Монослои микроскопия

Эффективность заражения культур клеток возрастает при использовании принудительной адсорбции. Для этого после нанесения исследуемого материала на монослой клеток культуры центрифугируют при 1000—1500 об/мин 20 — 30 мин. Кроме того, рекомендуется использование культур клеток, предварительно облученных или обработанных цитостатиками. После 24 — 48 ч культивирования монослои клеток для обнаружения и типирования возбудителя окрашивают по Романовскому—Гимзе и люминесцирующими антителами (РИФ). При микроскопии обнаруживают цитоплазматические включения возбудителя в виде образований округлой формы, дающие характерное свечение в ультрафиолете. [c.249]

После заражения культуры ткани вирусом он размножается внутри инфицированных клеток и распространяется на другие. Инфицированная клетка подвергается морфологическим и биохимическим изменениям и погибает. Этот процесс разрушения клеток в культуре известен как цитопатический эффект (ЦПЭ). Распространение вирусов от клетки к клетке может быть замедлено путем добавления слоя агары, в результате чего ЦПЭ будет ограничен небольшими областями, различимыми под микроскопом в виде так называемых бляшек в монослое клеток. Каждая бляшка обычно указывает иа отдельную инфицированную клетку, что можно связывать с отдельной инфицирующей вирусной единицей. [c.278]

Четвертый класс эмульгирующих агентов составляют тонкоиз-мельченные нерастворимые порошки. Под микроскопом можно увидеть, что частицы образуют монослой, который обволакивает каплю. Условия для получения таких оболочек очень строгие и определяются химической природой частиц, а не их химическим составом. [c.76]

Другой вариант этого метода был использован Хауэллом 2 для оценки площади поверхности целлюлозы, доступной для адсорбции окрашенной соли, как, например, хлористого кобальта. Фильтровальная бумага пропитывается растворами различной концентрации и высушивается. Тогда количество соли на всей поверхности известно из объёма впитанного бумагой раствора. При наблюдении спектра поглощения окрашенной таким путём целлюлозы оказывается, что для первых порций соли интенсивность окраски растёт почти пропорционально количеству осаждённой соли, а затем, начиная с некоторого критического количества соли, увеличивается гораздо медленнее. Если предположить, что это критическое количество соответствует монослою, то оказывается, что площадь этого монослоя в 85 раз превышает кажущуюся площадь, оценённую измерениями под микроскопом. [c.330]

Из пробы порошка готовят препарат - монослой частиц на подложке, полученный диспергированием порошка в дисперсионной жидкости. Для просмотра под оптическим микроскопом препарат готовят следующим образом пробу для испытаний массой 2-7 г тщательно перемешивают на стеклянной плитке, рассыпают полосой длиной 7-8 см и разделяют ее на 7 или 8 приблизительно равных частей. Четные части отбрасывают, а нечетные смешивают и повторно сокращают таким же образом. Операцию повторяют до получения пробы массой 0,5-1 г. Затем переносят на кончике стеклянной палочки небольшое количество порошка на предметное стекло, добавляют 1-2 капли дисперсионной жидкости, распределяют равномерно смесь стеклянной палочкой по стеклу, накладывают покровное стекло и осторожно давят на него во избежание выхода больших частиц за пределы стекла. Избыток жидкости удаляют промокательной бумагой. [c.49]

Изучение ЦПД вирусов. Для исследования клеток пробирку помещают на предметный столик микроскопа так, чтобы монослой находился сверху. Местоположение монослоя клеток в пробирке определяют по черте, предварительно проведенной карандашом на противоположной стороне. Морфологические изменения клеток выявляют при микроскопическом исследовании пробирки с культурой с помощью объектива 8 при опущенном конденсоре и прикрытой диафрагме. При сравнении клеточного монослоя, инфицированного вирусом, с незараженными клетками в контрольной пробирке отмечают полное или островковое разрушение пласта клеток или другие изменения, которые характеризуют ЦПД вируса. [c.61]

Примерно через 24 ч после заражения клетки, растущие на покровных стеклах, дважды промывают PBS. Монослой подсушивают на воздухе 10 мин и фиксируют 10 мин смесью метанол ацетон (3 7, объем на объем) при —20 °С. Подсушенные после фиксации стекла можно сразу же исследовать под микроскопом либо хранить при —20°С в течение нескольких недель. [c.243]

На первый взгляд, подобная схема неприменима к цитохромоксидазе, так как показано, что редокс-центры этого фермента располагаются настолько близко друг к другу и к внешней поверхности мембраны, что электрон может быть перенесен на расстояние, не превышающее половины толщины мембраны (см. рис. 32, Б). Однако не исключено, что щель между доменами Mi и Мг, видная под электронным микроскопом (см. рис. 32, А), достаточно глубоко проникает в толщу мембраны, чтобы пересечь внутренний липидный монослой. В этом случае край гема аз мог бы оказаться в контакте с водной фазой матрикса. [c.93]

В катализаторах на носителях необходимо следить аа структуроД слоя активного компонента, покрывающего носитель. Так, Шехтер, Рогинский и Исаев [43] показали съемкой в электронном микроскопе, что в платино-асбестовом катализаторе платина находится на асбесте в виде сферолитов различной величины. Адлер и Кивней [441 нашли для платино-глиноземного катализатора, что в зависимости от метода нанесения платина различным образом располагается на окиси алюминия, образуя монослой при пропитке и сферические дискретные частицы при соосаждении. В общем, дисперсность активного компонента в нанесенных катализаторах может варьироваться в достаточно широких пределах и тем самым определять свойства катализатора. Поэтому для таких катализаторов нужно иметь [c.197]

Выделение риккетсий на культуре ткани. Клинический материал в объеме 0,5 мл смешивают с таким же количеством среды для культуры ткани и сразу же вносят в ячейки специальных планшетов или контейнеры, где предварительно выраш,ивают монослой соответствуюш,ей культуры клеток. Планшет центрифугируют в течение 1 ч при 700 g, после чего инокулюм удаляют, тщательно промывают ячейки с монослоем фосфатным буфером, вносят в них среду МЕМ с 10 % телячьей сыворотки крови и инкубируют при 34 °С в атмосфере 5 % СОз. Через 48 и 72 ч культуральную жидкость сливают, монослой промывают, фиксируют и окрашивают соответствующими люминесцирующими сыворотками (прямая РИФ) для обнаружения возбудителя в клетках монослоя. При люминесцентной микроскопии обнаружение четырех и более характерно светящихся микроорганизмов расценивается как положительный результат. Идентификацию выделенных риккетсий проводят также методом ПЦР с амплификацией генов, специфичных для риккетсий (например, гена цит-ратсинтазы, белка 17 кДа, ОтрВ — для определения родовой принадлежности, белка ОтрЛ — для выявления риккетсий сыпного тифа). [c.236]

Обращение экспериментально измеренных индикатрис рассеяния модельных систем (табл. 4.2) осуществляли по методу статистической регуляризации со значениями ядра i (p, ), рассчитанными для относительных показателей преломления 1,20 1,15 и 1,09. Полученные результаты сопоставляли с данными микроскопического анализа модельных систем. Для анализа частиц размером менее 1 мкм использовали электронный микроскоп. Исследуемый образец тщательно перемецшвали и каплю суспензии наносили на подготовленную заранее пленку — подложку. Капля растекалась по поверхности пленки и после испарения жидкости на подложке оставался монослой частиц, который исследовали под микроскопом УБМ-ЮОК. Оценку размеров частиц проводили по микрофотографиям, полученным для различных полей зрения с увеличением 3000—12 ООО. Число измеренных частиц для каждого объекта составляло не менее 500. [c.103]

В НИФХИ им. Карпова разработана методика приготовления представительных препаратов пыли для электронного микроскопа с применением ультратонкого волокна ФП [107]. Для качественного анализа пыли на сетку-носитель патрончика ЭМ наносится ультра-тонкое волокно ФП. Через патрончик просасывается запыленный воздух, и затем патрончик устанавливается в колонну микроскопа. Для количественного анализа газ просасывается через набор последовательно расположенных сеток с нанесенным на их поверхность волокном. При расходе отбираемого воздуха не свыше 5 m Imuh пыль из воздуха улавливается практически полностью. Монослой волокон с отобранной пылью отделяется от фильтра с помощью свежей коллодиевой пленки. Волокна растворяются в парах амилацетата, а частицы переносятся на пленку-подложку. [c.224]

Наиболее убедительно это подтверждают данные автоионной микроскопии. При исследовании кристаллов углерода, 20 металлов (вольфрам, молибден, ниобий, тантал платина, родий, иридий, золото, железо, никель, кобальт, лантан и др.), а также их сплавов, карбидов и боридов методом автоионной микроскопии обнаружено, что при температуре, составляющей 1/2—2/3 от температуры плавления, приповерхностный монослой кристаллов имеет упаковку, близкую к нормальной упаковке в их решетке [25—28]. Периодичность плотноунакованного слоя нарушается довольно редко вакансиями и адсорбированными атомами, удерживаемыми в непосредственной близости от этого монослоя и способными перемещаться вдоль поверхности. При изучении микрокристаллов перечисленных металлов были выявлены плоские грани размером —10 см, разделенные четкими ребрами (рис. 4.4), причем концентрации вакансий и адсорбированных нримесей на гранях разных типов не одинаковы [28, 29]. [c.62]

Типичным примером толстых структурно-несовершенных пленок являются соединения галогенидов на ртути, серебре и меди. Последние работы по изучению таких пленок и анодных процессов, приводящих к их образованию, показали значение методов дифракции рентгеновских лучей и электронов и оптической и электронной микроскопии для развития электрохимических исследований. Это обстоятельство подчеркивали Терек и Уинн-Джонс [178]. Так, Терек [179] показал, что каломельные пленки, образующиеся на поверхности ртути при анодной поляризации в растворе соляной кислоты, состоят из тетрагональных кристаллов, ориентированных плоскостью (ПО) параллельно подложке, причем растущие кристаллы двойникуются по плоскости (112) и показывают вращательное скольжение по плоскости (110). Возможно, что ориентация возникает благодаря очень хорошему совпадению плоскости каломели (110) с плотноупакованной, в первом приближении, поверхностью ртути. Наоборот, анодно-образующиеся пленки моноклинного сульфата одновалентной ртути состоят из беспорядочно ориентированных кристаллов. Боулт и Терек [180] показали, что бромид одновалентной ртути, также тетрагональный, образуется предпочтительно в той же самой ориентации, что и каломель, однако на ртути в растворе подида происходит образование смешанных, рыхлых и беспорядочно ориентированных отложений. С помощью электронного микроскопа они обнаружили также, что пленки хлорида и бромида одновалентной ртути состоят из пористых скелетных кристаллов. Они предполагают, что сначала на поверхности образуется двумерный монослой галогенида затем, путем переноса через этот слой или его пробоя, на некоторых участках происходит анодное растворение ртути до Нй +д , а на остальной поверхности раздела пленка/раствор осаждается каломель, причем катионы покидают ртуть у основания пор растущей пленки. Эта простая теория объясняет наличие пор. Однако трудно понять, каким образом происходит существенный перенос катионов через раствор, содержащий осаждающие анионы. [c.329]

AgBr-желатинной эмульсии типов илфорд Q2 и ORWO UV2 с помощью микротома и обычной электронной микроскопии. Они установили, что эмульсия Q2 содержит монослой плотно-упакованных зерен AgBr, имеющих почти сферическую форму и максимальный размер 0,9 мкм. Как показано на рис. 4.1, эти зерна покрыты пористым слоем желатины толщиной 200—-400 А, а общая толщина слоя эмульсии колеблется в пределах 2—3 мкм. [c.111]

Клеточное строение растительных тканей открыто английским физиком Гуком, который в 1665 г. зарисовал напоминающую пчелиные соты сетчатую структуру ткани коры пробкового дерева. Нидерландский натуралист Левенгук (1628—1723 гг.), которому часто приписывают изобретение микроскопа, впервые наблюдал под микроскопом эритроциты, инфузории и сперматозоиды. В 1848 г. Дюбуа-Реймон высказал мысль, что поверхность клетки имеет общие свойства с электродом в гальванической ячейке, а Оствальд, Нернст и Бернштейн в конце XIX в. предположили, что клетки окружены полупроницаемой мембраной со специфическими электрическими свойствами. Это утверждение оставалось лишь смелой гипотезой до 1925 г., когда Гортер и Грендел из липидов эритроцитов разного происхождения сформировали монослой на границе раздела вода — воздух. Оказалось, что в монослоях липиды занимают площадь, примерно вдвое большую общей поверхности клеток. Это указывало на то, что внешняя оболочка клеток образована бимолекулярным слоем липидов, в первую очередь фосфолипидов — эфиров глицерина, жирных кислот и фосфорной кислоты. Позднее было установлено, что вообще все клетки животных окружены тонкой мембраной, состоящей всего лишь из двух слоев молекул. Электронно-микроскопические исследования окончательно подтвердили этот вывод. Строение клеток растений оказалось более сложным. Их клетки, помимо клеточной мембраны, непосредственно окружа- [c.179]

Структура пленок, исследовавшаяся методом электронной микроскопии, сильно отличается от описанной выше структуры мономолекулярных слоев смесей поливинилацетата и гексатриаконтановой кислоты. Поверхность пленок представляет собой множество островков разнообразной формы. Отсутствуют фибриллярные образования, отчетливо наблюдавшиеся в случае смеси поливинилацетат — гексатриаконтановая кислота. По-видимому, геометрические формы макромолекул поливинилбензоата в монослое далеки от фибриллярных. Такое предположение подтверждается плохой сжимаемостью и высоким значением давления слипания его монослоев [48]. [c.539]

Разработан метод исследования черных сферических пле пок, стабилизованных нерастворимыми ПАВ [148]. Капнлля иую трубку устанавливают в ванночку с раствором электролита Па поверхность жидкости в ванночке наносят монослой нерас-1воримого ПАВ, концентрацию которого и поверхностное давле те в монослое можно изменять и точно контролировать. Сфе )ическую пенную пленку, выдуваемую из капилляра, наблюдают сверху под микроскопом в отраженном свете. [c.59]

В работе [149] авторы считали, что диффузия газа чер монослой происходит в результате возникновения микроскопии кнх пустот между молекулами ПАВ. Такая схема была на га моделью нергетического барьера. Однахо по же было ус ювчено [321], что эта модель не подтверждается. [c.145]

Рис. 8.2. Заражение клеток первичной культуры почки мыши вирусом полиомы. К — контрольная культура через 1 день после ложного заражения. 1 —культура через 1 день после заражения. Ядра клеток немного увеличены и более четко очерчены 2 — культура через 2 дня после заражения. Ядра, содержащие вирусные частицы, имеют зернистую внутреннюю структуру (отмечены стрелками). В центре видны распавшиеся ядра 3 — культура через 3 дня после заражения. Клеточный монослой разрушен, ядра увеличены и имеют зернистую структуру. Микрофотографии 1 и 2 сделаны с помощью инвертированного микроскопа Цейс 1СМ 405 в лаборатории д-ра Лэммли. Фазовый контраст. 188Х

Через 2—3 нед с момента заражения под микроскопом удается обнаружить небольшие очаги инфицированных клеток. Незадолго до того, как разрушится монослой неинфицирован-ных клеток, культуры фиксируют в забуференном формалине, осторожно удаляют агарозу и окрашивают 1%-ным генциан-виолетом. Небольшие очаги инфекции (или бляшки) можно подсчитать под стереомикроскопом. Вместо генциан-виолета культуры можно окрашивать 1%-ным нейтральным красным. Кроме того, нам удалось получить бляшки MV, используя КМЦ (0,8% в среде с 2% ЭТС) вместо агарозы. [c.290]

Вы готовите для опыта два набора меченых липосом у одних меченый липид находится только в наружном монослое мембраны, у других он равномерно распределен между внутренним и наружным монослоями. Вы проводите слияние липосом двух типов с эпителием, в котором примерно половина клеток инфицирована вирусом. Меняя глубину резкости микроскопа, вы определяете флуоресценцию в апикальной и в базолатеральной поверхностях. Контролем служит вариант со средой без кальция (условия разрушения плотных контактов). Результаты опыта представлены на рис. 14-3. [c.261]

Обычно авторадиограммы изучают с помощью обычного микроскопа. Люсьен Каро и Роберт ван Тюберген разработали метод, позволяющий использовать электронный микроскоп с высоким разрешением. Для этого необходимо применять очень тонкий слой эмульсии, который бы не препятствовал наблюдению образца в электронный микроскоп. Тонкий срез ткани или клетку, заделанную в пластмассу и адсорбированную на решетке для электронного микроскопа, погружали в эмульсию, разбавленную настолько, чтобы наносился только монослой кристаллов галогенида серебра. При этом использовали очень мелкие (<0,1 мкм) кристаллы. После экспонирования и проявления срез ткани окрашивали уранилацетатом и изучали с помощью электронного микроскопа (рис. 6-12). Такой метод позволяет получить разрешение до 0,1 мкм. До сих пор метод использовали редко, но он явно заслуживает большего внимания. [c.149]

Метод состоит в следующем. Питательную среду сливают, а клеточный монослой заливают 10%-ным раствором дезоксихолата натрия в насыщенном растворе мочевины в воде (1 г мочевины на 1 мл бидистиллированной воды при 22 ) примерно 1—2 мл на 3X10 клеток. Клетки обрабатывают 30—60 минут при комнатной температуре. Лизис контролируют под микроскопом. Клетки разрушаются в течение нескольких минут, а лизис наступает после разбавления смеси до 5—10% конечной концентрации лизата, Разведение можно производить исходной культуральной жидкостью, стерильной водой или физиологическим раствором, охлажденными до 4 В этих условиях происходит полный цитолизис Центрифугирование лизата при 10 ООО об/мин не ведет к образованию осадка, характерного для обломков клеток. Наряду с этим происходит гидролиз клеточных белков и нуклеиновых кислот, так как ну-клеазы и протеазы в данных условиях резистентны к мочевине [483]. Низкомолекулярные вещества из лизата удаляют при помощи диализа в течение суток против бидистиллированной воды Полного удаления мочевины можно достичь с помощью уреазы, [c.39]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология