Фосфатазы неспецифические

Определяют зависимость скорости фосфатазного расщепления при pH 5,0 от времени инкубации. Исследуют скорость фосфатазного расщепления глюкозо-6-фосфата при разных значениях водородного показателя и находят оптимум pH для неспецифической кислой фосфатазы, инкубируя пробы в течение 10 мин. [c.65]

Кроме того, эти авторы обнаружили изменения в количестве или активности некоторых печеночных ферментов. Количественных определений не производилось сдвиги регистрировались по интенсивности специфических гистохимических цветных реакций на эти ферменты, с помощью обычных методов связывания азокрасителей. Активности кислой фосфатазы, неспецифической эстера-зы и сукциндегидразы в паренхиматозных клетках печени были значительно снижены, тогда как щелочная фос-фатаза в купферовских и тучных клетках была повышена. [c.525]

Неспецифические щелочные фосфатазы Неспецифические кислые фосфатазы [c.635]

По аналогии с известными гистидин-сериновыми ферментами кислотно-основных процессов обычно предполагают, что в неспецифических фосфатазах при образовании промежуточного продукта осуществляется фосфорилирование фермента по серину с участием гистидина, действующего по механизму обобщенного основного катализа, что и объясняет отщепление фосфорильной, а не фосфатной группы. Для фосфатаз, имеющих оптимум pH в щелочной области (щелочная фосфатаза), необходимы соответствующие количества ионов двухвалентных металлов в качестве кофакторов для компенсации зарядов на фосфатной группировке и облегчения нуклеофильной атаки гидроксильной группой серина на фосфор, катализируемое основанием (гистидином). Для кислой же фосфатазы, имеющей оптимум pH в районе пяти добавления ионов двухвалентных металлов не требуется, поскольку фосфорные эфиры при этих значениях pH существуют в моно-анионной форме, а следовательно, нуклеофильная атака на фосфор не затруднена. [c.172]

Облучение животных ионизирующей радиацией вызывает не только изменения активности многих ферментов, регулирующих процессы клеточного метаболизма, но и относительного содержания изоферментов. Так, в ряде работ показано, что у-облучение влияет на активность изоферментов лактатдегидрогеназы, кислой фосфатазы, неспецифической эстеразы. Причем при более низких дозах облучения величина изменений в относительном содержании изоформ может быть больше, чем при высоких. При анализе относительного содержания фракций изоферментов вышеуказанных белков в различные сроки после у-облучения в дозе [c.147]

Применение. В качестве диазосоставляющей для выявления ЗН-групп в белках, кислой 1.1] и щелочной фосфатаз и неспецифических эстераз, [2, 3] методом одновременного азосочетания [8, 9].. [c.116]

Применение. В гистохимии ферментов в качестве субстрата для выявления неспецифических щелочных фосфатаз в срезах фиксированной ткани [Пирс, 356]. [c.220]

НЕСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ЩЕЛОЧНЫЕ ФОСФАТАЗЫ (КФ 3.1.3.1) [c.177]

З.1.2. НЕСПЕЦИФИЧЕСКАЯ КИСЛАЯ ФОСФАТАЗА (КФ 3.1.3.2) [c.180]

Биохимические и электронно-микроскопические исследования показали, что неспецифическая кислая фосфатаза, так же как и другие кислые гидролазы, локализуется главным образом в лизосомах. Поэтому она считается маркерным ферментом для лизосом (табл. 37). Поскольку лизосомы связаны своим происхождением с комплексе Гольджи, то, как и следовало ожидать, активность этого фермента выявляется также на внутренней мембране этого комплекса и цистерн гладкого эндоплазматического ретикулума. [c.181]

По вопросу о выявлении кислой фосфатазы в клеточном ядре особенно с помощью методов с солями металлов ведется живая полемика. Несомненно, что концентрация ионов свинца, используемого в качестве осаждающего реагента, в значительной мере влияет на результаты реакции. Неспецифическое осаждение ионов свинца часто бывает следствием неправильного подбора концентрации ионов свинца в инкубационной среде. В связи с выявлением кислой фосфатазы в клеточном ядре следует отметить данные, предполагающие здесь наличие особого типа фосфатазы, отличающегося от кислой фосфатазы цитоплазмы. [c.181]

Отмечена определенная связь между липофусцином (в частности, его образованием) и лизосомами важную роль при этом играют кислые гидролазы—например, кислая фосфатаза и неспецифическая эстераза (рис. 6). Липофусцин, меланин и гемосидерин накапливаются в остаточных тельцах и вместе с ними идентифицируются. [c.248]

Очищенные препараты рестриктаз необходимы как для их характеристики, так и для использования в качестве аналитических реагентов в различных сферах применения этих ферментов. Выделение рестриктаз, как и любых других ферментов, преследует две цели — получение ферментных препаратов, свободных от нежелательных примесных активностей (функциональная чистота), или получение гомогенных белков (физическая чистота). В случае специфических эндонуклеаз в качестве нежелательных примесей в первую очередь выступают неспецифические нуклеазы и фосфатазы, имеющиеся во всех клетках, а иногда и рестриктазы, присутствующие наряду с целевым ферментом в биомассе некоторых продуцентов. [c.141]

Аналогичным примером использования АТР может служить его участие в фотосинтетическом восстановлении двуокиси углерода, в процессе которого АТР фосфорилирует рибулоэо-5-монофосфат до рибуло-зодифосфата, после чего фосфатные группы удаляются в результате дей- ствия фосфатазы на фруктозодифосфат и седогептулозодифосфат (разд. Г, 2). Фосфатазы, участвующие в биосинтетических реакциях, характеризуются обычно высокой степенью субстратной специфичности, чем существенно отличаются ог неспецифических фосфатаз, относящихся к ферментам, участвующим в процессах переваривания пищи (гл. 7, разд. Д, 1). [c.464]

В отношении дальнейшей судьбы мононуклеотидов в кишечнике существует два предположения. Во-первых, мононуклеотиды расщепляются под действием неспецифических фосфатаз (кислой и щелочной), которые гидролизуют фосфоэфирную связь ( нуклеотидазное действие) с образованием нуклеозидов и фосфорной кислоты, и в таком виде всасываются. Второе предположение заключается в том, что мононуклеотиды всасываются и распад их осуществляется в клетках слизистой оболочки кишечника. Имеются также доказательства существования в стенке кишечника нуклеотидаз, катализирующих гидролитический распад мононуклеотидов. Дальнейший распад образовавшихся нуклеозидов осуществляется внутри клеток слизистой преимущественно фосфорилитическим, а не гидролитическим путем. [c.424]

Применение, В качестве диазосоставляющей для выявления SH-rpynn в белках [Пирс, 727], кислой фосфатазы [1, 2], неспецифических эстераз [3], 1М-ацетил- 5-глюкозаминидазы [4] и лейцинаминопептидазы [5, 6] методом одновременного азосочетания. [c.115]

Применение. В гистологии ферментов в качестве диазосоставляющей для выявления неспецифических эстераз [8], щелочной фосфатазы [Берстон, 213],-jj-глюкуронидазы и фосфатазы лейкоцитов в мазках крови [Йирс, 800]. [c.118]

Применение. В гистохимии ферментов в качестве диазосоставляющей дая выявления неспецифической эстеразы, щелочной и кислой фосфатазы [Пи с, 393—394J, р-галактозидазы [Пирс, 447], р-глюкуронидазы [Пирс, 829], ле -цинаминопептидазы [Пирс, 521], арилсульфатазы [Пирс, 527, 848], а также дЛя выявления SH-rpynn и проведения фенилгидразин-формазановой реакция а альдегиды [Пирс, 791]. В бумажной хроматографии для окраски флавонов, аминов и фенолов [14]. [c.119]

Применение. В гистохимии в смеси с формалином для фиксации фосфолипидов по Merojiy Бэкера [1], для стабилизации кислой фосфатазы [2, 3] и для выявления норадреналина методом флуоресценции [4, 5]. В гистохимии ферментов для выявления неспецифических фосфомоноэстераз по Гомори Така-матчу [6—9] и аденозинтрифосфатазы по методу Падикула —Германа [10], [c.174]

Этот внутренний ангидрид был выделен из красной водоросли Porphyra perforata J. G. Agardh. Поведение этого соединения при электрофорезе указывает на присутствие в молекуле двух первичных фосфорильных ОН-групи в результате кислотного гидролиза или обработки пирофосфатазой образуется аденозин-3, 5 -дифосфат. При дальнейшем расщеплении дифосфата под действием неспецифической фосфатазы получается смесь аденозин-3 -фосфата [c.224]

Ферменты, которые катализируют гидролиз /производных фосфата, называются фосфатазами [5]. Существует несколько ферментов, роль которых, по-видимому, заключается в образовании ортофосфата из моноэфиров фосфорной кислоты. Они малочувствительны к природе заместителя в фосфате и называются неспецифическими фосфомоноэстеразами. Существуют, однако, заметные различия в диапазонах pH, в которых они работают, и поэтому они делятся на кислые [19] и щелочные [20] фосфатазы, хотя бывают и промежуточные случаи. Другие фосфатазы действуют на определенные субстраты, такие, как глюкозо-б-фосфат [21], фосфосерин [21] и 5 -нуклеотиды [22]. Важным ферментом является неорганическая пирофосфатаза [23], поскольку гидролиз пирофосфата сопряжен со всеми синтетазными реакциями. Некоторые киназы обнаруживают небольщую АТФ-азную активность. Активную АТФ-азу можно выделить из разрущенных митохондрий [9], и она без сомнения участвует в окислительном фосфорилировании, посредством которого обращается гидролитическая реакция. [c.633]

Несмотря на эти трудности, имеющиеся надежные данные позволяют с уверенностью сделать несколько общих выводов о потребности в ионах металлов. Двухзарядные ионы необходимы для всех киназ и синтетаз. Фосфатазы обычно также нуждаются в катионах, хотя известны и исключения, например неспецифическая кислая фосфатаза. Для фосфоглюкомутазы ион Mg + необходим, а для похожей на нее фосфоглицератмутазы нет [24]. Потребность в двухзарядном катионе характерна для нуклеаз механизм действия которых не включает образование на первой стадии циклического нуклеотида [25]. Фосфорилазы, расщепляющие связь С—О, не зависят от двухзарядных ионов, а расщепляющие связь Р—О зависят, примером чему служит фосфоролиз полинуклеотидов. Кроме того, ионы двухвалентных металлов обычно, но не всегда необходимы для ферментов, переносящих фосфат в том случае, если катализируется расщепление связи Р—О. Эти выводы суммированы в табл. 17.2. [c.635]

Широко распространены фосфатазы, катализирующие гидролиз сложных эфиров, состоящих из спиртов и фосфорной кислоты. Среди фосфатаз различают специфически и неспецифически действующие. Специфически действующие фосфатазы катализируют гидролитическое расщепление определенных фосфорных эфиров. Например, фруктозодифосфатаза катализирует отщепление фосфорной кислоты от фруктозодифосфорной кислоты, нуклеотидаза — фосфорной кислоты от нуклеотидов. Неспецифически действующие фосфатазы катализируют отщепление фосфорной кислоты от различных фос([)орных эфиров независимо от химической природы входящих в их состав спиртов. Неспецифические фосфатазы разделяются на так называемые кислые и щелочные . Оптимум действия первых — при pH 4,5— 5,0, вторых — при pH 8,5—9,0. [c.180]

Имеются ли фосфатазы, специфичные для N-ацетилгексозаминов, в настоящее время не выяснено. Вероятно, это объясняется тем, что ранее фосфатазы рЕ ссматривались как примеси, которые необходимо удалять, изучая субстраты и продукты ферментативных реакций. Тем не менее, специфические и неспецифические фосфатазы должны, несомненно, играть важную роль в регуляции клеточного обмена, улавливая продукты реакций и направляя их по тому или иному пути превращений. Только фосфатаза из экстрактов N. rassa, очищенная в 75 раз, обладала специфичностью к в-глюкозамин-6-фосфату. Фермент (КФ 3.1.3.9) имел оптимум pH 6—7,5 и отщеплял фосфат от в-глюкозамин-6-фосфата в 25 раз быстрее, чем от глюкозо-6-фосфата или фруктозо-6-фосфата [42]. [c.276]

Неспецифические кислые фосфатазы гидролизуют фосфомоноэфиры при pH 3,8—6,0. Электрофоретические и хроматографические исследования позволили описать группу кислых фосфомоноэстераз с характерной, хотя иногда и перекрывающейся, субстратной специфичностью. Эти группы принято обозначать римскими цифрами П, 1П и IV. В тканях животных встречается главным образом кислая фосфомоноэстераза II с рН-оптимумом 5,0—5,3. У простейших была описана, кроме того, кислая фосфатаза с рН-оптимумом 3,0—4,0, Мультиферментный характер [c.180]

Для гистохимического выявления неспецифической кислой фосфатазы на светомикроскопическом уровне используются в первую очередь методы с солями свинца, ос- [c.181]

Активность неспецифическ ой кислой фосфатазы проявляется выпадение осадка светло-красного красителя. [c.225]

Конъюгат [антитело — щелочная фосфатаза], содержащийся в избытке, катализирует образование окрашенного продукта прямо пропорционально концентрации фермента, причем эта зависимость, по-видимому, сохраняется и при А405>2 ед., где уже оптическую плотность нельзя надежно измерить. Для расширения концентрационного диапазона (в рамках сохранения линейности) можно попытаться измерять оптическую плотность при длине волны, соответствующей меньшей экстинкции (Saunders et al., 1984). Максимум поглощения для л-нитрофенола соответствует Х=405 нм. При Я,=450 нм экстинкция л-нитро-фенола составляет примерно одну пятую экстинкции в максимуме. Это означает, что, проводя измерения при двух длинах волн — 405 и 450 нм, можно в пять раз поднять допустимый верхний предел концентрации тестируемого компонента. При работе с обычным спектрофотометром это связано с необходимостью постоянного переключения длины волны с 405 на 450 нм для каждого образца. В то же время на фотометре со сменными фильтрами, рассчитанном на несколько длин волн и управляемом микропроцессором, можно делать то же самое в автоматическом режиме. Сравнивая значения поглощения, полученные при двух длинах волн, процессор может выбирать одно из них, более подходящее для расчета концентрации образца. По-стройшая таким образом система обеспечивает высокую чувствительность благодаря измерениям в максимуме и в то же время позволяет одновременно расширить концентрационный диапазон за счет дополнительных измерений при длине волны, соответствующей меньшей экстинкции. Существенно помнить, что чувствительность ферментативного иммунометрического анализа практически полностью определяется удельной ферментативной активностью конъюгата [фермент — антитело]. В связи с этим любое повышение удельной активности конъюгата, не сопровождающееся усилением его неспецифического связывания, будет приводить к повышению чувствительности, т. е. к снижению минимального значения концентрации тестируемого компонента, поддающегося определению данным методом анализа. [c.392]

Для оценки кислороднезависимых механизмов внутриклеточной микробицидности моноцитов используется метод определения содержания лизосом в цитоплазме моноцитов. Содержание лизосом в моноцитах оценивают с помощью их прижизненной окраски люминесцентным красителем — акридиновым оранжевым, который избирательно накапливается в лизосомах, окрашивая их в ярко-красный цвет. С помощью люминесцентной микроскопии окрашенных препаратов оценивают суммарный индекс люминесценции моноцитов, который отражает содержание лизосом в их цитоплазме. Другие варианты оценки содержания лизосом связаны с цитохимическим определением активности внутриклеточных ферментов кислой фосфатазы или неспецифической эстеразы. [c.218]

Основным требованием при использовании рестриктаз в генно-инженерных и других молекулярно-генетических экспериментах является функциональная чистога, а именно, отсутствие примесей неспецифических нуклеаз и фосфатаз. Поэтому, основные усилия при выделении и очистке рестрикционных эндонуклеаз направлены на получение функционально чистых их препаратов. Однако, для структурно-кинетических исследований эндонуклеаз рестрикции требуются относительно больщие количества гомогенных препаратов ферментов. Несмотря на то, что как уже отмечалось, в настоящее время охарактеризовано (и в большинстве случаев выделено) более 1000 рестриктаз, лишь небольшая их часть получена в го(могенном состоянии. [c.66]

Требования к уровню функциональной чистоты препаратов рестриктаз, используемых в опытах по определению их субстратной специфичности, далеко не одинаковы и диктуются заданной глубиной исследования этой характеристики. В случае применения рестриктаз в качестве аналитических реагентов качество препаратов, в зависимости от сферы применения, тоже может варьировать. В опытах по физическому картированию допустимо использование ферментов, содержащих в качестве примесей нелимитированное количество фосфатаз. Уровень присутствия неспецифических нуклеад ограничивается та- [c.141]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология