Методы тонких срезов

Эта методика с успехом использовалась в промышленных лабораториях США. Хотя она и не распространена очень широко, тем не менее для спектроскопии углей она стала стандартной. Спектры, полученные для тонких срезов, не имеют налагающихся полос поглощения эмульгаторов или полос поглощения, присутствующих иногда в спектрах таблеток галогенидов. Одно из крупнейших преимуществ метода тонкого среза заключается в том, что для него не существует проблемы рассеяния излучения в коротковолновой инфракрасной области, в которой использование суспензий и таблеток из-за такого рассеяния затруднено. Раньше общий фон поглощения, увеличивающийся в сторону коротких длин волн в спектрах суспензий или таблеток, относили за счет рассеяния на частицах или рассеяния плюс неизвестного электронного поглощения. В 1956 г. методика тонкого среза была применена для того, чтобы показать, что витрен питтсбургского угля (84% углерода) не рассеивает излу- [c.166]

Для ИК-спектроскопии используют образцы в виде пленок, полученных из раствора. Пленки нерастворимых полиамидов могут формоваться горячим прессованием или готовиться микротомом в виде тонких срезов (2—3 мкм). Во всех случаях необходимо с очень высокой точностью контролировать толщину образца. Недавно была предложена новая ускоренная методика приготовления образцов, которая может рассматриваться как метод неразрушающего контроля. Он состоит в том, что пучок ИК-света направляется на поверхность контакта между исследуемым образцом и материалом с гораздо большим показателем преломления со стороны материала с высоким показателем преломления под углом, примерно равным 45°. При этом большая часть энергии отражается от граничной поверхности. Часть потока, прошедшая через граничную поверхность, проникает в исследуемый образец на глубину нескольких мкм. Если таким образом удается создать несколько отражений, то при этом достигается заметное усиление сигнала, что позволяет получать хорошие спектры поглощения. В качестве материала с высоким коэффициентом преломления обычно используют смешанный кристалл бромида и иодида таллия с показателем преломления 2,6. Вследствие того что единственное требование при проведении экспериментов — хороший оптический контакт между призмой с высоким коэффициентом преломления и исследуемым веществом, требуется минимальная подготовка образца. Эта методика пригодна для нерастворимых полиамидов. [c.243]

Рассмотрим немногочисленные пока примеры приложения метода, относящиеся к области физической химии. В работе [165] описано приготовление и исследование тонких срезов лакокрасочных покрытий, позволившее определить распределение частиц красителя в лаковой пленке. Качество такого покрытия зависит от степени равномерности распределения частиц в покрытии, что можно непосредственно оценить из электронных микрофотографий. Метод срезов был с успехом применен для исследования структуры углеводородных гелей [166, 167]. Предварительно образец, например гель стеарата кальция, замораживали при помощи сухого льда и с замороженного блока получали срезы толщиной от 0,5 до 1 [х. Было показано, что гель имеет сетчатую структуру и установлено изменение этой структуры в зависимости от условий получения и обработки геля. При исследовании некоторых катализаторов были оценены размеры частиц, образующих скелет таких объектов, а также определен характер пористости катализаторов [156, 168, 169]. В последней работе было проведено сравнение эффективности методов реплик и тонких срезов и установлено, что метод срезов дает лучшие результаты при изучении сравнительно крупных пор с размерами от 0,05 до 1 Строение весьма пористых целлюлозных фильтров было изучено путем заполнения их свободного пространства осадками солей и последующего получения тонких срезов. При этом оказалось возможным зафиксировать структуру фильтров, набухших в различных жидкостях [170]. Метод тонких срезов пригоден для изучения строения синтетических волокон [171], минералов [172, 173]. Ряд работ был посвящен исследованию распределения наполнителей (прежде всего саж) в тонких срезах резин. [c.119]

Для исследования морфологии в блоке наиболее перспективен метод тонких срезов, которые получают с помощью ультрамикротома. При приготовлении тонких срезов требуется предварительное повышение жесткости образца, что может быть достигнуто двумя способами. Первый заключается в том, что образец набухает в жидком мономере, который при полимеризации превращается в жесткоцепной полимер набухший образец выдерживают в условиях, обеспечивающих полимеризацию моно- [c.65]

Ф и г. 65. Электронная микрофотография фагов Т4, адсорбированных на клеточной стенке Ё. соИ В (метод тонких срезов) [452, 453]. [c.254]

Экспериментальные приемы, применяемые в биохимии для изучения метаболизма, разнообразны. Исследования химических превращений проводятся на уровне целых органов, в тонких срезах и клеточных культурах, в гомогенатах тканей, органелл и очищенных ферментов. В любом эксперименте важную роль играют методы количественной регистрации химических превращений. Гравиметрические методы недостаточно чувствительны и часто непригодны для анализа органических соединений. Поэтому в биохимии широко применяются спектрофотометрические и колориметрические методы, имеющие высокую чувствительность и позволяющие определять очень небольшие количества веществ. Некоторые превращения сопровождаются поглощением или выделением газа. Для количественной регистрации таких превращений применяются манометрические методы. [c.5]

Схема расчета, основанного на методе с использованием непрерывного излучения (разд. 7.7.6), предназначена для расчета относительных и абсолютных массовых долей для элементов в тонких срезах биологического материала. Предлагаемый расчет можно выполнить с использованием небольшого настольного калькулятора. Система обозначений, используемых в схеме расчета, приводится после этого приложения. В основе процедуры лежат следующие предположения, касающиеся приготовления образца, прибора и метода анализа [c.89]

Альтернативная процедура включает заливку высушенного образца смолой или воском и нарезку из него тонких срезов для аналитических исследований. Для консультаций относительно последних достижений этого метода может быть рекомендован обзор [446]. [c.300]

В работе [447] рекомендуется гораздо более быстрый метод лиофильной сушки. Следует подчеркнуть, что эти процедуры можно лишь использовать при морфологических исследованиях поверхностных деталей образцов, и необходимо убеждаться, что не происходит плавления внутреннего льда. Альтернативный метод лиофильной сушки состоит в погружении тонких срезов замороженного материала в медленный поток сухого холодного азота при атмосферном давлении и температуре от 200 до 170 К. [c.300]

Замораживание-замещение является полезным методом препарирования образцов для получения тонких срезов. Несмотря на то что основное усилие исследований было направлено на защиту морфологической целостности образцов, в настоящее время имеется достаточно оснований, чтобы предполагать, что замораживание-замещение может также быть полезным методом препарирования для микроанализа биологических объектов. Мы отправляем читателя к недавно опубликованным обзорам [453, 454], в которых обсуждается целый ряд методов в применении для растительных и животных тканей. [c.302]

Для приготовления образца каучука, нерастворимого, но хорошо набухающего в том или ином растворителе, можно применить метод расплющивания набухшего образца между пластинками, прозрачными в ИК области. Растворитель, в котором производится набухание, либо полностью испаряется, либо его поглощение компенсируется поглощением растворителя в кювете сравнения. Набуханию подвергают либо мелкую крошку каучука, либо тонкий срез, полученный на микротоме. В последнем случае кусочек каучука замораживают, поливая его жидким азотом. Размер полученного среза должен быть не меньше размера изображения источника света на образце в спектрометре. Если не удается получить срез достаточно большой площади, удобно применить микроскоп-приставку - совокупность двух оптических систем, смонтированных в одном корпусе. Каждая система (одна - для образца, другая - для сравнения) состоит из двух объективов, расположенных один под другим и способных к независимому перемещению для фокусировки. Один из объективов дает уменьшенное изображение источника света, одновременно фокусируя его на образец. После прохождения образца изображение увеличивается до первоначальной величины и направляется на входную щель. [c.218]

Для определения первых двух параметров необходимо располагать информацией о реальных размерах частиц диспергируемой фазы и характере их распределения по объему оцениваемой партии смеси. Существующие методы оценки степени диспергирования основаны на том, что из отобранных по закону случайных чисел образцов изготавливаются тонкие пленки [46] или микротомные срезы [47—50], которые затем просматриваются в оптическом или электронном микроскопе. При выборе метода оценки следует предпочесть метод микротомных срезов, поскольку в этом случае исключаются дополнительная деформация и искажение формы частиц диспергируемой фазы, неизбежные при расплющивании образца между предметными стеклами микроскопа [49]. [c.232]

Тонкие срезы образца (толщиной <200 нм для пучка электронов с энергией 100 кэВ) можно исследовать методами просвечивающей электронной микроскопии и электронографии. Контрастность электронно-микроскопических снимков кристаллических препаратов в основном обусловлена не поглощением, а дифракцией электронов и зависит от ориентации кристалли- [c.398]

В одной из недавних работ [7] мы отмечали, что деформации мем бран объясняются их подвижностью в собственной плоскости,, а не эластичностью. Возьмем, например, кусок резины — он эластичный, а не жидкий, В нем соседние молекулы полимерных цепей А и В остаются расположенными очень близко друг к другу даже при сильных деформациях. Толщина резины зависит от сил натяжения, и если в куске резины есть отверстие, то оно будет деформироваться в соответствии с распределением напряжений. Напротив, в жидкой пленке постоянны диффузия и плотность молекул, а окружение отдельной молекулы непрерывно меняется. Существование диффузии в системах вода — липид и в биологических мембранах было подтверждено методом магнитного резонанса [16, 50]. Толщина мембраны, определяемая с помощью электронного микроскопа на тонких срезах, остается постоянной и не зависит от формы мембраны [51]. [c.281]

Этот метод является основным в просвечивающей электронной микроскопии. Если препарат представляет собой совокупность амор )ных частиц одинакового состава, то на основании контрастности изображения можно судить об их относительной толщине. При изучении тонких срезов одинаковой толщины, полученных при помощи ультрамикротомов, изображение формируется благодаря содержанию атомов с различной [c.17]

Уже с начала сороковых годов неоднократно предпринимались попытки применить микротомы для получения достаточно тонких срезов препаратов, пригодных для изучения в электронном микроскопе. Предложенные вначале различные варианты конструкций микротомов, в том числе основанные на быстром вращении ножа, оказались недостаточно эффективными. Удовлетворительные модели ультрамикротомов, позволившие получать срезы толщиной в сотые доли микрона благодаря регулируемой термической подаче объекта, были разработаны в 1953 г. [149—151]. С тех пор метод ультратонких срезов получил широкое распространение в биологии, так как появилась возможность исследовать массивные ткани. В каждом типе ткани были обнаружены сложные мембраны, каналы и частицы в области величин, начиная от макроструктур и вплоть до предела разрешения. Выло показано, что жизненные процессы в клетке зависят от этой сложной структуры. В последнее время ультрамикротомы начинают все чаще при- [c.116]

Основным недостатком метода ультратонких срезов является деформация препарата во время резания и возможность искажения его структуры. Этого в особенности следует опасаться при исследовании небиологических препаратов, которые нередко отличаются механической прочностью и хрупкостью. Не исключено, например, вырывание частиц препарата и возникновение искусственно создаваемой пористости, особенно если различные части препарата отличаются по твердости. Как уже отмечалось, контрастность изображений на микрофотографиях тонких срезов в общем невелика и может происходить наложение друг на друга изображений деталей струк- [c.120]

Как и любой другой метод препарирования, метод тонких срезов имеет свои преимущества и недостатки. Достоинством его является возможность непосредственно наблюдать структуру не только поверхностных, но и внутренних слоев препаратов, если последовательно изучать срезы различных по глубине участков. При этом удается различать детали структуры, размеры которых составляют не менее /ю толщины среза. Это давно установленное эмпирическое правило было теоретически объяснено Косслеттом [174], принявшим во внимание потерю энергии электронами, рассеянными в образце, и хроматическую аберрацию объективных линз. Автор указывает, что невысокое разрешение в этом случае объясняется недостаточным контрастом. [c.120]

Изучение миграции стабильных радикалов в полимерах [28] дает возможность методом ЭПР точно определить коэффициент диффузии D . Для исследования процесса поступательной диффузии был также выбран радикал 2,2,6,6-тетраметилпиперидин-1-оксил. Измерения D проводились на полиэтилене высокого давления (р = 0,918 ej M ). Образец полимера помещали на некоторое время в пары радикала. По условиям опыта диффузия радикала в образец носила одномерный характер. При этом интегральное-измерение поглощенного радикала позволяет определить D . В этой работе [28] пользовались более точным методом тонкого среза, в котором измеряется распределение концентраций радикала по диффузионному фронту. [c.155]

Для установления потенциальных предшественников лигнина Стаффорд [45] использовал различные методы. Тонкие срезы листьев РЫеит pratense инкубировали с некоторыми производными коричной кислоты в присутствии перекиси водорода и pH среды 4,5. Лигниноподобные полимеры получили из п-окси-коричной, феруловой и синаповой кислот, а также из кониферилового спирта. [c.292]

Со времени первых обстоятельных исследований Кэннона и Сазерлэнда [17, 18], выполненных в 1945 г., ИК-спектроско-пня занимает важное место в исследовании структуры углей. Качественный и количественный анализ соединений, входяндих в состав углей, проводился по ИК-спектрам и раньше статья Томпсона и сотр. [111], посвященная анализу фенолов, опубликована, например, в том же номере журнала, что и первая работа по спектрам углей [17]. В ранних исследованиях ИК-спектров углей [17, 18, 98] использовались почти все те же методы, которые применяются в настоящее время, а именно методы тонкого среза, суспензии в минеральном масле и деструктивной перегонки. За последние годы к ним прибавились исследования прессованных таблеток с галогенидами щелочных металлов и использование многих различных экстрактов. Кроме того, в исследованиях углей были применены методы нарушенного полного внутреннего отражения (НПВО) и ИК-люмннесценции. [c.164]

При изучении блоков, т. е. массивных образцов каучуков и резин, методом тонких срезов обнаружили, что в образцах, кристаллизовавшихся в условиях лереохлаждения, нет больших, хорошо сформированных сферолитов. Такие образцы имеют мелкозернистую кристаллическую структуру, хорошо видимую в поляризационном микроскопе. Размер кристаллических зерен —3 мк. Микрофотография среза с такой структурой, полученного из резины на основе быстрокристал-лизующегося наирита, представлена на рис. 9. В настоящее время изучается связь характера образующихся структур с условиями кристаллизации. Установление связи между структурой [c.265]

Описанные выше способы приготовления пленок имеют тот [едостаток, что при препарировании может изменяться структу-)а исследуемого полимера. Избавиться от этого недостатка позволяет метод тонких срезов. Его применяют в тех случаях, ког-[,а невозможно расплавить или растворить полимер без его азрушения, например при исследовании сшитых смол, эласто-1еров. [c.63]

Внутренняя часть вируса, наблюдаемая при использовании метода тонких срезов или при разрушении частиц, состоит ие структур рибопуклеопротеида (РНП), которые содержат 8 различных сегментов однопитчатой РНК. Рибонуклеопротеиды выглядят как гибкие жгутики [204] оказывается, что в зависимости от концентрации соли в процессе приготовления образца или метода окрашивания гибкость меняется [57, 94, 204]. Нити РНП иногда образуют петли на одном конце, а периодичность перемежаю-ш ихся глубоких и мелких бороздок наводит па мысль о том, чтс структура формируется питью, развернутой назад на себя и затем скрученной в двойную спираль. После обнаружения циркулярные форм был сделан вывод, что концы РНК не обязательно должны быть расположены на конце жгутика [94]. Рибонуклеопротеиды можно разделить по размерам на различные классы [68, 201, 212] считают, что каждый РНП содержит один сегмент РНК. Большие спиральные структуры, интерпретируемые как результат регулярной агрегации меньших сегментов, наблюдаются иногда в частично разрушенных вирионах [6, 11, 104, 183]. Эти структуры могут представлять упорядоченные комплексы 8 отдельных РНП. [c.32]

Прямым методом электронно-микроскопического анализа изучают также структуру различных композиционных материалов, полимеров и т. д., делая с них срезы. Ультратонкие срезы толщиной не более 200 нм получают с помощью специальных приборов — ультрамикротомов. Образец закрепляют на конце обогреваемого стержня, совершак )-щего колебательные нли вращательные движения. Прн движении образец подходит к ножу 1У Икротома, который снимает е него тонкий срез. За промежуток времени между двумя последовательными колебаниями стержень с образцом нагревается и расширяется. Регулируя скорость нагревания, можно получит срезы различной толщины. Образующиеся срезы надают на поверхностг, жидкости, откуда их переносят на сетки с пленкой-подложкой. [c.125]

Для электронно-микроскопического исследования полимеров применяются тонкие пленки, получаемые нз очень разбавленных растворов при выливании и па поверхность водь[, глицерина или другой жидкости, либо тонкие срезы (100—200А), получаемые при помощи ультрамикротомов. Кроме того, применяют так называемый метод реплик. [c.119]

Вопрос о локализации ферментов в структурных образованиях клетки (ядро, митохондрии, лизосомы и др.) является чрезвычайно важным, особенно в препаративной энзимологии, когда перед исследователем поставлена задача изолировать и вьщелить фермент в чистом виде. Сравнительно легко обнаружить локализацию фермента методами цито-и гистохимии. Для этого тонкие срезы органа инкубируют с соответствующими субстратами и после инкубации локализацию продукта реакции устанавливают добавлением подходящих реактивов до появления специфической окраски. [c.158]

Наилучшие результаты при определении степени диспергирования технического углерода в каучуке были получены при микроскопическом исследовании тонкого среза смеси в проходящём свете [27]. С помощью этого метода можно различать крупные агломераты каучука и технического углерода, наличие которых приводит к снижению качества резин. Вид образцов под микроскопом, в особенности, размер и число агломератов, имеет решающее значение для определения характера смешения и причин плохого диспергирования. [c.202]

Влияние на нейрональный захват моноаминов можно изучать также на -резах мозга [624]. Тонкие срезы (200-250 мкм) коры больших полушарий или полосатого тела мозга, приготовленные методом Мак Ильвеина [625], инкубируют в среде инкубации при 37 °С и аэрации кислородом с разгаями концентрациями тестируемого вещества. После [c.166]

В отечественной литературе часто встречается термин лента . Под лентой обычно понимают протяженные агрегаты, состоящие из ламелей. Таким образом, ламели являются независимыми структурными элементами, из которых могут быть построены более сложные надмолекулярные образования, в том числе и сферолиты. Радиальная структура сферолитов хорошо выявляется методами оптической и электронной микроскопии. При рассмотрении тонких срезов или пленок полимеров, содержащих сферолиты, в оптическом микроскопе в поляризованном свете на фоне общего свечения видны темные кресты. Такая картина наблюдается при исследовании неорганических и низкомолекулярных соединений. Появление темных крестов объясняется наличием многочисленных кристаллов, радиально исходящих из одной точки и имеющих кристаллографическую ось, направленную по радиусу из центра. Плечи темного креста параллельны направлению поляризации и создаются кристаллами в положении гашения. Кристаллы, имеющие другую ориентацию, кажутся при этом освещенными. Длительное время существовало мнение, что механические свойства полимеров в значительной степени зависят от размеров сферолитов. Действительно, на некоторые из параметров, характеризующих механические свойства полимеров (например, прочность), иногда существенно влияет величина сферолитов. Однако очень трудно доказать экспериментально, что между размерами сферолитов и механическими свойствами полимеров существует однозначное соответствие, так как при изменении размеров сферолитов обычно изменяются степень кристалличности, размеры и дефектность кристаллитов, [c.57]

Существующие методы оценки степени диспергирования основываются на том, что из отобранных по закону случайных чисел образцов изготавливаются тонкие пленки или микротомные срезы 40-43, 45 которые затем просматриваются в световом или электронном микроскопе. При выборе метода оценки следует предпочесть метод мнкротомных срезов, поскольку в этом случае исключается возможность дополнительной деформации и искажения формы частиц диспергируемой фазы, неизбежно сопровождающих операцию расплющивания образца между предметными стеклами микроскопа [c.195]

Из-за трудности препарирования образцов метод электронной микроскопии далеко не всегда может быть использован для анализа полимерных систем [59, 60]. Для рассматриваемых в настоящей работе сополимеров бутадиена и стирола легко осуществить контрастирование полибутадиеновой фазы с помощью 0364 [41]. Тонкие пленки толщиной в несколько десятков микрон отливают из разбавленных растворов и помещают в пары водного раствора 0з04. Аналогичной обработке подвергают тонкие срезы макроскопических образцов. Если представляет интерес морфологическая структура в плоскостях, перпендикулярных к поверхности пленки, такую пленку заделывают в материал одинаковой с ней твердости, в кото- [c.182]

Данные о деталях топографии дисперсного катализатора получают, исследуя очертания металлических частиц, видимых в микроскопе. Разработано несколько методик исследования нанесенных образцов. Мосс и сотр. [22] щироко использовали следующий метод образец катализатора помещают в смолу аральдит , ее отверждают при 330—350 Кис помощью ультрамикротома разрезают, чтобы получить тонкие срезы. Нанесенный катализатор можно также предварительно несколько измельчить и после этого диспергировать в жидкости (лучше с помощью ультразвуковой обработки). Если в качестве жидкой фазы использовать бутиловый спирт, легко смачивающий окисные носители, образец можно подготовить к работе, просто поместив небольшую каплю суспензии на углеродную пленку, расположенную на сетке-дерл<ателе образца микроскопа, и испарив растворитель. Можно также приготовить суспензию образца в 2%-ном растворе нитроцеллюлозы и дать испариться капле этой суспензии на предметном стекле покрыв предварительно стекло углеродной пленкой, сдвоенный слой отделяют в воде и переносят на сетку-держатель образца. Преимущество двух последних методов — их простота, кроме того, отпадает необходимость в применении ультрамикротома маловероятно, что измельчение существенно влияет на металлические частицы, однако только метод срезов обеспечивает сохранность исходной морфологии носителя. [c.408]

Метод охлаждения должен быть особенно полезен при изучении биологических и органических препаратов, которые без охлаждения разрушаются под действием электронного облучения. В качестве примера можно указать на целлюлозу, которая подвергается изменению уже через несколько секунд облучения при обычных условиях. Напротив, после охлаждения тонкого среза целлюлозы до —40° препарат не изменялся в течение многих минут наблюдения, что контролировалось элек-тронографичрски (фото 3) [27, 28]. [c.32]

До недавнего времени обычные способы определения толщины срезов приводили к сильно различающимся результатам, в некоторых работах считалось возможным получение очень тонких срезов —толщиной вплоть до 60 А [152]. В ряде работ авторы без достаточных к тому оснований полагали, что ими были получены и исследованы срезы толщиной 100—200 А. Проведенные в последнее время тщательные измерения толщины срезов интерференционным методом показали, что в действительности приходится работать со значительно более толстыми срезами [175, 176]. В указанных работах были получены вполне согласующиеся данные относительно толщины срезов. Особенно тонкие срезы, которые, плавая на поверхности жидкости, представляются серыми в отраженном свете, имеют толщину обычно более 300 А. Наиболее часто применяемые на практике срезы с серебряным блеском обладают толщиной в пределах 500—800 А, а с золотым блеском — более 1000 А. При резании пластических препаратов происходит деформация срезов —сжатие их па 30—50%, которое можно впоследствии устранить [176]. Физические проблемы, возникающие при получении срезов (пригодность ножа и препарата, способ установки ножа, величина поверхности среза, скорость подачи, толщина среза) критически рассмотрены Зитте [177]. [c.120]

Более надежные результаты дает сухое препарирование, предложенное Лукьяновичем и Радушкевичем 8]. Путем раскалывания зерен углей авторам удавалось получать тонкие клиновидные пластинки, на краях которых можно было наблюдать сохранившуюся структуру. В сахарных углях в согласии с адсорбционной характеристикой была отмечена сильно развитая переходная пористость с размерами пор порядка 100 А (фото 75). К числу основных недостатков способа раскалывания, равно как и метода ультратонких срезов применительно к изучению активных углей, относится невысокая контрастность изображения, что не позволяет получить на микрофотографиях наилучшего разрешения, возможного для микроскопа. Кроме того, возникает сложный вопрос о том, в какой степени проявляется эффект взаимного наложения изоб1ражений пор, находящихся в различных плоскостях угольной пластинки или среза. [c.241]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология