Изготовление срезов

Толстые срезы (т. е. между 0,2 и 2,0 мкм) являются полез-ным компромиссом, поскольку при использовании растровых изображений на просвет может быть получена достаточно хорошая морфологическая информация, а образцы являются довольно толстыми и содержат достаточное количество материала, который можно проанализировать с хорошим пространственным разрешением. Поскольку большинство растительных и животных тканей являются очень мягкими, перед изготовлением срезов их прежде всего нужно стабилизировать и упрочнить. Как будет обсуждаться ниже, большинство из этих способов препарирования может привести к серьезным потерям из тканей растворимых субстанций и должно использоваться с большой осторожностью. Альтернативный путь — производить анализ срезов, высушенных лиофильной сушкой или замороженных в гидратированном состоянии. [c.273]

Процедура представляет собой относительно медленный процесс и состоит просто в замене льда в быстро замороженном образце безводным растворителем при низкой температуре с последующей низкотемпературной инфильтрацией ткани соответствующей заливочной средой. Все замещение, инфильтрация смолой, полимеризация и изготовление срезов должны выполняться в строго безводных условиях и при низких температурах. Эти требования могут создать технические трудности, так как пар атмосферной воды очень быстро поглощается осушителями при низкой температуре. По этой причине изменения и перенос производятся либо в перчаточном боксе с сухим азотом при небольшом положительном давлении, либо в герметических контейнерах с люками для ввода и вывода. [c.302]

В последних исследованиях [200] были усовершенствованы методика получения срезов при низких температурах, методы монтажа и переноса образца и режим анализа, так что рутинным образом можно было изготавливать срезы множества тканей, которые остаются замороженными в гидратированном состоянии после 3—4 ч пребывания в микроскопе. При такой процедуре маленькие кусочки ткани помещаются на конце медных брусков и быстро охлаждаются в жидком фреоне-12. Изготовление срезов производится в диапазоне температур, используемых в новом устройстве для изготовления срезов при низких температурах, установленном на микротоме, в котором большая камера для нарезки охлаждается поступающим в камеру непрерывным потоком газообразного сухого азота. Температура газа, а следовательно, и температура ножа и образца могут контролироваться пропусканием азота через изолированный резистор. Непрерывный направленный поток сухого азота предотвращает любое образование льда в камере нарезки. [c.306]

Изготовление срезов при низких температурах является непростой процедурой, будучи даже более сложной для растительного материала, и рабочие параметры должны быть оптимизированы для каждого образца. Контраст изображения нефиксированного материала является слабым, и часто бывает трудно распознать знакомые клетки и ткани. Эти обескураживающие замечания не должны, однако, удерживать людей от попыток использования этого метода, потому что, несомненно, анализ срезов, и в частности толстых, замороженных в гидратированном состоянии срезов, дает количественно аналитические результаты, наиболее точно напоминающие условия, существующие в живой ткани. Важно распознавать артефакты, связанные с переходным таянием или полным оттаиванием, случайной регидратацией срезов, полученных лиофильной сушкой, перераспределением электролитов за счет мигрирующей рекристаллизации льда и загрязнением замороженных срезов. [c.313]

Было проведено также анатомическое изучение. Первичные корни кукурузы и гороха изучали на свежих поперечных срезах, сделанных вручную, а также с помощью микротома в последнем случае делали серию поперечных и продольных срезов. Для изготовления срезов отрезали кончики свежих корешков длиной 1,6 см [c.207]

Усадку можно измерять лишь на срезах, так как различные ориентационные состояния материала создают деформационные препятствия. Для точного измерения степени ориентации необходимо возвратить материал в изотропное состояние без пластической деформации. Измерение поперечных сечений срезов после усадки в основном дает лишь суммарное представление о распределении ориентации. При двухосной ориентации молекулярных структур нагревание выше температуры стеклования приводит к возникновению состояния двухосного напряжения. Наличие градиента ориентации в образце обусловливает различие в величине компонент напряжения в разных точках, что вызывает деформационные затруднения, приводящие к появлению пластической деформации и ошибкам при измерении. Если толщина поперечного сечения образца составляет 10—20 мк, то такие срезы материала при усадке релаксируют легче. Как было показано на изотропном материале, сдавливание при изготовлении среза дает остаточную деформацию, составляющую 1—2%. [c.96]

Ультратонкие срезы резин, изготовленные на микротоме салазочного типа, необходимо расправить путем набухания в растворителе так же, как при изготовлении срезов для световой микроскопии. Теперь эта операция осуществляется гораздо труднее, так как эти срезы более тонкие и менее прочные и должны вдобавок монтироваться на маленькие сеточки перед исследованием в электронном микроскопе. Так как тонкие срезы резин являются плохими провод- [c.177]

Контроль качества осуществляется визуальным осмотром покрышки, периодическим отбором покрышек от каждого сборщика и направлением их на изготовление срезов. За последние годы применяются также контрольные приборы, записывающие производимые сборщиком операции , а также аппараты управления станком, обеспечивающие правильную последовательность всех операций по сборке покрышки. [c.343]

Митохондрии вьщеляют из клеток в виде чистой фракции с помощью гомогенизатора и ультрацентрифуги, как описано в гл. 5 (разд. 5.7). После этого их можно исследовать в электронном микроскопе, используя для этого различные методики, например изготовление срезов или негативный контраст. [c.356]

Как показали и наши, и литературные данные, при изготовлении среза слой поврежденных структур достигает 0.05 мм следовательно, при малой толщине среза он составляет 25 % всей массы ткани. С нашей точки зрения, это обстоятельство является главным аргументом против применения тонких срезов. Кроме того, для большинства биохимических и физиологических процессов токсичность кислорода не проявляется. По-видимому, ее следует принимать во внимание в основном при изучении окислительных ферментов, а в остальных случаях ею можно пренебречь и использовать срезы толщиной до 0.52 мм с инкубацией в атмосфере кислорода. Часто употребляют газовую смесь — 95 % Og и 5 % Oj (карбоген). В средах с чистым бикарбонатным буфером такая смесь улучшает буферную емкость. В тех же случаях, когда среда содержит доминирующий фосфатный буфер (3, 8, табл. 1, 3), ее буферная емкость хорошо сохраняется в атмосфере чистого кислорода. Кроме того, карбоген делает невозможным измерение дыхания методом Варбурга. Поэтому мы рекомендуем в основном среды с фосфатным буфером и инкубацию в атмосфере кислорода во всех случаях, где не показана специально необходимость наличия СО2 в газовой фазе. [c.15]

После изготовления срезы сразу же помещаются в инкубационную среду. Состав сред подробно обсуждался в предыдущей главе. Здесь мы отметим лишь некоторые модификации составляющих их компонентов, которые, как показали эксперименты , оказывают влияние на электрическую активность. [c.35]

Неудачи при изготовлении срезов. Рассмотрим возможные затруднения и причины неудач при получении микротомных срезов. [c.80]

B. Неправильно. В специализированных клетках различных органов можно измерить продолжительность клеточного цикла путем определения митотического индекса либо путем введения метки ( Н-тимидин) в целое животное с последующей фиксацией, изготовлением срезов и радиоавтографией исследуемой ткани. [c.472]

Трудно представить, как изготовление срезов и изломов могло бы влиять на аналитические результаты, но необходимо рассмотреть ряд эффектов. Режущие кромки ножей не остают- [c.284]

СЯ все время острыми и постепенно изнашиваются при взаимодействии с образцом. Следует учитывать, куда исчез материал с острия ножа в процессе изготовления среза. Стекло обычно содержит бор, кремний, натрий и калий вместе со следами других элементов. Алмазные ножи состоят из чистого углерода, и мало вероятно, что они внесут существенное загрязнение в объект. Стальные ножи часто используются для нарезки срезов и, вполне возможно, загрязняют образцы. Очень важно тщательно после заточки очищать стальные ножи для того, чтобы удалить все хонинговые соединения. Это лучше всего достигается путем использования мягкой тряпочки и органической жидкости, например ацетона. Необходимо обратить внимание на чистоту промывочной жидкости, если она использовалась, и на обработку среза после нарезки. Например, если необходимо выровнять срезы из смолы, лучше, вероятно, избегать паров хлороформа, которые могут легко поглощаться срезами из смолы, что приводит к большому загрязнению хлором. [c.285]

Метод микротомных срезов широко используется при исследовании степени диспергирования сажи в каучуке как в нашей стране так и за рубежом. Для изготовления срезов толщиной 1—5 м/с образцы резины замораживают в жидком азоте. Срезы саженаполненных каучуков толщиной 5 мк хорошо просматриваются под микроскопом (рис. IV. 12). На серовато-коричневом фоне хорошо видны черные сажевые агрегаты разных размеров. При хорошем диспергировании и качественном смешении (рис. IV, 12, а) большая часть сажи диспергирована до размеров, не видимых при среднем увеличении (до X 600), Присутствие мелких частиц ответственно за окраску среза, поскольку тонко диспергированная сажа сильнее рассеивает более короткие волны светового спектра. При плохом смешивании на общем сероватом фоне хорошо видны комки недиспёргированной сажи, достигающие в отдельных случаях значительных размеров — до 0,05 мм (рис. IV. 12, б). Присутствие таких комков, нарушая однородность системы, может приводить к существенному ухудшению механических показателей резин. [c.195]

Парафин (Paraffinum soli dum) — смесь твердых нефтяных углеводородов, получаемых при дистилляции парафинистой нефти после отгонки смазочных масел. Очищенные парафины представляют белую массу без запаха и вкуса. Сорта парафина отличаются по температуре плавления сорт А плавится при 54°, сорт Б — при 52°, сорт В — при 50 . Парафин применяется в гистологии для заливки кусочков тканей и органов при изготовлении срезов на микротоме. Для этой цели лучше брать так называемый гомогенизированный парафин, потерявший свою кристаллическую структуру под действием высокой температуры, или смесь парафина и церезина с соответствующей температурой плавления. Из смеси парафина и вазелинового масла готовят искусственный вазелин. Наконец, парафин, как средство обладающее большой теплоемкостью, применяют для тепловых процедур при лечении невритов, артритов и других болезней. Парафин применяют для изготовления свечей. В смеси со скипидаром из него получают крем для чистки обуви и мастику для натирки полов. [c.54]

При изготовлении срезов на м1гкротоме хорошо оправдали себя ножи из твердых сплавов. Однако при этом [c.82]

Для изучения структуры сформированных покрытий в зависимости от условий полимеризации и природы подложки применялся метод углеродных реплик с предварительным кислородным травлением образцов [32, 95]. Без травления структура их четко не выявлялась, что обусловлено отсутствием достаточной рельефности поверхности из-за наличия наряду с более плотными упорядочеи-ны.ми структурами менее организованных низкомолекулярных фракций. Методом срезов с блоков и покрытий удалось выявить их структуру без травления образцов из-за большей плотности надмолекулярных структур по сравнению с фракциями, расположенными между ними (рис, 3.11). Последующее кислородное травление этих срезов не изменяло размера и характера глобулярных структур и позволяло выявить их более четко (рис. 3.11, в, г). При сравнении структуры, полученной методом реплик и срезов, оказалось, что методом реплик выявляются более сложные вторичные надмолекулярные образования, состоящие из структурных элементов значительно меньшего размера, обнаруживающихся при разрушении таких структур при изготовлении срезов. С учетом этого для исследования структурных превращений в процессе полимеризации были приготовлены пленки из олигомеров толщиной 10—50 нм. Методика получения образцов заключалась в следующем [37]. В углубление диаметром 3—5 мм на предметном стекле наносилась капля раствора полиэфирной смолы в ацетоне концентрацией от 9 до 75%, затем с помощью пипетки в каплю вдувался пузырек воздуха. Сеточка объектодержателя с коллодиевой пленкой-подложкой прикасалась к поверхности образца. В результате соприкосновения пузырек разрывался и на пленке-подложке оставался тонкий слой раствора. Препарат сразу же просматривался под электронным микроскопом, так как избыток ацетона быстро удалялся из тонкой пленки. Предварительно было установлено, что процесс формирования пленок из растворов ненасыщенных полиэфиров при 20 °С заканчивается в течение нескольких суток, а более 70% двойных связей стирола и ненасыщенного полиэфира расходуется в течение 4—6 ч. С повышением температуры отверждения до 80 °С более 90% двойных связей используется в течение 40—60 мин. Процесс полимеризации значительно ускоряется при [c.139]

Однако иногда необходимо получить сведения о распределении частиц наполнителя как, например, показано на рис. 6.8. На этом рисунке приведены для сравнения два образца протекторной резины на основе бутилкаучука с активной низкоструктурной сажей (АЬ5-НАР). Эта сажа содержит больше поверхностных кислородсодержащих групп по сравнению со стандартными. Для достижения максимального усиления резин на основе бутилкаучука требуется тщательное диспергирование такой сажи, сочетающей низкую структурность с большой поверхностной активностью. Образцы, показанные на рис. 6.8, представляют собой срезы толщиной 500—1000 А, изготовленные на микротоме салазочного типа фирмы ЬеЛг . Несмотря на то, что этот прибор не предназначен для изготовления ультра-тонких срезов, его можно использовать для этой цели, применив специальный держатель образца и метод замораживания жидким азотом, которые были описаны выше (см. рис. 6.3). Образец замораживается таким же путем, как при изготовлении срезов для световой микроскопии, однако механическую подачу микротома не применяют перемещение объекта во время резания осуществляется за счет термического расширения держателя образца при нагревании. Срезы нужно изготовлять с максимальной скоростью плавными движениями. Размер образца резины должен быть немного меньше, чем при изготовлении срезов для световой микроскопии или микрора-диографии. Вполне подходящим является образец прямоугольной формы размером 2,5-4-2 мм. [c.177]

Структура оенополистирола (размеры ячеек, их строение, толщина полимерных пленок и т. п.) может быть определена микроскопическим анализом. Для этого из образцов пенололистирола вручную или на специальных микротомах изготавливают срезы толщиной 10—15 мкм, которые просматривают под микроскопом в проходящем свете. При изготовлении срезов вручную (лри помощи лезвия) не требуется предварительной подготовки пенополистирола. При изготрвлении срезов на микротоме образцы пенополистирола предварительно обрабатывают для получения плотной, хорошо режущей массы парафинируют или желатинизируют, после чего замораживают. Для парафинирования образцы разогревают, поэтому обрабатывать таким способом можно пенополистирол с теплостойкостью выше 70° С. При желатинизации образцы пропитывают раствором желатины различной концентрации при 37° С и охлаждают . Готовые срезы хорошо сохраняются в воде. [c.89]

Инструменты систематика. Для систематика, исследования которого по существу сводятся к морфологическому анализу какой-ли-бо группы насекомых, не требуется много инструментов, кроме микроскопов, реактивов и материалов для изготовления срезов, энтомологических булавок и ящиков, этикеток и возможно простого оборудования для вскрытий. Другие, более специальные типы таксономического анализа требуют особой аппаратуры, многие образцы которой обсуждены Олд-ройдом [1501] в его работе Сбор, хранение и изучение насекомых . Россом [1679] опубликована превосходная, хорошо иллюстрированная монография о фотографировании насекомых, и каждому желающему использовать возможности фотографии в целях систематики полезно ознакомиться с этим трудом. Работа Уайта [2272] по цитологии животных является ценным пособием для каждого систематика, ис- [c.188]

Форма растительных клеток чрезвычайно разнообразна и зависит главным образом от их функций. Свободные клетки обычно бывают шаровидными, овальными и яйцевидными, в то время как в тканях растений их форма под давлением массы других клеток часто становится многогранной. Изучая клетки под, микроскопом, всегда следует учитывать их трехмерность. Представления о действительной форме клеток могут быть получены только при серийном изготовлении срезов определенной толщины, ориентированных различным образом. В основном клетки растений делятся на два типа паренхимные и прозенхимные. У клеток первого типа длина, ширина и высота примерно одинаковые прозенхимные клетки вытянуты в длину и имеют заостренные концы. Эти отличия можью наблюдать лишь на продольных разрезах. [c.16]

Окрашенный кусочек ткани исследуют и фотографируют. Клетки, содержащие железо и оксиды железа, выглядят голубыми, а другие ткани остаются неокрашенными. Затем можно обезводить ткань проводкой через спиртовые растворы, просветлить в ксилоле и заключить в заливочную среду для изготовления срезов. Процедура заливки-обычная она детально описана во многих методических руководствах (например, Humason, 1967). [c.248]

Еще один уровень организации — это орган, разделенный на срезы. Печень, почки, мозг и другие ткани могут быть разделены на срезы толщиной 50 мкм омываемая ожидкостью поверхность этих срезов достаточно велика для того, чтобы в течение нескольких часов мог поддерживаться необходимый для жизне теятельности обмен питательных веществ и продуктов выделения. Часть клеточных мембран надрезается в процессе изготовления" срезов, ио большинство клеточных компонентов остается внутри клеток. Хотя скорости реакций в клетке среза печени, который инкубируется (при встряхивании) в среде, лишь приблизительно имитирующей внеклеточную, могут отличаться от скоростей в норме, этот метод оказался чрезвычайно полезным из-за относительной простоты [c.385]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология