Микросома определение

Определение гранулометрического состава по массе частиц с использованием ситового анаЛиза (сухого и мокрого) 139, 76, 130] является наиболее объективным (погрешность 1—2%) при оценке грубодисперсных систем (с частицами крупнее 40 мкм). Представляют интерес получившие в последнее время применение микросита и воздушно-ситовой просев [39, 103, 1301. Использование микросит позволило несколько расширить границы ситового анализа в область более высокой дисперсности (до 5—10 мкм), [c.221]

Сиаловые кислоты встречаются в составе секретов слюнных желез, слизей, в мембранах, митохондрий, микросом. и, по-видимому, играют определенную роль в процессах проницаемости мембран, [c.205]

Одновременно этим же методом проводилось определение белка в надосадочной жидкости, полученной после осаждения митохондрий. Следует отметить, что в пей, помимо растворимого цитоплазматического белка, содержится также фракция микросом. Поэтому в данном случае мы лишь условно называем эту фракцию растворимым цитоплазматическим белком. [c.66]

Работа выполнена на субклеточных фракциях головного мозга кроликов. Субклеточные фракции микросом, миелина и синаптосом получены с помощью метода дифференциального центрифугирования в градиенте плотности сахарозы (Белик и др., 1969). Первоначально были использованы водные растворы следующих ПАВ тритон Х-100, трис-дезоксихолат (дезоксихолевая кислота, нейтрализованная 1 М раствором трис до нейтральной реакции по бромтимоловому синему), додецилсульфат натрия и дигитонин. В ходе работы по определению ККМ оказалось желательным исследовать влияние ряда других ПАВ дезоксихолата натрия, октил-сульфата натрия, а также провести сравнение двух препаратов дигитонина. [c.119]

На рис. 1—3 изображены результаты опытов по изучению влияния тритона Х-100, трис-дезоксихолата, додецилсульфата натрия и дигитонина на Mg " -, Na -, К -АТФазную активность во фракциях микросом, миелина и синаптосом, предварительно инкубированных с различными концентрациями этих детергентов в течение 30 мин. при 4—5° С. Все исследованные ПАВ в определенных концентрациях активируют Mg -, Na" -, К " -АТФазу во всех трех фракциях. [c.119]

Данный феномен получил в дальнейшем простое объяснение. Кофеин действительно взаимодействует с определенным белком (частью кальциевого канала) на поверхности мембраны саркоплазматического ретикулума. Однако рецептор для кофеина не располагается равномерно в сети ретикулума, а локализован в терминальных цистернах. Поэтому добавление кофеина к нефракционированному препарату микросом, к тому же не полностью насыщенному Са +, вызывало выход катиона из фрагментов терминальных цистерн и не затрагивало Са -ь, [c.86]

Определение маркерных ферментов микросом [c.244]

Определение активности глюкозо-6-фосфатазы. Фракция микросом состоит в основном из фрагментов эндоплазматического ретикулума (ЭР), а также других типов внутриклеточных мембран. В результате того, что мембраны ЭР неоднородны по плотности, создаются препятствия полному разделению фракций. В связи с этим при выделении и очистке плазматических мембран наибольшие неприятности доставляют мембранные пузырьки, происходящие из ЭР. Они являются самой распространенной примесью, причем их маркерные ферменты не однозначны для разных тканей. [c.244]

Определяют гидролазную активность фермента в полученных разными методами препаратах микросом в день выделения и после хранения. Перед определением активности фермента в неактивированных мембранных препаратах суспензию микросом разводят сахарозой в [c.373]

Однако в эукариотах рибосомы после разрыва пептидного якоря еще обнаруживают существенное сродство к мембране эндоплазматического ретикулума. В опытах in vitro полная диссоциация рибосом от мембран эндоплазматического ретикулума достигается лишь путем совместной обработки микросом пуромицином и высокой ионной силой. Можно показать также определенное сродство нетранслирующих рибосом или рибосом, только начав- [c.275]

Методы определения. В еоздухе. Определение основано на нитровании Б. до динитросоединения, которое дает окраску с ацетоном в присутствии щелочи мешают ароматические углеводороды чувствительность — 5 мкг в анализируемом объеме раствора ( Техн. уел... ). В биосредах (гомогенаты микросом клеток печени). Определение Б. и его гидроксилированных метаболитов можно быстро проводить с помощью жидкостной хроматографии высокого давления (Burke, Prough). [c.210]

Выделяемые подобным способом микросомы (диаметр 16— 150 ммк) настолько малы, что они не видны в световом микроскопе, и первоначально эти частицы были лишь цитохимическим понятием, которое нельзя было отождествить с каким-либо определенным компонентом пптактной клетки . Палад и Сикевиц [235], изучавшие срезы микросом из ткани печени при помош,и электронного микроскопа, обнаружили, что преобладающий структурный элемент этих частиц представлен ограниченными мембранами образованиями. Последние напоминают соответствующие структуры эндоплазматической сети, наблюдаемые на срезах интактной клетки печени. При изучении этих образований в трех измерениях оказалось, что они представляют собой трубочки или пузырьки. Поверхность этих образований может быть и гладкой, однако у большинства из них на поверхности расположены мелкие плотные частицы, сходные с теми, которые видны на электронных микрофотографиях целой клетки (стр. 129). Следовательно, микросомы — это не артефакт, вызванный гомогенизацией ткани, а фрагменты эндоплазматической сети. Они представляют собой цитоплазматические структуры, существование которых в интактной клетке доказано. [c.131]

В работе [1] была описана методика получения микросит-ультрафильт-ров из стекла с прямолинейными капиллярами круглого сечения и показано различными методами, что радиусы этих капилляров находятся в пределах 0,5—0,025 мк с разбросом по сечению не более 8% для каждого фильтра при отсутствии посторонних щелей. Наличие таких фильтров с достаточно большим числом составляющих капилляров позволило нам применить их для определения -потенциала и поверхностной проводимости в связи с вопросом об аномалиях величины в тонких капиллярах [2]. [c.95]

В соответствии с Национальными стандартами РФ водка — это сииртной наииток, представляющий собой бесцветный водно-спиртовой раствор крепостью 40,0-45,0 50 и 56% об, с мягким, присущим водке вкусом и характерным водочным ароматом. Существует также термин особая водка — крепостью 40,0-45,0% с подчеркнуто специфическим ароматом и мягким вкусом, получаемым за счет внесения ингредиентов. По ГОСТу Р 51355-99 водки и водки особые представляют собой спиртные напитки крепостью 40,0-45,0 50,0 и 56%, полученные обработкой специальным абсорбентом водно-спиртового раствора, с добавлением ингредиентов или без них, с последующим фильтрованием. Процесс производства водки разработан русскими специалистами и учеными в XVI-XX веках. Особенность русской водки заключается в использовании специально приготовленной воды из артезианских скважин и других водных источников России, спирта, получаемого при переработке озимых зерновых культур, произрастающих в почвенно-климатических условиях России, и таких технологических операций, как обработка но специально разработанным режимам водно-спиртового раствора активированным по особой технологии березовым углем, а также внесение в рецептуры русских водок компонентов, характерных для природных условий России. Все эти этапы обеспечивают определенный микросостав примесей, придающий русским водкам характерные вкус и аромат. [c.369]

Инкубацию суспензии микросом, миелина и синаптосом с ПАВ проводили в течение 30 мин. при 4—5° С, за исключением специальных опытов по изучению длительности воздействия ПАВ, в которых инкубационное время было различно. В течение времени воздействия ПАВ на фермент содержание белка составляло 0.5 мг/мл. Mg +-, Na -, К" -АТФазную активность определяли как описано ранее (Палладии и др., 1970). В пробу вносили по 0.1 мг белка, что соответствовало 0.2 мл смеси суспензии и ПАВ. Фосфор определяли по методу Фиске и Суббароу, белок — по методу Лоури. ККМ определяли по изотермам поверхностного натяжения (Ребиндер, 1959). Изотермы поверхностного натяжения исследуемых ПАВ измеряли при температуре 8.5° С в водном растворе и в суспензии микросом при концентрации белка в ней 0.5 мг/мл методом наибольшего давления пузырьков (Методы испытаний водных растворов ПАВ, 1965). Растворы готовились на бидестиллированной воде. Для исследования выбранных нами систем указанный метод имеет то преимущество по сравнению с другими, что позволяет измерять истинную поверхностную активность. В других же методах, например в методе Вильгельми, использование платины для систем, в которых содержатся азотсодержащие или оксиэтилиро-ванные соединения, приводит к заниженным значениям ККМ из-за повышенной адсорбции этих компонентов на платине в результате комплексо-образования. Исследования но определению ККМ проводили в отделе поверхностно-активных веществ сектора нефтехимии Института химии высокомолекулярных соединений АП УССР. [c.119]

Присутствие примесей в растворе ПАВ изменяет концентрационную область перехода их из истиннорастворенного в коллоидное состояние. Было определено значение ККМ для чистых водных растворов ПАВ и в системе, содержащей микросомы. Полученные экспериментальные данные представлены в табл. 2. Для удобства сравнения в ней приведены также концентрации ПАВ, активирующие Mg +-, Na -, К " -АТФазу. Оказалось, что для каждого ПАВ величина ККМ превышает его активирующую концентрацию. Разница между этими величинами значительна для всех изученных ПАВ, за исключением дигитонина (препарат № 1), для которого эта разница наименьшая. Возможно, что величина ККМ в данном случае занижена вследствие содержания в этом препарате электролитов. Известно, что добавки электролитов к водным растворам чистых ПАВ приводят к значительному (но до определенного значения) понижению их ККМ (Демченко, 1961, 1962). Дальнейшее увеличение добавок электролитов практически не влияет на ККМ, однако понижает растворимость ПАВ. Растворимость препарата дигитонина № 1 была действительно понижена. Поэтому мы исследовали другой препарат дигитонина (препарат № 2). Значение ККМ для этого препарата значительно выше, а именно в водном растворе 4.2 г/л, а в суспензии микросом 3.4 г/л, что свидетельствует о большей его чистоте. На этом препарате в отличие от первого наблюдали явление снижения величины ККМ под влиянием добавок (суспензия микросом). Этот факт согласуется с утверждением о том, что при добавке других менее эффективных веществ к препарату ПАВ, загрязненному электролитами, изменение ККМ зарегистрировать не удается. [c.124]

Поверхностно-активные вещества — тритон Х-100, трис-дезоксихолат, додецилсульфат натрия и дигитонин — в определенных условиях (концентрация, время воздействия) обусловливали активирование Mg +-, Na+-, К+- АТФазы фракции микросом, миелина и синаптосом, выделенных из мозга кролика. Степень активирования ферментативной активности была значительно более выражена на микросомной фракции и миелине, чем на синаптосомах. Концентрация детергентов, необходимая для максимальной активации Mg +-, Na+-, К+-АТФазы в синаптосомах, была меньше концентрации, оСусловливаюшей активацию фермента в других мембранных структурах. Путем исследования критической концентрации мицеллообразования разных детергентов и сравнения этой величины с активирующими ферментативную систему концентрациями, сделано заключение, что активирующее действие детергентов проявляется при их молекулярно-дисперсном состоянии. Полученные данные свидетельствуют о наличии определенной специфики внутримембранной организации Na+-, [c.212]

Вопросам динамического состояния белков и других составных частей клеток посвящена специальная глава книги (стр. 573). Здесь же следует отметить, что использование в исследованиях, наряду с радиоактивными и стабильными изотопами также отдельных элементов клеток гранул, митохондрий, микросом и ферментных экстрактов из клеток позволило весьма детально разобраться в ферментативных процессах, обеспечивающих обновление аминокислотного состава белков тканей. Установлено, что обновление ами1юкислотного состава белков происходит при определенных условиях. Аминокислоты, участвующие в этом процессе, как это имеет место в случае синтеза белковых молекул, подвергаются активированию. Активирование аминокислот происходит в присутствии кислорода, или же при добавлении к среде аденозинтрифосфорной кислоты. Продукта.ми активирования являются аденилаты аминокислот. Ферментативные процессы активирования аминокислот сосредоточены преимущественно в митохондриях, обновление же белков интенсивно происходит в лшкросомах клеток. В процессах обновления а.минокислотного состава белков участвуют нуклеиновые кислоты. [c.431]

В ТО-е гг. первым исследованием упаковки липидов вблизи мембранного белка в небольпаих временных интервалах (< 10 с) было определение подвижности спин-меченной жирной кислоты в реконструированной системе цитохромоксидаза — эндогенные митохондриальные фосфолипиды методом ЭПР. В дальнейшем подобные эксперименты проводились с использованием цито-хромоксидазы и цитохрома и липидных бислоев, содержаш их грамицидин А, а также мембраны микросом печени крысы, эритроцитов, вирусов Синдбис и везикулярного стоматита. Было показано, что значительная часть липидов в этих мембранах иммобилизована за счет белок-липидных взаимодействий. Количество иммобилизованных липидов при температурах 20—40 °С составляет примерно 0,2 мг на 1 мг белка (47 молекул фосфолипидов на белковый комплекс) цитохромоксидазы, что соответствует приблизительно одному слою липидов вокруг белковой глобулы. Примерно такое же количество (45—90) молекул иммобилизуется за счет взаимодействия с Са -АТФазой саркоплазматического ре-тикулума. Понижение температуры может приводить к возрастанию количества иммобилизованных липидов в 2—3 раза. [c.59]

Ход определения. Инкубационная смесь объемом 3 мл содержала 100-мМ трис-НС1 буфер (pH 7,4) и 3 мг белка микросом. Реакцию начинали добавлением НАДФ-Н или НАД-Н до 33 мкМ концентрации и регистрацию флуоресценции проводили на флуориметре ЭФ-ЗМ (фильтр возбуждения 366 нм, фильтр регистрации 420 нм) при 30 °С в термостатированной кювете с подключенным к нему самописцем КСП-4. [c.59]

Ход определения. Инкубационная смесь объемом I мл содержала 100 мМ трис-НС1 буфер (pH 7,4) и 4 мг белка микросом. Реакцию начинали добавлением растворов НАДФ-Н или НАД-Н до 1 мМ концентрации. Запись проводили при 30 °С в течение 2—3 мин. Для ингибирования реакции перекисного окисления ненасыщенных жирных кислот, сопровождающихся интенсивным потреблением кислорода, в ячейку полярографа добавляли ЭДТА до 0,6 мМ концентрации. [c.59]

Ход определения. Измерение содержания цитохромов bs и Р 450 проводили в суспензии микросом [100 или 200 мМ трис-НС1 буфер (pH 7,4) и 1—2 мг белка в 1 мл] на спектрофотометрах СФ-10 и СФ-14 (по двухлучевой схеме) или Хитзчи-356 (по двухволновой схеме). При работе на СФ-10 использовали цилиндрические кюветы высотой 12 мм и диаметром 26 мм. В каж-дуют из кювет вносили по 4 мл инкубационной смеси и на кулачке светопропускания нулевую линию выводили примерно на уровень 70%. Запись п оводили в диапазоне волн 400—500 нм. В правую кювету добавляли несколько кристаллов дитионита или какого-либо другого восстановителя в зависимости от целей опыта и записывали дифференциальный спектр цитохрома bs. При этом минимум поглощения имел место при 408 нм, а максимум — при 428 нм. Разница поглощения, между 408 и 428 нм (ДОП408-428) служила показателем, характеризующим содержание цитохрома. При измерениях на спектрофотометре Хитачи-356 использовали следующие пары волн 408—424 и 424—475 нм. Содержание цитохрома bs в микросомной фракции, рассчитанное с помощью коэффициента молярной экстинкции 164 10 см- М- (Omu-га, Sato, 1964), составляет 0,4—0,6 нмолей в 1 мин на [c.60]

В комплексе Гольджи имеется своего рода градиент , идущий от одного его конца к другому, вдоль которого наблюдаются изменения как в строении мембран, так и в синтезе и сборке различных веществ. При выделении комплекса Гольджи существуют определенные методические трудности. При гомогенизации гладкие липопротеидные мембраны Гольджи разрушаются и попадают в микросом-ную фракцию. [c.16]

Какова функция мембранно-связанных ферментов на примере Ка+, К+ —АТФ-азы 2. Назовите маркерные ферменты а) длн плазматических мембран б) для митохондрий в) для ядер г) для микросом. 3. Какие требования предъявляются к ферментам-маркерам 4. Чем могут быть обусловлены артефакты при определении маркерных ферментов плазмати сских мембран 5. Примеси каких оргаиелл присутствуют во фракции плазматических мембран 6. На чем основано определение активности Na+, К+ — АТФ-азы, 5 -нуклеотидазы, щелочной фосфатазы [c.244]

Какие трудности возникают при определении маркерных ферментов макросом 2. Чем могут быть обусловлены артефакты при определении маркерных ферментов микросом 3. Какие типы мембраи присутствуют во фракции микросом Как это устаиовнть Чем обусловлеио присутствие этих мембраи 4. На чем основано определение активности глюкозо-6-фосфатазы, НАД-Н-оксидазы, Са2+—АТФ-азы [c.247]

Анализ распределения ферментов во фракционируемых тканях основан на двух общих принципах. Первый из них заключается в том, что все частицы данной субклеточной популяции содержат одинаковый набор ферментов. Второй предполагает, что каждый фермент локализован в каком-то определенном месте внутри клетки. Если бы это положение было верно, то ферменты могли бы выступать в роли маркеров для соответствующих органелл например, цито-хромоксидаза и моноаминооксидаза служили бы ферментами-маркерами митохондрий, кислые гидролазы — маркерами лизосом, каталаза — маркером пероксисом, а глюкозо-6-фосфатаза — маркером мембран микросом. Оказалось, однако, что некоторые ферменты, например малатдегидрогеназа, Р-глюкуронидаза, НАДФ Н-цитохром-с-редуктаза, локализованы более чем в одной фракции. Поэтому к выбору ферментов-маркеров субклеточных фракций в каждом конкретном случае следует подходить с большой осторожностью. Более того, отсутствие фермента-маркера еще не означает отсутствия соответствующих органелл. Вполне вероятно, что при фракционировании происходит потеря фермента органел-лами или он ингибируется или инактивируется поэтому для каждой фракции обычно определяют не менее двух ферментов-маркеров. [c.56]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология