Гидролиз групповых веществ крови

Частичный кислотный и щелочной гидролиз групповых веществ крови [c.198]

Данные, полученные с помощью непрямых методов — торможения серологической и ферментативной активности простыми соединениями известного строения и последовательного ферментативного расщепления,— дают очень ценную информацию о природе детерминантных групп в веществах крови. Однако более однозначные данные можно получить путем выделения и идентификации активных фрагментов непосредственно из групповых веществ. Фрагменты, выделенные из продуктов частичного кислотного гидролиза групповых веществ крови человека. Отщепление от групповых веществ крови фукозы и сиаловой кислоты в условиях кислотного гидролиза, при которых происходит лишь незначительное отщепление других компонентов, указывает на то, что эти сахара являются концевыми или имеют латеральное расположение по отношению к основным углеводным цепям. При гидролизе групповых веществ крови человека 1 н. уксусной кислотой при 100° в течение 16 час независимо от их специфичности освобождается около 95% общей фукозы в виде свободного сахара [53]. Обработка групповых веществ Ье кислотой в очень мягких условиях (0,1 н. серная кислота, 80°, 1 час) приводит к освобождению всей сиаловой кислоты [68]. В продуктах частичного кислотного гидролиза групповых веществ олигосахариды, содержащие фукозу или сиаловую кислоту, не найдены если такие олигосахариды и образуются, то, очевидно, в очень незначительных количествах. [c.198]

Фрагменты, выделенные из продуктов частичного щелочного гидролиза групповых веществ крови человека. Выделение и идентификация фрагментов [c.202]

Структура углеводных цепей групповых веществ крови изучалась иммунологическими методами для определения изменения серологической активности при кислотном гидролизе или обработке специфическими ферментами. Были определены терминальные углеводные остатки, ответственные за иммунологическую специфичность. С помощью щелочной деградации показано, что оли- [c.272]

Аминосахара, входящие в состав природных биополимеров, как правило, М-ацетилированы. Частичный кислотный гидролиз таких веществ осложняется протекающим одновременно дезацетилированием аминогрупп и деструкцией аминосахаров и по этой причине для частичного расщепления используется реже, чем в случае полисахаридов, содержащих уроновые кислоты. Тем не менее, с помощью этого метода получены важные сведения о строении таких сложных объектов, содержащих аминосахара, как хондроитинсульфат С или групповые вещества крови . [c.508]

Соединение, указанное в названии раздела, было обнаружено в продуктах частичного кислотного гидролиза олигосахаридов молока [14] и групповых веществ крови [15]. Полученное синтетическим путем соединение идентично природному продукту [12]. [c.359]

Молекулы полистиролсульфокислоты окружены водородными ионами в высокой концентрации, в результате чего на ранних стадиях гидролиза отщепление небольшой части N-ацетильных групп приводит к образованию основных полисахаридов, которые притягиваются областью высокой кислотности. Нейтральные фрагменты, отщепляющиеся при гидролизе, движутся из области высокой кислотности в основную часть раствора с более низкой средней кислотностью. Более того, так как полистиролсульфокислота не проходит через мембраны, реакцию можно проводить в мешке для диализа при этом происходит быстрое удаление отщепившихся фрагментов до их дальнейшего гидролиза и до минимума сводится образование случайных продуктов реверсии под действием кислоты. К сожалению, резкое увеличение выхода олигосахаридов при использовании полистиролсульфокислоты относится прежде всего к высшим олигосахаридам, таким, как тетрасахариды, и к более крупным фрагментам [199]. Возможности этого метода для исследования фрагментов, отщепляющихся от групповых веществ крови, еще не изучены полностью, так как разделение смесей высших олигосахаридов с помощью существующих в настоящее время методов весьма затруднительно. [c.200]

Полный гидролиз групповых веществ крови показывает, что в их состав входит около 80—85% углеводов (галактоза, фукоза, N-ацетилглюкозамин и N-ацетилгалактозамин) и около 15—20% аминокислот, из которых пролин, треонин и серин составляют более половины. В некоторых образцах групповых веществ, в частности в групповых веществах из жидкости кисты, содержатся также N-ацетилнейраминовая кислота, которая, очевидно, в этом случае заменяет часть остатков фукозы. Групповые вещества различного типа А, В, Н я т. д.) очень мало отличаются друг от друга по составу, хотя некоторые детали все же можно отметить так, например, в групповом веществе Le содержание фукозы заметно понижено. В настоящее время установлено, что специфичность групповых веществ зависит от находящихся на периферии молекулы олигосахаридных цепей, которые являются иммунологическими детерминантами (см. ниже). Однако в целом структура групповых веществ, несмотря на значительное число исследований, остается неясной. При действии разбавленных кислот и оснований (щелочь, сода, гидроксиламин) групповые вещества отщепляют значительную часть углеводов Пептидная часть биополимера, напротив, отличается стойкостью и только в незначительной степени распадается под действием папаина и фицина . Эти данные позволяют отнести групповые вещества к гликопептидам типа III, в которых центральная пептидная цепь окружена присоединенными к ней олигосахаридными цепями , что было экспериментально подтверждено в самое последнее время полукинетическим методом исследования (см. стр. 569). При изучении хода гидролиза группового вещества А разбавленными кислотами и щелочами оказалось, что отщепляются лишь мелкие углеводные фрагменты, в то время как все аминокислоты остаются в высокомолекулярной части. Лишь в жестких условиях гидролиза, когда распаду подвергаются и пептидные связи, а также при избирательной деструкции пептидных связей высокомолекулярный фрагмент начинает дробиться и в гидролизате появляются аминокислоты. Подобная картина гидролиза может наблюдаться только в том случае, если пептидная часть составляет основу гликопротеина (тип III). [c.581]

Описанные до сих пор олигосахариды были получены из продуктов гидролиза групповых веществ крови с применением в качестве катализатора минеральной кислоты. Обработка групповых веществ таким способом неизбежно приводит к тому, что большая часть полисахаридной компоненты распадается до моносахаридов, и выход олигосахаридов, которые можно было бы разделить и идентифицировать, уменьшается. Так, для получения нескольких миллиграммов олигосахаридов необходимо обработать несколько граммов группового вещества. Кроме того, при частичном кислотном гидролизе полисахаридов, содержащих остатки N-ацетилгексозамина, наряду с разрывом гликозидных связей происходит N-деацетилирование гексозаминов. Для предотвращения этого явления можно применить частичный ацетолиз [197, 198], однако при последующем О-деацетилировании ацетолизата может происходить экстенсивный распад олигосахаридов. Применение водорастворимой, недиализуемой полистиролсульфокислоты в качестве катализатора для контролируемого расщепления групповых веществ повышает выход олигосахаридов и уменьшает степень N-деацетилирования продуктов гидролиза [199—201]. [c.200]

ИЗ продуктов щелочного гидролиза групповых веществ крови представляет аначительно большие трудности, чем выделение фрагментов из продуктов кислотного гидролиза, из-за сложных превращений, которые претерпевают сахара под влиянием щелочи [210]. [c.203]

Частичный кислотный гидролиз, проводимый обычно разбавленными минеральными кислотами на холоду или при нагревании, приводит к разрыву гликозидных связей и отщеплению углеводных фрагментов пептидные цепи в этих условиях, как правило, устойчивы. Этим путем трудно получить мелкие гликопептиды, содержащие узловую гликопептидную связь, однако метод имеет важное значение для получения олигосахаридных фрагментов гликопротеинов. Кислотный гидролиз сыграл важную роль при изучении групповых веществ крови Этот метод не специфичен, хотя в отдельных случаях удается осуществить преимущественный разрыв какой-либо из связей, например отщепление фукозных остатков, связанных более лабильной гликозидной связью . [c.572]

Детальнее всего исследован вопрос о концевых группировках групповых веществ крови, для которых они являются иммунологическими детерминантами. Эти сведения получены при изучении кислотного и ферментативного гидролиза, а также иммунохимическими методами. При мягком кислотном гидролизе отщепляются фукоза и нейраминовая кисло-тa (если она содержится в биополимере), что доказывает их концевое положение. В несколько более жестких условиях гидролиза а также при гидролизе на сульфополистирольных мoлax отщепляется смесь других MOHO-, ди- и трисахаридов, набор которых оказывается различным для групповых веществ различной специфичности и позволяет сделать заключение о природе иммунологических детерминантов. [c.582]

Дезацетилирование остатков М-ацетилпроизводных аминосахаров, необходимое, как упоминалось, для повышения стойкости к гидролизу соответствующих гликозидных связей, проводится различными методами действием твердого КОН при 170-190° С (например, при исследовании хитина) водного раствора щелочей гидразина (Ы-дезаце-тилирование мукополисахаридов, групповых веществ крови). [c.82]

Приведенные ниже способы гидролиза группового вещества А крови человека (см. стр. 336), предложенные Морганом и сотр. [21], демонстрируют, какие условия применяются для проведения гидролиза многих гексозамипсодержащих полисахаридов. [c.447]

Однако, когда те же исследователи провели гидролиз группоспецифических веществ крови при очень большом разбавлении (10 л 6 н. соляной кислоты на 1 г вещества), были получены гораздо более удовлетворительные результаты выхода общего азота [43], поэтому можно предположить, что степень расщепления аминокислот значительно понизилась. Суммарный азот гексозаминов, сиаловых кислот и аминокислот (вычисленный исходя из предположения, что пептидная часть молекулы содержит 16% азота) соответствовал 95—105 % общего азота (по Кьельдалю) групповых веществ крови. [c.134]

Частичный кислотный гидролиз растворимой полистиролсульфокислотой был применен для частичного расщепления группового вещества крови Н человека [222]. При этом был получен трисахарид 0-а-ь-фукозил-(1 2)-0- 3-о-галактозил-(1 -> 3)-К-ацетил-в-глюкозамин, который нельзя получить другим путем — частичным гидролизом минеральной кислотой или щелочным гидролизом. [c.266]

Карбогидразы могут быть эндогликозидазами, отщепляющими олигосахариды от углеводных цепей, и экзогликозидазами, которые отщепляют моносахариды от терминальных нередуцирующих концов цепей. Кроме того, имеются другие ферменты, например оксидазы, дезацетилазы и т. д., которые осуществляют различные превращения индивидуальных сахаров. Применение ферментов для определения строения групповых веществ крови позволяет проводить исследование в мягких условиях (температура, pH) и благодаря высокой специфичности ферментов облегчает получение строго определенных фрагментов лабильных макромолекул по сравнению с кислотным гидролизом. Трудность заключается в том, что механизм действия многих ферментов, нарушающих серологическую специфичность групповых веществ, пока еще не выяснен. Кроме того, не все ферменты действуют ira групповые вещества, даже если в составе последних находится группировка, которая в обычных условиях является специфическим субстратом для фермента. Тем не менее были получены важные данные о структуре участков групповых веществ, связанных с их серологической активностью при использовании ферментов микробов, специфически разрушающих тот или иной тип группового вещества. Общие представления о структуре макромолекул могут быть получены при использовании хорошо известных протеолитических ферментов. [c.189]

Пейнтер и сотр. [134] сравнили строение дисахаридов, полученных из групповых веществ крови человека А, В, Ни Le частичным кислотными гидролизом с применением полистиролсульфокислоты в качестве катали- [c.200]

Высокая степень иммунологической специфичности молекул групповых веществ обусловлена генетическим контролем их биосинтеза. Все имеющиеся данные свидетельствуют о том, что специфичность групповых веществ определяется последовательностью сахаров на нередуцирующих концах углеводных цепей. Таким образом, групповые вещества крови — великолепный объект не только для изучения взаимосвязи между структурой углевода и иммунологической специфичностью, но и для выяснения путей, по которым идет образование этих структур под влиянием генов. Иммунологические свойства групповых веществ и их зависимость от структуры изучаются с помощью специальных методов, таких, как торможение реакции гемагглютинации и преципитации простыми сахарами и торможение активности ферментов, участвующих в деградации групповых веществ. Эти методы позволили получить данные относительно природы сахаров, играющих главную роль в специфичности, за несколько лет до их прямого выделения, а также помогли найти подходы к задаче получения фрагментов с различной серологической специфичностью. С помощью непрямых методов было убедительно показано, что a-N-ацетил-в-галактозаминоильный и сс-в-галактозильный остатки определяют соответственно А- и В-специфичности, а а-ь-фукозиль-ные остатки — Н- и Ье -специфичности. Эти данные были подтверждены при установлении строения активных фрагментов, выделенных из продуктов частичного кислотного гидролиза групповых веществ. Выяснение строения многих активных и неактивных фрагментов позволило предположить строение участков углеводных цепей, ответственных за серологическую специфичность А-, В-, Н- и Ье -веществ. [c.212]