Цистеиновая кислота, выход при

Приблизительные величины времен удерживания Ser(P) 19 мин Thr(P) 28 мин, Туг(Р) 64 мин. Цистеиновая кислота выходит в свободном объеме, другие аминокислоты не элюируются. [c.263]

Обсуждение. Порядок выхода аминокислот на этой колонке такой же, как и на длинной колонке, заполненной смолой иК-ЗО (см. рис. 6), с той лишь разницей, что содержащиеся в пробе цистеиновая кислота, таурин и мочевина будут элюироваться несколько раньше. При использовании колонки (26 см), заполненной смолой иН-40, величина отношения высоты впадины между пиками к высоте большего пика пары разделяемых аминокислот равна для пары треонин-серин 0,40, серин — глутаминовая кислота 0,23, глицин —аланин 0,10 и тирозин — фенилаланин 0,16. В условиях данного анализа цистин выходит между пролином и глицином, а гистидин — до лизина. После лизина вымываются аммиак и аргинин. Состав буферов приведен в табл. 2. [c.72]

Цистеиновая кислота, цистеин-5-сульфоновая кислота и другие сильнокислые вещества проходят через катиониты без задержки, и хотя при идеальных условиях возможно определить эти вещества в элюате, более успешные результаты получаются при использовании для их разделения анионитов. Шрам и др. [21 ] разработали способ окисления белков, содержащих цистеин, с последующей хроматографией цистеиновой кислоты на анионите дауэкс 2-Х10 при работе этим методом выход цистеиновой кислоты составляет 90 2%. В описанном ниже методе используется дауэкс 2-Х10, но можно применять и другие основные смолы, такие, как дауэкс 1 и IRA-400. [c.84]

К недостаткам метода следует отнести окислительное расщепление остатков триптофана и метионина и возможность других побочных реакций вследствие чего реакция цистина с надмуравьиной кислотой никогда не протекает количественно. Выход цистеиновой кислоты обычно не превышает 90%. [c.77]

Окислительное расщепление 8—5-групп в белках обычно проводят надмуравьиной кислотой. При этом остатки цистеина и цистина с выходом >90% превращаются в цистеиновую кислоту (15). Цистеиновая кислота стабильна при кислотном гидролизе при анализе на аминокислотном анализаторе элюируется непосредственно перед аспарагиновой кислотой [180]. Этот [c.90]

Расщепление С-пептидной связи триптофана путем озоно-лиза не применяется в химии белка из-за низкого выхода, окисления цистеина (в цистеиновую кислоту), метионина (в метионин-5,5-диоксид) и отчасти тирозина. [c.115]

После проведения окисления определяют аминокислотный состав исследуемого белка, контролируя прежде всего содержание цистеиновой кислоты. Выход цистеиновой кислоты должен составлять >85%, а выход 5,5-диоксида метионина (при наличии остатка метионина) не менее 95% триптофан при окислении разрушается полностью. При наличии хлоридов может происходить модификация тирозина, поэтому перед анализом рекомендуется удалять из образца ионы хлора. Колонку с дауэксом 2 (100 меш) в ацетатной форме промывают 3 М ацетатом натрия до отсутствия в элюате ионов хлора (контроль—реакция с нитратом серебра). Затем через колонку шропускают раствор белка (0,1 г белка на 1 мл объема ионита) [c.64]

По другому методу цистиновые межцепочечные мостики окисляются бромом или бромной водой, что также приводит к образованию сульфогрупп. В случае цистина выход цистеи новой кислоты количественный. Однако при попытках окислить цистин инсулина й папаина бромом без предварительного частичного гидролиза продукты окисления были получены с невысокими выходами [316]. Для повышения степени заг вершенности окисления белки предварительно можно подвергать денатурации или восстановлению. Из окситоцина — одного Из низших полипептидов, при окислении бромной водой образуется цистеиновая кислота с хорошим выходом одновременно наблюдается специфическое расщепление тиро-зилизолейциновой связи (см. ниже раздел Бромная вода). [c.171]

В ЭТОЙ форме они связываются с анионной группой сульфированной смолы. Элюция аминокислоты достигается либо повышением pH и, таким образом, смещением равновесия (2) влево, либо увеличением ионной силы, что приводит к конкурентному связыванию со смолой аминокислот и катионов элюата. Аспарагиновая, глутаминовая и цистеиновая кислоты [последняя образуется в результате окисления цист(е)иновых остатков (см. разд. 23.3.3)] элюируются легче всего, ибо это двухосновные кислоты. Лизин и аргинин, напротив, элюируются с трудом в силу того, что каждый из них несет в боковой группе протонированную группу. М.ежду этими крайними случаями располагаются остальные аминокислоты по мере того как увеличивается гидрофобное взаимодействие их боковых групп с ароматической структурой ионообменной смолы. Не удивительно, что ароматические аминокислоты обладают наибольшим гидрофобным связыванием и выходят лишь перед лизином и аргинином. С другой стороны, присутствие нейтральной полярной группы, такой как гидроксильная или амидная, уменьшает силу гидрофобного взаимодействия, так что серин, треонин, аспа--рагин и глутамин элюируются раньше лейцина, изолейцина и валина. [c.261]

Помимо пролина и оксипролина, цистин (цистеин) также образует с нингидрином желтое окрашивание, связанное с потерей цветности при Х=570 ммк. Для количественного анализа следует проводить окисление цистеина в цистеиновую кислоту с помощью брома в щелочной среде или надмуравьиной кислотой. Цистеино-вая кислота уже дает стабильную окраску со 100 % -м выходом [19]. [c.139]

Надмуравьиная кислота является сильным окислителем, и ее влияние на белок не ограничивается тем действием, которое она оказывает на остатки цистина. Триптофан под ее влиянием превращается в кинуренин и другие продукты разложения, метионин почти количественно превращается в метиоиинсульфон, тирозин также может изменяться. История использования этого реактива в работах, посвященных выяснению последовательности аминокислот, показывает, как по мере повышения размеров и сложности молекул исследуемых белков возникают новые трудности. Инсулин не содержит ни метионина, ни триптофана, но при действии надмуравьиной кислоты в присутствии хлорид-ионов образуется какое-то производное тирозина (возможно, хлорированный тирозин) [9]. Рибонуклеаза содержит еще одну аминокислоту — метионин однако, как показали работы лаборатории Рокфеллеровского института, в частичных гидролизатах рибонуклеазы легко обнаруживается метиоиинсульфон. Более того, оказалось, что удобнее иметь дело с полностью окисленным производным, чем с сульфоксидом или неизмененным метионином. Выход цистеиновой кислоты, образующейся при окислении белка, возможно не вполне количественный (см. величины, приведенные на стр. 84). Нельзя исключить участие остатков серина и треонина в реакции миграции ацила или формилирования под влиянием надмуравьиной кислоты (см. стр. 130). При наличии в белках триптофана возникает ряд затруднений этим объясняется то обстоятельство, что в последние годы исследователи постепенно отходят [c.97]

К раствору 24 г (0,1 моля) цистина ( Синт. орг. преп. , сб. 1, стр. 520) в холодной смеси 150 мл воды и 50 мл концентрированной соляной кислоты прибавляют в течение 40 мин. по каплям, время от времени перемешивая раствор, 80 г (25 мл, 0,5 моля) продажного брома. Температура смеси поднимается примерно до 60°. Полученный раствор, в котором содержится немного непрореагировавшего брома, выпаривают в вакууме на паровой бане. Окрашенный в темный цвет кристаллический остаток растворяют в 100 мл дестиллированной воды и отфильтровывают от небольшого количества аморфной нерастворимой примеси. Фильтрат концентрируют, выпаривая до объема 65 мл на водяной банё, и оставляют кристаллизоваться в течение ночи в холодильном шкафу. Кристаллы отфильтровывают с отсасыванием и тщательно промывают несколькими порциями 95%-ного этилового спирта (всего около 100 мл), причем промывную жидкость собирают отдельно. Кристаллы сушат в вакууме над фосфорным ангидридом. Для получения второй порции кристаллов промывную жидкость разбавляют равным по объему количеством воды, выпаривают разбавленный раствор до полного удаления спирта (примечание 1), прибавляют остаток к маточному раствору и выпаривают соединенные вместе растворы досуха на водяной бане. Остаток растворяют в 30—40 мл воды и обесцвечивают с помощью 0,5—1,0 г активированного древесного угля, после чего раствор упаривают до Ъ мл и по охлаждении обрабатывают 30 мл 95"о-ного этилового спирта. Полученные таким образом кристаллы отфильтровывают, промывают этиловым спиртом и сушат, как было указано выше (примечание 2). Общий выход чистого моногидрата цистеиновой кислоты составляет 30,5—33,5г (81—90% теоретич.). Вещество плавится с обильным выделением газа при 278° (289° исправл. примечание 3) и обладает удельным вращением [а] в + 9,36° (6 о в воде). [c.498]

Для гидролиза относительно чистых белков с низким содержанием углеводов успешно использовали различные разбавления образцов вещества. Они варьируют от приблизительно 10 мл 5,5 н. соляной кислоты на 1 г белка, как описано Тристрамом [41] в стандартной методике, использованной в лаборатории Чибнелла, до 500 мл 6 н. соляной кислоты на 1 г белка [35]. Принцип использования высоких разбавлени образца в гидролизующей кислоте с целью уменьшения деструкции аминокислот в присутствии большого избытка углеводов был впервые исследован Дастином и сотр. [68]. Они показали, что при нагревании любой из 15 аминокислот в присутствии большого избытка углеводов (крахмала или глюкозы) в значительном объеме 6 и. соляной кислоты (100—200 мл г углевода) выход аминокислоты уменьшается не более чем на 3%. Триптофан, цистин и метионин менее устойчивы в этих условиях. Гидролиз при высоком разбав.пении был успешно применен для анализа аминокислот в пищевых продуктах, содержащих мало белка и много углеводов [69]. В таких условиях 20— 40% метионина превращается в сульфоксид, но сульфона образуется менее 2%. В присутствии больших количеств углеводов на ранних стадиях элюирования кислых и нейтральных аминокислот с ионообменных смол часто обнаруживается пик, дающий с нингидрином розовое окрашивание. Этот пик следует за цистеиновой кислотой, но предшествует метионин-сульфоксиду и, по-видимому, соответствует продукту расщепления сахаров. [c.133]

Эти различия объясняются не только сортовыми, видовыми или технологическими различиями, а главным образом условием проведения гидролиза пищевого продукта. При стандартном кислотном гидролизе (6н. НС1, ПО—120°С, 22—24 ч) происходит частичное разрушение некоторых аминокислот, в том числе треонина, серина (на 5—10%) и особенно метионина (30—60%) и цистина 56—60% (см., например, работу [14]), а также практически полное разрушение триптофана [16]. Этот процесс усиливается в присутствии больших ( лее 50% на сухую массу) количеств углеводов в продукте. Несколько уменьшить это разложение можно за счет более сильного разбавления образца серной кислотой (например, вместо 100 мг белка берут 2—5 мг), но границы этого разбавления определяются чувствительностью прибора и в большинстве случаев они не могут быть очень большими. Для количественного определения метионина и цистина рекомендуется проводить предварительное окисление их надмуравьиной кислотой [14, 24]. При этом цистин превращается в цистеиновую кислоту (цветовой выход 1,75), а метионин — в метионин-сульфон (цветовой индекс — 0,8), которые весьма устойчивы при последующем кислотном гидролизе. Окисление проводится по методике, описанной в работах [12, 14], при температуре 4° С в темноте в течение 1 — 10 ч из расчета 1 мл надмуравьиной кислоты на 2—5 мг белка. Немедленное и тщательное удаление надмуравьиной кислоты после окончания гидролиза (например, в роторе или вакуум-эксикаторе над NaOH) предотвращает потери. [c.282]

СНз Вг Однако тирозин превращается в 3,5-дибромо-производное, цистеин окисляется в цистеиновую кислоту, метионин — в метионин-5-оксид, идет модификация остатка гистидина. Оптимальными условиями расщепления по триптофану являются следующие 3 экв. трибромокрезола, рП 3, 20 С, 5—15 мин. В случае лизоцима селективное расщепление идет с выходом 5—60%. Принято считать, что реакция идет по механизму окислительного галогенирования, как и в случае Ы-бромосукцинимида. [c.114]

Первоначально методика включала нагревание белка с гидразином при 100 °С в течение 10 ч [1]. При этих условиях цистин и цистеин (но не цистеиновая кислота, 5-карбоксиметил-цистеин или S-аминоэтилцистеин) полностью разрушаются [11] Arg разрушается и частично превращается в Огп и гуанидин [65]. Многие другие остатки частично разрушаются из-за высокой температуры реакции [11, 12]. Сообщалось, что добавление кислого катализатора (сульфат гидразина) к безводному гидразину позволяет проводить реакцию в гораздо более мягких условиях (60—80 °С) [46] при этом повышается выход С-концевых аминокислот. Для улучшения выхода использовали Н+-форму ионообменной смолы амберлит G-50 [12]. Показано, что скорости отщепления различных С-концевых аминокислот, а так- [c.493]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология