Приборы для аналитического электрофореза

Приборы для аналитического электрофореза [c.115]

В простейшем приборе для низковольтного электрофореза белков на бумаге (см. рис. 12.5) оба конца полоски бумаги погружены в электролит, находящийся в электродных камерах. Во время электрофореза электролит движется к центру бумаги за счет капиллярных сил, и влажность, уменьшающаяся в результате испарения, восстанавливается. Электролит, кроме того, движется к катоду вследствие электроосмоса. Если нужно узнать заряд разделяемых веществ, то на старт следует нанести незаряженное соединение, например глюкозу. Ее положение после электрофореза указывает на место фактического старта. Градиент напряжения обычно составляет от 5 до 15 В/см. Для аналитических целей используют более тонкую бумагу, например ватман № 1, а для микропрепаративного разделения более подходит ватман № 3. [c.341]

Прибор для электрофореза на бумаге и крахмальном геле для научных исследований и текущего анализа (контрольный институт, республиканская контрольно-аналитическая лаборатория), [c.226]

В настоящее время коммерчески доступны приборы, некоторые из них - второго поколения, позволяющие проводить рутинные измерения. Это отражается также на характере публикаций число работ, ориентированных на практику, перекрывает число чисто методических или теоретических работ. В 1990 году в обзоре по аналитической химии под рубрикой "Капиллярный электрофорез" приведены только 225 работ, из которых более половины относились к 1988/89 годам, а в обзоре за 1990/91 годы приведены уже 523 публикации. [c.110]

Фнг. 12. Подставка для заполнения стеклянных трубок гелем, входящая в комплект прибора для аналитического диск-электрофореза (описание см. в [c.89]

Для аналитического и препаративного выделения и исследования свойств высокомолекулярных биополимеров — белков, протеидов, полипептидов и нуклеиновых кислот, а также для отделения взвешенных в жидкости частиц, не отделяемых фильтрацией, используют эффект электрофореза — движения под действием внешнего электрического поля дисперсных частиц, находящихся во взвешенном состоянии в жидкой или газообразной среде. Электрофоретические приборы описаны в табл. 24. [c.278]

Следует также упомянуть разработанный Пильным и др. 98] количественный чисто хроматографический метод или метод электрофореза на бумаге, не требующий применения денситометра или какого-либо другого аналитического прибора. Хроматограмму фотографируют, определяя максимальное время экспозиции, необходимое для того, чтобы данное пятно не появилось на фотографии хроматограммы. Однако этот метод годится только в особых случаях, например, когда нельзя определить размер пятна визуально из-за того, что оно налагается на другое пятно. [c.100]

Метод лазерного электрофоретического светорассеяния был введен в 1971 г. Варом и Фляйгером [82]. Этот метод, в котором объединены измерение скорости на основе эффекта Доплера и электрофорез в свободном растворе, позволяет определить подвижность относительно чистых белков всего за несколько секунд (рис. 3.1). Йертен [83] сконструировал прибор, позволяющий устранить конвекцию зоны белка в свободном растворе путем вращения горизонтальной кварцевой трубки, в которой проводят электрофорез вокруг ее продольной оси (рис. 3.2). Разделяемые зоны наблюдают путем оптического сканирования этой трубки. Кацимпулас [79] при изучении кинетики электрофореза применил градиенты плотности в вертикальных кварцевых колонках с последующим многократным сканированием (рис. 3.3). В сконструированном Хэннигом и др. [84] приборе для аналитического электрофореза в свободном потоке стабилизация достигается при помощи капиллярного зазора между пластинами, которые находятся в высоковольтном электрическом поле, перпендикулярном ламинарному потоку буфера (рис. 3.4). Колин [85] применил остроумный метод стабилизации зон в электрофорезе с бесконечной лентой жидкости под действием электромагнитных сил жидкость вращается в кольцевой ячейке, в то время как заряженные частицы движутся в электрическом поле по спирали (рис. 3.5). [c.115]

В методе свободной диффузии можно использовать аппарат для электрофореза, аналитическую ультрацентрифугу или специальный прибор, предназначенный для измерения диффузии. Сначала создается резкая граница раздела между раствором, содержащим макромолекулы, и зоной растворителя эту границу получают либо при помощи стеклянной перегородки, либо создают в результате седиментации. Затем перегородку убирают или понижают скорость центрифугирования и дают [c.406]

Изоэлектрическое фокусирование (электрофокусирование) вначале было предложено как препаративный метод. Однако оно получило более широкое распространение как аналитический прием (см. гл. 9). Хотя теоретически, а часто и на практике изоэлектрическое фокусирование — превосходный метод, некоторые связанные с ним трудности ограничивают его применение. Во-первых, это касается конструкции прибора. Изоэлектрическое фокусирование предъявляет менее жесткие требования в этом отношении, чем обычный электрофорез, благодаря почти полному отсутствию тепловыделения. Был разработан целый ряд систем, и некоторые из них оказались удачными. Так, было предложено помещать образец вместе с амфолитами в длинную гибкую трубку, которую можно накрутить в виде спирали на горизонтальную катушку. После разделения индивидуальные компоненты под действием силы тяжести собираются в нижних частях спирали, которая разрезается, и мате- [c.226]

В 1942 г. Свенссон [119] описал прибор для препаративного электрофореза с рядом новых усовершенствований, в котором соединил положительные стороны аналитического прибора Тизелиуса с требованиями работы с большими объемами и с большим удобством обращения. В последние годы прибор был еще более усовершенствован, и его устройство можно видеть на рнс. 44. [c.286]

Прибор для аналитического диск-электрофореза состоит в основном из верхнего и нижнего сосудов, в которые помещают электроды, изготовленные из платиновой проволоки (или иног да из угольных стержней). Трубки, содержащие столбики геля. [c.93]

Изоэлектрическое фокусирование (ИЭФ) — один из наиболее эффективных и широко распространенных в настоящее время методов фракционирования и очистки белков. Его используют как на завершающих стадиях эксперимента (аналитический вариант), так и при обработке исходного клеточного гомогената (препаративный вариант). Многие методические приемы, например приготовление гелей полиакриламида н агарозы, окраска белковых полос, элюция белков из гелей и др., роднят ИЭФ с электрофорезом белков, подробно рассмотренным в предыдущей книге [Остерман, 1981]. Фракционирование белков при ИЭФ производится в электрическом поле с помощью тех же приборов, которые используются для электрофореза. Ниже при изложении материала предполагается, что читатель уже знаком с этими методами и аппаратурой. [c.3]

Электрофоретический анализ смеси белков проводят с помощью гель-электрофореза или изоэлектрического фокусирования, чаще всего в полиакриламидном геле с додецилсульфатом в качестве денатурирующего агента или без него. Методика описывается в разд. 9.1. В настоящее время в продаже имеется много прекрасного оборудования начинающим можно посоветовать сразу же приобрести прибор для тонкослойного электрофореза. Пожалуй, сейчас в мире мало найдется биохимических лабораторий, в которых не было бы оборудования для аналитического гель-электрофореза. [c.12]

Газовые и высокоэффективные жидкостные хроматографы традиционно являются наиболее широко используемыми приборами для рутинных анализов загрязнителей объектов окружающей среды. С недавнего времени капиллярная хромато-масс-спектрометрия стала весьма важным инструментом в мониторинге загрязнителей окружающей среды. В то же время и другие комбинированные аналитические системы (например, капиллярный газовый хроматограф с атомно-эмиссионным детектором или ИК-спектрометром с Фурье-преобразованием, а также сочетание ВЭЖХ и масс-спектрометрии) появляются во все большем количестве в обычных лабораториях. Потенциальные преимущества тонкослойной хроматографии пока еще перевешиваются утомительным характером ее технологии. Другая техника, включающая сверхкритическую хроматографию (СКХ) и капиллярный электрофорез, описана в главе 14. [c.26]

В полиакриламидном геле образцы разделяют на горизонтальных пластинах только при препаративном электрофорезе, а для аналитических исследований применяют цилиндрические столбики геля, поддерживаемые в вертикальном положении внутри калиброванных стеклянных трубок в специальных приборах (рис. 4.7). [c.120]

В приборе Стадиера можно обойтись и без вырезов в стенке и пластине, а также без уплотнения, если электрическую цепь между верхним буфером и гелем замкнуть через смоченные тем же буфером фитили из фильтровальной бумаги [De Wa hter, Fiers, 1971]. Конструкция прибора становится совсем простой, и отпадает необходимость делать вырезы в стеклянных пластинах. Тем не менее этот способ нельзя рекомендовать во-всех случаях аналитического электрофореза, так как он имеет один недоста- [c.31]

ДЛЯ быстрого диагностирования индикаторов загрязнения и наличия патогенных организмов. В биохимии мембранные фильтры применяются в качестве пористых подложек при электрофорезе и для связывания нуклеиновых кислот при изучении гибридизации. Они широко используются в клинической практике, в том числе для установления наличия раковых клеток в ткани, при цитологических исследованиях тканевых жидкостей, для приготовления тех или иных лекарственных средств и т. п. В аналитической практике вещества, собранные на фильтре, можно подвергнуть рентгеноструктурному анализу, эмиссионной спектроскопии, микроскопии, гравиметрии или активационному анализу. Мембраны используются во многих аналитических приборах, например в газоанализаторах на кислород, в рН-метрах и электролитическом разделении ионов. В процессах диализа и ультрафильтрации используют по существу те же мембранные фильтры, но с другими размерами пор. Ныне один из самых тонких методов получения высококачественной воды, свободной от ионов, состоит в комбинировании микрофильтрации с обратным осмосом в последнем случае применяют более тонкопористые мембраны. [c.18]

В продаже имеются приборы нескольких типов. Ниже мы описываем прибор для аналитического электрофореза в полиакриламидном геле, который производит фирма Reanal (Венгрия). [c.88]

Напряженность поля следует поддерживать настолько высокой, насколько это возможно по условиям образования и рассеяния тепла. Джовин и др. [648] нашли, что в описанном ими приборе плотность тока 5 мА/см была вполне допустимой, так как она обеспечивала градиент напряжения 10 В/см и мощность 0,5 Вт/см. Вообще, мощность не должна. превышать 10— 12 Вт, так как в противном случае разделившиеся зоны становятся вогнутыми из-за того, что в центре геля они движутся быстрее, чем у его поверхности [1094]. В начале опыта лучше использовать небольшой ток, чтобы образец плавно вошел в гель при минимальном нагреве и конвекции (1 ч и более). Скорость движения макромолекул в процессе препаративного электрофореза должна быть ниже их скорости в аналитическом опыте [1184]. [c.114]

Рис. 39, Схта прибора для аналитического электрофореза в полиакриламидном геле (фирма Shandon Southern). )—электрический провод 2 —электрод, вмонтированный в крышку 5 —верхний электродный сосуд — уплотнительное кольцо для трубки 5 — калиброванные трубки для геля 5 —электрический провод 7 —узел нижнего электрода 5 —верхний электродный сосуд из комплекта для изоэле(Ктрического фокусирования 9 — вкладыш из комплекта для изоэлектрического фокусирования —нижний электродный сосуд.

Количественная жидкостная хроматография является хорошо разработанным аналитическим методом, не уступающим по точности количественной газовой хроматографии и значительно превышающим точность ТСХ или электрофореза. К сожалению, в ВЭЖХ не существует детектора, который имел бы близкую чувствительность для соединений различного химического строения (как катарометр в ГЖХ). Поэтому для получения количественных результатов калибровка прибора обязательна. [c.174]

В настоящее время химический анализ выполняется в основном с помощью настольных систем, размером приблизительно с большой телевизор. Как видно из предыдущих глав, существует множество аналитических методов, предназначенных для проведения лабораторного анализа проб с целью выяснения возможной структуры, идентификации компонентов и определения их количеств. Анализ включает в себя стадии пробоотбора, предварительной обработки пробы, разделения компонентов и их последующего определения. Первоначально все эти стадии выполнялись вручную с помощью различных приборов. Однако для анализа в режиме on-line необходима как можно большая автоматизация процесса. Во многих современных оп-Нпе-системах стадии пробоотбора и пробоподготовки, разделения и определения сосредоточены в одном приборе с автоматическим компьютерным контролем большинства стадий. Примерами этих так называемых систем полного анализа (СПА, рис. 15.1-1,6) являются проточно-инжекционный анализ (ПИА), электрофорез, хроматография (гл. 5) и масс-спектрометрия (разд. 9.4). Эти методы используют в режиме ex-situ, т. е. пробу необходимо отобрать и перенести в лабораторию. Как правило, перед началом анализа проба подвергается предобработке, сложность которой определяется решаемой аналитической задачей. Эти системы обладают рядом преимуществ, связанных с высокой степенью автоматизации анализа, возможностью проведения автоматической калибровки и отсутствием необходимости использовать высокочувствительные детекторы, благодаря предварительной [c.639]

В лаборатории авторов главы успешно используется нисходящий бумажный электрофорез без охлаждения, разработанный Микешом [70]. Принципиальная схема прибора для такого разделения показана на рис. 12.5. Этот прибор используется в основном для аналитического и препаративного разделения пептидов, содержащихся в ферментативных гидролизатах белков. Оптимальное разделение достигается при применении таких буферных растворов, электропроводность которых соответствует 1/150 М фосфатному буферному раствору Соренсена (3,63 г КН2Р04-Ь 14,32 г На2НР04-12Н2О в 10 л воды, pH 7). Летучие буферные растворы более удобны, если во время их испарения концентрация ионов на бумаге не увеличивается. Например, для разделения пептидов обычно используется пиридин-ацетат-ный буферный раствор, pH 5,6 (4 мл пиридина +1 мл уксусной кислоты, вода до 1 л). Нейтральные, незаряженные, соединения остаются в центре бумаги, т. е. на старте, и образуют узкую смешанную зону. В верхней части бумаги располагаются зоны пептидов основного характера, а в нижней части — кислотного. [c.291]

Небольшие количества белков можно выделить в чистом состоянии, пользуясь обычным прибором (емкостью 11 мл), применяемым для аналитических целей, тогда как для разделения больших количеств белков лучше пользоваться прибором, сконструированным Тизелиусом [298] для препаративных целей. Оба эти прибора удобны тем, что они позволяют в ходе электрофореза и, если желательно, при отборе проб осуществлять непрерывный оптический контроль. При отборе проб удобно пользоваться описанной Тизелиусом [298] специальной бесконвекционной пипеткой можно также изолировать одну из секций прибора от другой с помощью скользящей стеклянной пластинки. [c.73]

Обычно электрофорез осуществляют в горизонтальных или вертикальных приборах различной конструкции, основной частью которых является лоток или камера с опорной средой. Электрофорез в геле можно проводить на колонках. При этом существенное отличие от предыдущих методов заключается в том, что цосле деления каждая зона может быть нослодоватольно элюирована с колоыки. Для аналитических целей применяют также дисковый электрофорез в полиакриламидном голе. [c.20]

Прием данных относится к этапу обработки, при этом аналоговый сигнал, поступающий от аналитического прибора (в случае АРМа Электрофорез от денситометрического преобразователя), преобразуется в цифровую форму и передается в распоряжение драйверной программы. Процесс сжатия данных [c.76]

Для ИЭФ в этом случае используют те же приборы, что и для электрофореза в горизонтальных гелях — Мультифор (LKB-2117) и другие аналогичные конструкции ( Desaphor , Bio-Rad 1415 , Pharma ia FBE-ЗООО и др.). Аналитическое фокусирование обычно ведут в направлении меньшего размера охлаждающего столика на длине 10—12 см одновременно для многих препаратов. В случае полупрепаративного ИЭФ с его большей загрузкой и относительно широкими полосами разделение белков проводят в направлении большего размера столика на длине 26 и даже 40 см. [c.20]