Хроматография на носителях

Преимуществом колоночной хроматографии является возможность количественного фракционирования больших количеств веществ без превращения их в какие-либо производные. Однако хорошее разделение часто возможно лишь при малых скоростях элюирования, поэтому были разработаны новые виды колоночной хроматографии. Методы аффинной и адсорбционной хроматографии основаны на избирательной адсорбции молекул на нерастворимом адсорбенте, который содержит группы (молекулы), специфически взаимодействующие с молекулами подлежащих очистке соединений, например ингибиторы (для очистки ферментов) или антитела (для очистки антигенов) в настоящее время эти методы нашли широкое применение и для разделения углеводов. Невзаимодействующие с адсорбентом примеси удаляются, а связанный с адсорбентом сахар затем десорбируют способом, не приводящим к его разрушению. Десорбцию можно осуществить, изменяя pH, ионную силу среды или применяя соответствующий ингибитор взаимодействия, удерживающего вещество на адсорбенте. Для разделения ряда полисахаридов были использованы иммобилизованные формы (см. разд. 26.3.7.6) конканавалина А [40], являющегося фитогемагглютинином (лектином), который специфически взаимодействует с разветвленными полисахаридами определенного строения в настоящее время применяют и другие иммобилизованные фитогемагглютинины. Колоночная хроматография на носителях, покрытых полиароматическими соединениями [41], также находит применение для разделения полисахаридов. Благодаря достижениям в производстве носителей для жидкостной хроматографии под высоким давлением можно осуществить хроматографическое разделение быстро и избирательно описаны методы фракционирования небольших олигосахаридов, продолжающегося менее 1 ч [42]. [c.224]

Установление природы моносахаридов. Для установления природы моносахаридов, входящих в дисахарид, последний подвергается кислотному или ферментатив1НОму гидролизу. В полученной таким образом смеси моносахаридов последние идентифицируются одним из описанных выше методов. Чаще всего первоначальная оценка проводится с помощью бумажной хроматографии, которая очень подробно разработана для моносйхаридов. После этого смесь моносахаридов подвергают разделению методом препаративной распределительной хроматографии на носителе, в качестве которого чаще всего применяются целлюлоза, силикагель, уголь или их комбинации. Разделенные моносахариды идентифицируют в виде одного из кристаллических производных. [c.138]

И разделения смесей разного состава. Смеси органических веществ, которые ранее разделяли методом адсорбционной хроматографии в виде растворов, в настоящее время все чаще и чаще разделяют в газовой фазе. Так, считается целесообразным в виде паров разделять даже малолетучие вещества, имеющие, например, упругость пара 0,2—0,3 мм рт. ст. при 200—300° С [18]. В соответствии с этим адсорбционная хроматография в растворах в основном применяется сейчас для разделения лабильных веществ биохимического значения. С другой стороны, для смесей органических и неорганических веществ все большее значение приобретает распределительная хроматография [19—20] для веществ органических — газо-жидкостная и капиллярная, для веществ неорганических — распределительная хроматография на носителях типа силикагеля или бумаги, в том числе на гидрофобных или специально гидрофобизованных с неподвижной неполярной фазой ( метод обращенных фаз ). [c.317]

Хроматография на носителях, содержащих ионы серебра [c.167]

ГЖХ —наиболее эффективный метод разделения сложных смесей природных жирных кислот при этом существуют корреляции между временем удерживания и структурой жирной кислоты [421, 422]. Однако присутствие в смесях природных жирных кислот большого числа изомеров не позволяет провести полную идентификацию разделенных соединений, за исключением простейших смесей. Предварительная хроматография на носителях, содержащих ионы серебра [423], или препаративная ГЖХ [424] значительно облегчают идентификацию большинства разделенных жирных кислот. Такое предварительное разделение должно быть включено в регулярно используемую методику разделения и схему идентификации. Жирные кислоты с длинными и короткими цепями, а также незамещенные и окисленные жирные кислоты эффективно разделяются адсорбционной хроматографией и хроматографией на носителях, содержащих ионы серебра. Идентификация будет более полной, если использовать ГХ в сочетании с масс-спектрометрией [425]. [c.170]

Хроматографией на носителях данного типа можно разделить ацетаты диацилглицеринов на индивидуальные соединения, как насыщенные, так и содержащие до 12 двойных связей. Многие позиционные изомеры также разделяются с помощью этого метода 539]. Удается достичь разрешения, сходного с описанным выше для свободных ди- и триацилглицеринов. Ацетаты насыщенных диацилглицеринов и диацилглицерины, содержащие-до четырех двойных связей, хорошо разделяются в системе хлороформ— метанол (99 1) [540, 541]. Однако смеси более ненасыщенных диацилглицеринов можно разделить лишь в более полярных элюирующих смесях, таких, как смесь хлороформ — метанол (19 1) [539]. С помощью ТСХ в подобных системах можно фракционировать 1,3-диацилглицерины и их производные. Ацетаты 5П-1,2-диацилглицеринов, полученные из фосфатидилхолина легочной ткани были разделены на носителе, содержащем ионы серебра, путем двухстадийного элюирования [c.184]

Ионы натрия и остальных щелочных металлов разделяли с помощью колоночной распределительной хроматографии на носителе политрифторхлорэтилене с обращенными фазами [579]. В качестве неподвижной фазы использовали смесь иода, КН4Л и нитробензола, элюентами являлись вода, 1 М НС1 или 6 М НС1, содержащие иод и NH4J. Элементы элюируются в последовательности > Ка К > ВЬ Сб. Метод позволяет отделять натрий от цезия. [c.51]

Хроматография на носителях, содержащих ионы серебра, используется также для разделения 5п-1,2(2,3)- или 5и-1,3-диацил-глицеринов. Удобной системой для разделения свободных sn-1,2-диацилглицеринов является смесь хлороформ — этанол (93 7). При ТСХ в этой системе указанные диацилглицерины можно разделить на соединения следующих типов 00, 01, 11, 02, 12, 03 и 04, где О—4 показывают число двойных связей в молекуле [532, 533]. Поскольку фракционирование зависит от общего числа двойных связей и их распределения в остатке жирной кислоты, находящейся в положении 1 или 2 молекулы глицерина, в результате ТСХ можно получить более одной фракции, которые будут содержать соединения с одинаковой степенью ненасыщенности. Диацилглицерины, содержащие цис- и гракс-моноеновые кислоты, можно разделить, используя большинство элюирующих систем [534]. Перед проведением ТСХ рекомендуется модифицировать свободные диацилглицерины, так как они могут изомеризоваться при хроматографии на носителях, содержащих ионы серебра. Используются ацетильные [535, 536], грег-бутил-диметилсилильные [537] и иногда нестабильные ТМС-производ-ные [471, 538]. [c.184]

Хроматография на носителях, содержащих ионы серебра, используется для разделения жирных кислот в комбинации с колоночной хроматографией [397], ВЭЖХ [398] и особенно с ТСХ [399[. Метод основан на том, что между ионами серебра и двой- [c.167]

НЫМИ СВЯЗЯМИ в углеводородной цепи образуется комплекс с обратимым переносом заряда [400, 401]. Бэррет с сотр. [399] и Дадли и Андерсон [402] показали, что ТСХ на носителях, содержащих нитрат серебра, является эффективным методом для фракционирования смесей эфиров жирных кислот в соответствии с числом двойных связей в молекуле. Однако воспроизводимые результаты получаются только при относительной влажности, равной 42—44%. Выход эфиров с высокой степенью ненасыщенности (5—6 двойных связей) составляет примерно 80% потери происходят в основном из-за окисления. Хроматографией на носителях, содержащих ионы серебра, можно разделять также цис- и транс-изомеры и позиционные изомеры [399, 402, 403]. [c.168]

Гласс и др. [419] обнаружили, что фурансодержащие жирные кислоты обладают большой величиной Rf в случае разделения их на носителях с ионами серебра методом ТСХ. Их метиловые эфиры мигрируют вместе с метиловыми эфирами насыщенных и моноеновых жирных кислот элюирование проводят смесью гексан — диэтиловый эфир (3 1). Необходимо отметить, что 0кси-г ыс-енин0вые кислоты легко превращаются в кислоты, содержащие фурановое кольцо при обработке щелочью или в ходе хроматографии на носителях, содержащих ионы серебра [420]. [c.170]

Хроматография на носителях, содержащих ионы серебра (в большинстве случаев ТСХ), — один из основных методов разделения ацилглицеринов на индивидуальные соединения. Например, триацилглицерины, выделенные с помощью обычной адсорбционной хроматографии, можно далее фракционировать по содержанию двойных связей в молекуле с помощью ТСХ на носителях с ионами серебра [53, 522]. [c.183]

Культуральную жидкость гибридов собирают, когда погибнет около 80% клеток. Объединяют вместе несколько культур объемом 200 мл и клеточный дебрис отделяют либо фильтрованием, либо центрифугированием при 1000 д 15 мин. После этого к надосадочной жидкости добавляют сульфат аммония из расчета 350—400 г/л. Суспензию перемешивают на магнитной мешалке 1 ч при 4°С и затем еще инкубируют 18—24 ч при 4°С без встряхивания. В результате практически весь преципи-тированный материал оседает на дне. Осторожно удаляют >80% надосадочной жидкости, а оставшуюся взвесь центрифугируют при 5000 д 30 мин для осаждения фракции, содержащей иммуноглобулины. Осадок ресуспендируют в минимальном объеме ЗФР или ЗБР и диализуют против избытка того или другого буфера. Предпочтительнее использовать ЗБР, так как при этом существенно снижается опасность бактериального роста. После хроматографии на носителе 5ерЬасгу1 5-200 (для выделения IgG) или 5ерЬасгу1 8-300 (для выделения IgM) получают МА 95%-ной чистоты. [c.190]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология