Трихлоруксусная кислота как осадитель

Выделение белков из клеток растений очень сложно и обычно заключается прежде всего в экстрагировании их изучаемого материала соответствующими растворителями. Как увидим дальше, отдельные группы белков растворимы в различных растворителях, и для их экстракции из растений в качестве растворителей используют воду, растворы солей, спирта, кислот и щелочей. Экстрагированные белки могут быть осаждены из растворов различными реактивами. В качестве осадителей белков используются органические растворители — спирт, ацетон концентрированные растворы минеральных солей, чаще всего растворы сульфата аммония кислоты — трихлоруксусная, фосфорновольфрамовая, пикриновая дубильные вещества, например таннин соли тяжелых металлов — ртути, меди, свинца. После осаждения белки отмывают и высушивают. [c.212]

Возможно и необратимое осаждение белковых веществ. Оно имеет место при действии на белки трихлоруксусной, пикриновой и некоторых других кислот, таннина, тяжелых металлов и других осадителей. При этом получают уже денатурированные белки. Кипячение водных растворов также вызывает свертывание и необратимое осаждение белков. [c.389]

Сложным механизмом денатурирующего действия, включающим как непосредственное воздействие на систему водородных связей, так и блокирование полярных группировок, обладают такие органические вещества, как трихлоруксусная кислота и так называемые алкалоидные осадители (пикриновая кислота, таннин и т. п.). [c.185]

Нелетучие кислоты. В большинстве случаев при анализе пищевых продуктов необходимо избавиться от ряда мешающих определению компонентов, главным образом белков. При анализе водных экстрактов для этих целей используют обработку фосфорно-вольфрамовой кислотой, трихлоруксусной кислотой и другими белковыми осадителями. Для особенно точных определений применяют экстракцию эфиром или перевод кислот в свинцовые или бариевые соли. [c.222]

Определение. К 8 мл 10%-ной трихлоруксусной кислоты (годятся и другие осадители — вольфрамат, кадмий или цинк, см. стр. 123) прибавляют 2 мл крови или сыворотки, перемешивают или центрифугируют. К 5 мл фильтрата (= 1,0 мл крови) в пробирке с чертой при 10 мл прибавляют 2 мл раствора сернокислой меди и 0,5 г порошка Са(ОН)г, перемешивают. Через 30 минут доводят до 10 мл и центрифугируют. Берут 1 мл фильтрата (соответствует 0,1 мл кровн) и к ним в мерной пробирке прибавляют 1 каплю 5%-ной сернокислой меди, 5 мл концентрированной серной кислоты (медленно ), ставят на 5 минут в кипящую водяную баню, охлаждают до 20° и прибавляют 0,05 мл 0,3%-ного раствора р-оксидифенила, осторожно перемешивают и ставят сначала на 30 минут при 30°, а затем на 90 секунд в кипящую водяную баню. Охлаждают, разводят до 10 мл и колориметрируют. Окрашивание фиолетовое . [c.238]

В особых случаях при очистке белков могут быть полезны такие энергичные осадители, как метафосфорная кислота, соли некоторых тяжелых металлов, трихлоруксусная кислота и ряд других. Очевидно, что использование осадителей такого типа, известных как денатурирующие агенты, возможно лишь при очистке белков, особо устойчивых к денатурации, или требует отработки весьма строгих условий, позволяющих защитить белки от денатурации. В то же время возможности использования относительно малых концентраций таких реагентов и большая полнота осаждения привлекают к ним внимание при разработке промышленных схем получения некоторых белков. Так, весьма эффективным и практичным оказался метод первичной очистки бактериальных анатоксинов осаждением мета-фосфорной кислотой в малых концентрациях. Один из вариантов метода выделения богатых лизином гистонов предусматривает их осаждение трихлоруксусной кислотой, причем в этом случае заведомо денатурируется ряд сопутствующих белков. Чрезвычайно высокая устойчивость к денатурации таких энзимов, как, например, аргиназа и гиалуронидаза, позволяет использовать для избирательного осаждения их сульфаты марганца и меди. Наконец, в условиях строгого контроля температуры, pH, а также при быстром и полном удалении осадителя специальными реагентами возможно использование солей свинца, кадмия, меди и ртути даже для фракционирования белков сыворотки. Естественно, однако, что методы этого типа не получили сколько-нибудь широкого распространения применительно к очистке сывороточных белков в силу существования более щадящих и лучше воспроизводимых методов. [c.20]

Осаждение белков различными специфическими оса-дителями является одной из наиболее широко применяющихся операций биохимического анализа, для которой в то же время надежные доказательства немногочисленны. Вероятно, не существует осадителей, полностью отделяющих белки от всех других составных веществ биологической смеси. Многие такие вещества применяются для отделения белков при анализе на некоторые другие составные части смеси. Очевидно, что задачей аналитика является выбрать для белка такой осадитель, который не осаждал бы ничего, кроме белка, или, по крайней мере, не осаждал бы небелковый азот. Было показано, что кислоты, как осадители, удаляют меньше небелкового азота, чем основные реагенты. Наиболее часто применяются трихлоруксусная кислота и реактив Фолина — Ву или их модификации. Из некислотных осадителей наиболее распространены ацетон и спирт. Последние работы со спиртом [196] указывают, что при соответствующем использовании этого вещества можно получить хорошее отделение белков от небелковых веществ. Однако несомненно, что обычные методы введения реактива неудовлетворительны. [c.37]

Метафосфорная кислота привлекала меньшее внимание, чем многие другие кислотные осадители белков. Это может частично объясняться нестабильностью реактива, которая делает неопределенным его точный состав [202]. Необходима дальнейшая работа по изучению влияния метафосфорной кислоты на осаждение небелкового азота ввиду ненадежности более ранних работ. Нейберг и Штраус [203] предложили хлорную кислоту, как лучший реактив по сравнению с трихлоруксусной кислотой. Повидимому, еще не была изучена степень осаждения этим реактивом небелковых азотсодержащих соединений. [c.38]

Реакции на белки. Существует ряд приемов, с помощью которых можно установить наличие в растворах белковых веществ. Так, например, для обнаружения белков широко пользуются способностью их денатурироваться и выпадать в осадок. При нагревании до кипения белки, особенно при слабокислой реакции, свертываются с образованием хлопьев. Выпадают в осадок белки при прибавлении к их растворам солей тяжелых металлов (ртути, меди, серебра), пикриновой, вольфрамовой, фосфорновольфрамовой, фосфорномолибденовой, трихлоруксусной кислот и других так называемы) белковых осадителей. [c.37]

Мукопротеиды — белки, характеризующиеся высоким содержанием углеводов, отличаются по ряду свойств от обычных белков. Они не осаждаются такими осадителями белков как трихлоруксусная кислота и хлорная кислота и не свертываются при кипячении. [c.511]

Белки осаждаются солями тяжелых металлов (Си, РЬ, Нд, иОа, Ре), некоторыми органическими кислотами (трихлоруксусная, сульфосалициловая, пикриновая и др.) и образующими коллоидные растворы кислотами (вольфрамовая, дубильная) и основаниями (гидроокись железа). Эти осадители обычно нельзя использовать для получения чистых белков, так как многие белки при их действии денатурируются. Однако в последнее время было найдено, что если соль тяжелого металла добавлять осторожно и избегать избытка, то можно получить в кристаллической форме соли тяжелых металлов некоторых белков [29]. Из соединений белков с некоторыми тяжелыми металлами, например с цинком, можно получить белки в нативном состоянии [30]. [c.18]

При заполнении проб пробирки ставят в лед. Тканевый экстракт добавляют в пробы 1 и 2 (пробы до инкубации ). После добавления экстракта и перемешивания часть реакционной смеси быстро отбирают для определения глюкозы и молочной кислоты в заранее приготовленные пробирки с соответствующими осадителями белков для определения глюкозы с глюкозооксидазой по 0,5 мл раствора из каждой пробы переносят в пробирки, содержащие 2,5 мл НгО, 2 мл 5%-го раствора сернокислото цинка и 1 мл 0,3 и. раствора NaOH, а для определения молочной кислоты по 2 мл исследуемого раствора переносят в пробирки, содержащие 2 мл 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты или [c.52]

К 0,2 мл исследуемого раствора добавляют равные объемы 20%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, 25%-ного раствора ацетата натрия н стандартного раствора натрий-бортетрафенила (0,5 мг1мл) и центрифугируют Прозрачный центрифугат помещают в кювету фотометра, избыток осадителя титруют раствором бромида цетил-триметиламмония При этом образуется муть малорастворимого цетил-триметиламмоний-бортетрафенила Измерения производят при 400 ммк По мере добавления цетил-триметиламмония оптическая плотность раствора возрастает, титруют из микробюретки до практи чески постоянной оптической плотности. [c.93]

Если определяется растворимый в кислотах или неорганический фосфор в цельной крови или в эритроцитах, то нужно осадить белки без предварительного лакирования кислым осадителем (20%-ная трихлоруксусная кислота), чтобы избегнуть гидролиза органических эфиров фосфорной кислоты. При определении неорганических фосфатов в фильтрате нужно по той же причине избегать нагревания и работать возможно быстро. Поэтому при определении неорганического фосфора в цельной крови или эритроцитах хороший для сыворотки способ Бенедикта менее подходит, чем колориметрический метод Бриггса, не требуюший нагревания. [c.279]

Общие ингибиторы. К ним относятся соли тяжелых металлов (серебра, меди, ртути, свинца, вольфрама), а также трихлоруксусная кислота и танин, которые являются осадителями белков и поэтому подавляют действие всех ферментов. Некоторые ферменты чувствительны к низким концентрациям этих металлов, например р-фруктофура-иозидаза инактивируется насыщенным раствором Ag l. [c.16]

Кислотные осадители белков были тщательно изучены Гиллером и Ван-Сляйком [197] наряду с различными некислотными реактивами. Их результаты показывают, что 2,5%-ная трихлоруксусная кислота в качестве реактива для отделения белков от небелкового азота превосходит все другие вещества. Повйшение ее концентрации усиливает осаждение небелковых соединений. Вольфрамовая и пикриновая кислоты дают более высокие выходы аминного азота. Это позволяет аналитику при желании присоединить азот пептонов и полипептидов к белковому или небелковому азоту. Кроме этого, необходимо показать, что реактив может четко разделить различные продукты белкового распада на любой стадии. Гофман и Рихтер [198] установили, что небелковый азот фильтратов после осаждения трихлоруксусной кислотой изменяется с разбавлением образца и с концентрацией осадителя. Пептидный азот был найден в фильтрате при разбавлении 1 60, [c.37]

В зависимости от осадителя различают и методы анализа. Метод Барнштейна основан на осаждении белков медным купоросом в щёлочной среде. Этот метод применяется как основной при экспертной оценке. Практика показывает, что по этому методу получаются несколько завышенные результаты, так как осаждаются не только белки, но и азот нуклеиновых кислот, азотистых оснований, алкалоидов. При массовых определениях используется менее трудоёмкий метод Плешкова, где осаждение белков проводят трихлоруксусной кислотой (ТХУ). [c.363]

Процесс осаждения белкового азота можно ускорить, используя в качестве осадителя 50%-ю трихлоруксусную кислоту (СС1зС00Н), при этом сильно снижается объём осадка. Метод широко применяется при массовых анализах. [c.363]

Перед окрашиванием белки необходимо фиксировать на носителе путем их денатурации в кислой среде (если они еще не денатурированы). Для фиксации обычно используют либо смесь метанол/уксусная кислота/вода в соотношении 3 1 6, либо-осадитель белка — трихлоруксусную кислоту, либо надхлорнук> кислоту в концентрации 5—10%. За исключением электрофоре- [c.325]

После разрушения клеток чаще всего проводят экстракцию фермента. Из животных и растительных тканей экстрагировать ферменты гораздо легче, чем из микроорганизмов. Их извлекают водой, буферными растворами, растворами нейтральных солей, органическими растворителями (ацетон, алифатические спирты и др.) в смеси с водой в различных соотношениях или безводными (диметилформалгид), иногда разбавленными щелочами, кислыми белковыми осадителями, например трихлоруксусной или пикриновой кислотами. Чаще всего применяют 2—10 объемов растворителя, выбирая pH в соответствии с зоной рН-устойчи-вости и с областью лучшей растворимости, которые являются характерными для каждого белка или даже для определенных групп белков. Проводят экстракцию чаще при охлаждении (2— 5°С), но более длительное время, или 2—3 ч при более высоких температурах (30—45°С). [c.141]

Бесцветные таблички, имеющие слабый горький вкус. Т. пл. 110—112 °С. Легко растворим в воде, спирте и хлороформе, трудно —в эфире. Осаждается из водных растворов тапнином, а также трихлоруксусной и хлорной кислотами. Эти осадки растворимы в избытке осадителя. Антипирин представляет собой однокислотное основание. [c.296]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология