Нуклеиновые кислоты чистота препаратов

Методом электрофореза можно разделять белки, нуклеиновые кислоты, антибиотики, смеси лекарственных веществ в лекарственных формах. Электрофорез применяют для определения чистоты лекарственных препаратов. [c.364]

Преимущества данного прибора — его высокая эффективность, воспроизводимость результатов и высокая чистота получаемых препаратов. На рис. 12.2 показан прибор этого типа с горизонтальной камерой [79], а на рис. 12.3 приведен пример разделения компонентов нуклеиновых кислот методом электрофореза в свободном потоке. [c.286]

Мы являемся свидетелями исключительно важного по ожидаемым результатам прогресса в молекулярной биологии. Предпосылкой этого служит выпуск биологических препаратов небывало высокой чистоты. Одну из сторон этого процесса познания академик Н. П, Дубинин охарактеризовал так Использование... методов выделения из клетки химически чистых веществ, совместно с генетическим экспериментом, позволило понять, в каких группировках атомов внутри молекул нуклеиновых кислот реализуется явление наследственности . Теперь в распоряжении исследователей имеется внушительный ассортимент чистых аминокислот, нуклеотидов, в том числе меченных радиоактивными изотопами, ферментов, витаминов, гормонов, антибиотиков, ускорителей и угнетателей роста. [c.44]

Электрофорез и электроосмос находят широкое применение в медико-биологических исследованиях. Электрофорез используют в клинических исследованиях для диагностики многих заболеваний (рис. 12.14), для разделения аминокислот, нуклеиновых кислот, антибиотиков, ферментов, антител, форменных элементов крови, бактериальных клеток, для определения чистоты белковых препаратов. [c.510]

Генно-инженерные работы, как правило, начинаются с получения препаратов высокоочищенных нуклеиновых кислот. Критериями качества используемого метода очистки ДНК и РНК, как, впрочем, и других макромолекул клетки, является чистота конечного препарата, уровень фрагментации выделяемых молекул, общий выход, а также время, требуемое для проведения выделения нуклеиновых кислот. [c.40]

Удаление нуклеиновых кислот в некоторых случаях сопровождается заметной функциональной очисткой целевых ферментов [32, 109, 263]. Однако, по вполне понятным причинам выделение рестриктаз на этом этапе не завершается и для получения препаратов заданного уровня чистоты необходимо использование дополнительных приемов. Они будут рассмотрены в следуюш.ем разделе. [c.154]

Сочетание детергента с фенолом для выделения нуклеиновых кислот особенно широкое распространение получило в последнее время. Выделяемые этим методом препараты нуклеиновых кислот отличаются высокой степенью чистоты По всем известным критериям они вполне нативны, хотя и не всегда инфекционны. [c.163]

Особенно широко электронная микроскопия применяется в вирусологии. Именно с помощью электронного микроскопа стало возможным визуальное наблюдение большинства возбудителей различных болезней. Используя различные методические приемы электронной микроскопии, можно определить тип симметрии и размер вирусных частиц, морфологию и анатомию, а также строение внутрен-него компонента частицы, природу нуклеиновой кислоты. Электронно-микроскопические исследования необходимы нри изучении вопроса взаимодействия вируса с клеткой, который включает в себя механизмы адсорбции и проникновения вирусных частиц в клетку, кинетику формирования и внутриклеточного размножения вирусов. Кроме того, электронная микроскопия является одним из основных контролей при физико-химических исследованиях вирусов и особенно при их концентрировании и очистке для определения чистоты и гомогенности вирусных препаратов, а также для подсчета вирусных частиц. [c.212]

Основное затруднение при использовании всех методов подобного рода состоит в том, чтобы по количеству найденных в экстрактах реакционноснособных пентозы и дезоксипентозы рассчитать содержание ДНК или РНК. В связи с этим важно иметь в виду, что в пуриннуклеотидах сахара значительно более реакционно-способны, чем в пиримпдиннуклеотидах. Для устранения указанной трудности обычно производят следующее. В очищенных препаратах РНК дрожжей или ДНК зобной железы с известным содержанием фосфора определяют содержание пентозы или дезоксирибозы. Это дает возможность при определении содержания нуклеиновых кислот в новой ткани выражать полученные результаты в величинах содержания фосфора нуклеиновых кислот. Точность результатов зависит, очевидно, от чистоты и состава использованных в качестве стандарта препаратов. [c.103]

Ядерно-физические методы детектирования в ТСХ широко применяются для решения различных прикладных аналитических задач. В хроматографии меченые соединения часто используют в качестве внутреннего стандарта для онределения разрешающе способности того или иного метода, а также для калибровок в методе гашения флуоресценции. В химии и биохимии радиоактивные метки вводят в состав синтезируемых продуктов для проведения различных исследований, в частности, при усгановлении структуры вещества, чистоты препаратов, выхода целевых продуктов. Наиболее широко тонкослойный радиохрома-тографический анализ используют для исследования аминокислот, протеинов, углеводов, стерипов, стероидов, нуклеиновых кислот и липидов. Ядерно-физические методы детектирования зон на тонкослойных хроматограммах применяются также и в неорганическом анализе [9]. Меченые продукты используют как для аналитических, так и для препаративных целей. [c.122]

Определение последовательности оснований необходимо начать с выбора нуклеиновой кислоты и методов определения. Очень часто оба выбора взаимосвязаны, так как один метод может быть пригодным только для небольших молекул, другой окажется единственным эффективным методом в случае нуклеиновых кислот большего размера или отличающихся какими-либо структурными особенностями. Разумеется, пригодность препарата нуклеиновой кислоты во многом зависит от его чистоты. Желательно и фактически необходимо иметь молекулярно-гомогенную нуклеиновую кислоту с минимальным содержанием продуктов разрыва цепи. Уже небольшое количество (5-10%) таких примесей может препятствовать однозначному определению последовательности. Даже в случаях, когда требования к молекулярной гомогенности не столь высоки, переход от неоднозначных результатов к правильной структуре требует тем меньше экспериментов, чем более молекулярно-гомогенна нуклеиновая кислота. Рекомендуется также располагать препаратом, не содержащим примесей ненуклеотидного характера, таких, как нукле-азы и другие белки, которые могут мешать анализу и интерпретации полученных данных. [c.24]

Получение ультрафиолетовых спектров поглощения вирусов — метод в наши дни весьма доступный, так как регистрирующие спектрофотометры имеются сейчас почти во всех лабораториях. Для регистрации спектра требуется всего лишь 0,05—0,2 мг вируса, причем материал этот может быть использован повторно. По характеру кривой поглощения можно судить о содержании в вирусе белков и нуклеиновых кислот. Отношение величины поглощения при 260 и 280 нм ( 260/ 280)1 а также отношение ыакс/ мин характеризует относительное содержание нуклеиновых кислот и белков в пробе, а отсутствие изменений в характере спектра после дальнейшей очистки и фракционирования препаратов вируса служит дополнительным указанием на чистоту выделенного вируса (см. гл. IV, разд. В). [c.48]

Когда с помощью соответствующих методов удалось выделить РНК ВТМ, ее нанэзли на листья чувствительных к ВТМ растений. Вскоре на этих листьях появились поражения, которые нельзя было отличить от типичных вирусных поражений. Более того, из пораженных участков можно было снова выделить инфекционный вирус. Таким образом было показано, что инфекционность РНК-содер-жащего вируса обусловлена его РНК. Когда для этих исследований был использован очищенный препарат вирусной нуклеиновой кислоты, содержащий при оптимальных условиях очистки менее 1 субъединицы белка на 20 молекул РНК (см. ниже), впервые удалось неопроверн<имо доказать, что инфекционность вируса присуща исключительно его нуклеиновой кислоте. Затем при помощи тех же методов инфекционная РНК была выделена из большей части вирусов растений. Однако степень чистоты этих препаратов РНК обычно устанавливали не так тщательно, как в случае РНК ВТМ. [c.172]

Эффективность гибридизации in situ зависит от следующих параметров (I) частоты встречаемости нуклеотидных последовательностей-мишеней (т. е. числа специфических последовательностей нуклеиновой кислоты, присутствующих в цитологическом препарате) (II) чистоты зонда (III) удельной радиоактивности меченого зонда (IV) чувствительности метода гибридизации (V) усиления сигнала (VI) эффективности метода радиоавтографического выявления пробы. [c.305]

С помощью иммуносорбента для антигена могут решаться задачи, имеющие существенное значение для молекулярной биологии. Приведем в качестве примера выделение на иммуносорбенте типа сэндвич полирибосом, синтезирующих легкие полипептидные цепи (Е. Сидорова и др., 1978). Сорбент был нагружен антителами против легких цепей иммуноглобулинов мыши. Выделенные из клеток мышиной плазмацитомы полирибосомы для легких цепей (использовали технику градиентного центрифугирования) содержали растущие легкие цепи. Как следует из этой и других работ, растущие полипептидные цепи уже имеют, ио крайней мере, часть антигенных детерминант, характерных для данной полипептидной цепи, поэтому растущая цепь избирательно связывается с иммобилизованными антителами против этой цепи, а вместе с ней связываются с иммуносорбентом полирибосомы, содержащие мРНК для легких цепей. Теперь остается промыть иммуносорбент, путем фенольной экстракции выделить РИК и очистить мРНК общепринятым способом. Описанный принцип или аналогичные методы извлечения мРНК позволяют получить препараты определенной информационной нуклеиновой кислоты свыше 90% чистоты. [c.243]

Следует помнить, что в продажных препаратах солей могут содержаться примеси тяжелых металлов, которые образуют комплексы с нуклеиновыми кислотами, существенно изменяя их свойства. Поэтому, если нет уверенности в полной чистоте соли, ее раствор следует пропустить через колонку хелатной смолы (например helex-100 фирмы Bio-Rad ), объем которой должен быть приблизительно в 10 раз меньше, чем объем солевого раствора. Во избежание забивания колонки нераство-ряющимися кристаллами раствор надо предварительно отфильтровать ч рез стекловолокнистый фильтр GF/ . В градиентный раствор, как правило, вносят также ЭДТА в концентрации 1 — 10 мМ. Всю посуду рекомендуется промывать водой, очищенной от следов тяжелых металлов также на хелатных колонках. [c.249]

На основании этих данных строят график хроматографического опыта. На горизонтальной оси откладывают номера фракций или объем элюируемой жидкости, а на вертикальной оси — вышеуказанные характеристики фракций На графике также строят кривую нарастания концентрации (градиент) соли. Для качественной и количеств вейной оценки этого этапа очистки необходимо иметь характеристики исходной вируссодержащей жидкости до нанесения на колонку. На основании этих данных рассчитывают эффективность концентрирования и очистки виру-са на обменнике нроцент выхода вируса и процент очист-ки его по белку и нуклеиновой кислоте (см. раздел Кри терии чистоты вирусных препаратов ). [c.115]

Детергентный метод. Детергенты давно известны как вещества, эффективно растворяющие белки. Обычно в качестве детергентов используют додецилсульфат натрия (ДСН), дезоксихолат натрия (ДХН) и лаурилсульфат натрия. В 1955 г. Френкель-Конрат и Вильямс [334] применили додецилсульфат натрия для дезинтеграции вирусной частицы ВТМ. Этот простой метод имеет значительные преимущества, потому что отсутствуют различного рода жесткие воздействия на вирусную частицу (встряхивание, нагрев). Кроме того, детергенты, например дезоксихолат натрия, довольно эффективные инактиваторы нуклеаз. Недостатками этого метода является то, что после разрушения вирусных частиц очень сложно удалить додецилсульфат натрия, а иногда не удается разрушить вирусные частицы и получить препарат нуклеиновой кислоты высокой степени чистоты. В этих случаях необходимо провести экстракцию фенолом (см, ниже). Некоторые вирусы относительно устойчивы к детергентам при комнатной температуре. На-пркмер, полиовирус и вирус ящура не инактивируются при инкубации с 1 2%-ньгм додецилсульфатом натрия при температуре 20 [247 523]. Но при осторожном нагревании [176] или изменении pH [523, 816] вирусные частицы [c.158]

В последнее время после обработки проводят депро-теинизацию фенолом, что дает возможность получить препараты нуклеиновых кислот высокой степени чистоты [c.160]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология