата определяют титрованием [6—8] или — при работе с микроколичествами веществ — снектрофотометрически [9, 10]. Муравьиную кислоту определяют прямым титрованием стандартным раствором щелочи [11 — 13], или косвенно — по количеству иода, выделившегося из раствора иодида и иодата калия [12, 14], или по выделению углекислого газа (определяемого манометрически [15]) из бикарбонатного буферного раствора. [c.468]

В книге подробно рассмотрены методы исследования гликопротеинов и обсуждены особенности их структуры. Проанализированы суш ествующив методы выделения гликопротеинов из сложной смеси родственных им веществ — белков, полисахаридов и др., методы проверки их гомогенности, определение величины и формы молекул. Методы установления состава гликопротеинов изложены с рассмотрением осложнений, возникающих при гидролизе смешанных биополимеров. Накопленный за последние годы опыт исследования гликопротеинов позволил авторам изложить общие методы изучения структуры гликопротеинов, включая методы фрагментации, выделения и исследования фрагментов. Особое место уделено углевод-пептидным связям в гликопротеинах. [c.5]

Этот метод [33] анализа полисахаридов дает немного дополнительной информации об их общем строении, однако поскольку при выделении чистых образцов полисахаридов часто добавляют щелочь, необходимо знать происходящие при этом реакции. Самым распространенным типом таких реакций является гидролиз сложноэфирных группировок, используемых для защиты гидроксильных или карбоксильных групп в моносахаридных остатках. Наиболее полную информацию дает постепенное расщепление моносахаридных звеньев, начиная с восстанавливающего конца полисахарида, так называемый пилинг (англ. peeling, слущивание). При анализе разветвленных структур он часто дает больше информации, чем гидролиз ферментами (которые расщепляют молекулу с невосстанавливающего конца), поскольку восстанавливающий конец у молекулы лишь один. При деградации 1,3- и 1,4-связанных моносахаридных звеньев образуются соответствующие сахариновые кислоты (схемы 5, 6), строение которых позволяет определить положение суш,ествовавшей связи. (1 4)-Связанные полисахариды разрушаются не полностью из-за конкурирующей реакции, которая приводит к полисахаридам, устойчивым к действию щелочи (схема 7). Кроме того, скорость расщепления (1 3)-связей может в десять раз превышать скорость расщепления (1->4)-связей. Вследстви(2 этого как только расщепится (1->4)-связь, немедленно распадается, если оно связано (1- -3)-связью, следующее звено, что затрудняет определение последовательности этих связей. [c.222]

Некоторые общие проблемы возникают как при метилировании гликоз-аминогликанов, так и для гликопептидов, поскольку последние содержат остатки К-ацетилгексозаминов. Полное метилирование хондроитинсульфата В достигается путем шести последовательных обработок диметилсульфатом в щелочном растворе (реагент Хеуорзса) [128] при температуре 0—5°. Было показано, что при этом главным, если не единственным изменением в молекуле полисахарида является 0-метилирование [129, 130]. Обработка реагентом Хеуорзса в воде орозомукоида, а также полного ацетата выделенного из него гетеросахарида приводит к глубокой деструкции углеводного фрагмента [22, 127]. Однако при введении в систему четыреххлористого углерода реакция протекает более гладко, но еще не количественно [131, 132]. Полное метилирование достигается при обработке реагентом Хеуорзса в водном ацетоне и затем по методу Пурди и Ирвина [133, 134], т. е. иодистым метилом и окисью серебра. Позднее Брэгг и Хок [58] метилировали орозомукоид по существу таким же методом, но их результаты не согласуются с данными предыдущих исследователей возможные причины такого различия будут рассматриваться ниже. Метод метилирования по Хеуорзсу с прибавлением четыреххлористого углерода успешно использовали для метилирования некоторых гликозаминогликанов [135, 136]. [c.255]