Агарозы модифицированные

НИИ. Однако белки содержат такие гидроксилы только тогда, когда в их состав входят простетические группы, особенно углеводы. Следовательно, адсорбенты на основе фенилборной кислоты предоставляют альтернативный способ связывания гликопротеинов помимо более традиционного метода с использованием агарозы, модифицированной лектином. [c.190]

Получение аффинных сорбентов. В ряде случаев необходимо или удобно получать аффинные сорбенты для конкретной цели. Это можно сделать с помощью реакции между выбранным лигандом и либо активированным производным агарозы или другого твердого носителя, либо модифицированной агарозой, несущей спейсер, оканчивающийся реакционноспособной группой. В разд. Материалы для получения аффинных сорбентов перечислены коммерчески доступные активированные агарозы с присоединенными спейсерами. Используя их в качестве исходного материала, можно легко получить аффинный сорбент в мягких условиях прямыми методами. [c.445]

МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ АГАРОЗЫ [c.18]

Для повышения эффективности сорбции может быть также использована модификация носителя гидрофобными соединениями. Связывание фермента с такими носителями обеспечивается за счет гидрофобных взаимодействий между модификатором и неполярными участками на поверхности белковой глобулы. При этом способе иммобилизации применяются те же носители, которые используются при гидрофобной хроматографии белков. В первую очередь к ним относятся различные агарозы, ковалентно модифицированные гидрофобными группами (алкильными, фенильными и т. п.). На конце такой гидрофобной ножки может присутствовать также и заряженная группа, благодаря чему обеспечивается взаимодействие с ферментом одновременно за счет электростатических и гидрофобных сил (рис. 4, в). При таком многоточечном связывании сорбция многих ферментов протекает практически необратимо. Эффект многоточечного связывания достигается также при использовании полисахаридных носителей, модифицированных танином — природным дубящим веществом, содержащим большое число фенольных групп. Танин может быть ли о адсорбирован на носителе, либо связан с ним химически. Удерживание фермента на [c.53]

В модифицированном методе [873] оба этапа электрофореза проводят на стеклянных пластинках размером 8ХЮ см. Для антигенов вырезают четыре круглые лунки. На первом этапе электрофореза, осуществляемом при напряжении 10—15 В/см, применяют охлаждение. После завершения электрофореза по краям пластинки удаляют слой геля шириной 10 мм, а остальной гель разрезают на четыре полоски, параллельно направлению электрофореза. Тонким лезвием бритвы каждую полоску переносят на стеклянную пластинку такого же размера, как и первая (рис. 90,5). Полоску геля помещают на край пластинки, а ее свободную поверхность заливают агарозой, содержащей антитела. После того, как второй гель застынет, проводят электрофорез во втором направлении чри низком напряжении (2— 2,5 В/см) в течение 18—22 ч. [c.256]

Таблица 9. Стандартные условия пульс-электрофореза 1%-ная агароза, 12°С, модифицированный ТВЕ, конфигурация электродов, представленная на рис. 2,

Модифицированный метод бляшек с использованием агарозы [c.118]

Другим примером существенного влияния пористости геля на емкость аффинного сорбента является зависимость количества сорбированного трипсина на 6 и 4%-ной агарозе, модифицированной ж-аминобепзамидином, от концентрации трипсина [24]. Пред- [c.66]

Согласно Шальтье [48], гидрофобная хроматография была первым из используемых методов очистки белков и других био- цогических молекул. Для целей разделения можно использо вать агарозу, модифицированную, напрпмер, углеводородами, образую- [c.151]

Рис. 4.53. Биполярные ионообменные адсорбенты на основе геля агарозы [69]. А. Агароза, модифицированная сульфаниловой кислотой. Мало вероятно, чтобы атом азота в остатке сульфаниловой кислоты был протонирован при pH выше 4. Б. Аргининагароза.

Элюция с использованием детергентов — пожалуй, наиболее распространенный способ хроматографического фракционирования белков на гидрофобно-модифицированных гелях агарозы. В обеспечении высокой избирательности хроматографического процесса, а тем самым — эффективной очистки нужного белка, ваншую роль играет выбор детергента с учетом особенностей его взаимодействия с очищаемым белком. [c.183]

Нерастворимый носитель. Наиболее часто используемый носитель-это зернистая 4%- или 6%-ная агароза, которая может быть стабилизирована поперечным сшиванием эпихлорогидрином, дивинилсульфоном или бисэпоксидом (бисоксираном). Носитель на основе целлюлозы обычно используется для олигонуклеотидных лт-андов, например олиго-(1Т-целлюлоза. В числе других используемых носителей-поперечно-сшитый декстран, полиакриламид, гидроксиалкил-метакрилатные полимеры, модифицированные стекла и силикагели. [c.444]

Понятие молекулярное сито с большим правом, чем к цеолитам, можно отнести к полупроницаемым мембранам. В первых работах по диализу мембранами служили пленки животного происхождения [7]. В настоящее время для диализа применяют преимущественно пленки из целлюлозы (Visking или Kalle). Эти пленки проницаемы в основном лишь для небольших молекул. Именно поэтому диализ вот уже в течение нескольких десятилетий используется как стандартный метод обессоливания высокомолекулярных соединений в водных растворах. Набухание мембран в растворе хлористого цинка или механическое растягивание значительно увеличивают их проницаемость [8]. Через такие мембраны довольно быстро могут диффундировать даже белки с молекулярным весом до 100 000 [8—10]. Из агара и агарозы получают мембраны, которые в набухшем состоянии полупроницаемы для белков [11] и даже для вирусов [12]. Изме- рение скорости диффузии через модифицированные мембраны из целлюлозы, обладающие ярко выраженной избирательностью, открывает новые возможности для изучения пространственной структуры сахаров [13], аминокислот [14] и пептидов [15]. Для такого тонкого разделения Крэйг предложил термин дифференциальный диализ [16]. [c.13]

Ионообменники на модифицированном пористом стекле Gly ophase G заменяют аналогичные ионообменники на основе органических гелей — сефадексов, агароз и т. п. (см. разд. 86, 87). Преимущества таких ионитов обусловлены жесткостью структуры пористого стекла. [c.214]

Подобным образом Нишикава и др. [24] сопоставили гели, содержащие различные концентрации аффинанта, с учетом распределения лиганда в геле и рассмотрели как емкости по ферменту на единицу геля, так и аффинности гелей к ферменту. Концентрация лигандов в геле влияет на оба эти свойства, но не в одинаковой степени. Гранулы геля с высокой концентрацией аффинанта обладают высоким сродством и соответственно высокой емкостью в колонке. Если гель разбавить немодифицированной агарозой, концентрация лиганда внутри геля в модифицированных [c.77]

Ряд алкилагароз со структурой СНз(СН2)пМН—сефароза (где п принимает значения от О до 7), и-аминоалкилагароз со структурой ЫН2(СН2)п ЫН—сефароза (где п — от 2 до 8) характеризуется близким содержанием алкильных боковых цепей на гранулу геля [15, 49]. В одинаковых условиях (pH, ионная сила, состав буферного раствора и температура) способность СНз(СН2)пЫН—сефарозы удерживать фосфорилазу Ь зависит от длины углеводородных цепей. При хроматографии на производных сефарозы (я = 0 или 1) фосфорилаза Ь выходила из колонки с фронтом растворителя при п = 2 происходила задержка фермента, а при п = 3 фермент адсорбировался. Элюирование фосфорилазы Ь с модифицированной сефарозы (п = 3) возможно с помощью деформирующих буферных растворов, которые, как было показано, приводят к обратимым структурным изменениям фермента. На производном сефарозы с л = 5 связывание фосфорилазы было настолько сильным, что фермент не элюировался с колонки, даже когда pH деформирующего буферного раствора понижался до 5,8, хотя деформирующая способность такого буфера намного выше. Освободить фосфорилазу Ь из комплекса с этим производным можно только в неактивной форме после промывки колонки 0,2 М уксусной кислотой. Сама агароза содержит отрицательные заряды, а связывание алкил- или ариламинов на активированной бромцианом агарозе вводит в гель положительные заряды (разд. 8.2.4). В связи с этим йост и др. [28] обращали внимание на то, что на сефарозе с алкиламинами, прикрепленными после предварительной активации носителя бромцианом, связывание белков происходит большей частью при pH выше изоэлектрической точки выделяемых белков. Поэтому допускалось, что в этих случаях электростатические взаимодействия с положительно заряженной Ы-замещенной изомочевиной более существенны для связывания, чем гидрофобные взаимодействия с гидрофобной боковой цепью. Тем не менее гранулы агарозы не связывают фосфорилазу Ь, пока к ним не будут прикреплены алкильные боковые цепи некоторой минимальной длины. Кроме того, отмеченные выше заряды в равной мере присутствуют во всех членах гомологического ряда, и, следовательно, они не могут быть причиной различий в степени [c.152]

Введение заряженной группы в конец углеводородной цепи не только приводит к появлению ионных взаимодействий, но и уменьшает, кроме того, гидрофобные свойства колонки. В некоторых случаях сорбированные белки можно освободить из комплекса с алкилагарозами путем увеличения ионной силы элюента или путем изменения его pH. В этих случаях Шальтье считает возможным, что ионные взаимодействия прямо ответственны за сорбцию макромолекул на модифицированной агарозе. В белках, конформационное и агрегационное состояния которых сильно зависят от внутримолекулярных ионных взаимодействий, вероятно, ионная сила и pH влияют на структуру молекулы и поэтому изменяют размер и доступность их гидрофобных карманов . [c.153]

Для солюбилизации модифицированных агароз предложено несколько методов, позволяющих количественно спектрофотометриро-вать иммобилизованные аффинные лиганды [47]. Гели агарозы могут быть растворены в горячей воде, немодифицированная агароза растворяется при 60 °С. При последующем охлаждении высококонцентрированных водных растворов агарозы получаются непрозрачные растворы, в то время как более разбавленные растворы становятся вязкими, но остаются прозрачными. Эти эффекты не зависят [c.245]

Иммунологическая количественная оценка компонентов после гель-фильтрации возможна главным образом при осуществлении несколько модифицированного метода Манчини [58]. В этом случае после гель-фильтрации проводят иммунодиффузию в геле агарозы, содержащем антитела. Существенным моментом в этой методике является создание надежного контакта геля агарозы с гелем сефадекса при сохранении полученной картины разделения. Это удается осуществить, осторожно помещая 1,5%-ный гель агарозы размером 10-10 см на слой сефадекса. По-видимому, этот метод найдет применение при количественном анализе белков, способных к образованию полимеров. На рис. 8 приведен пример количественного анализа высокомолекулярного секреторного JgA в присутствии мономера JgA [59]. [c.272]

Аркел и др. [146] анализировали мукополисахариды микро-электрофоретическим методом Виеме [147, 148]. Поскольку поступающий в продажу агар загрязнен красителями, по модифицированной [149] методике Араки [150] получают агар, не содержащий сульфата (агарозу). Электрофорез проводят в 0,9 %-ной агарозе с использованием барбитуратного буферного раствора с pH 8,6 при напряженности 20 В/см. Электрофоретическое разделение завершается примерно через 7 мин. После этого тонкослойные пластинки погружают на час в 0,1 %-ный раствор цетавлона, чтобы осадить мукополисахариды. Чтобы условия осаждения были оптимальными, Аркел и сотрудники рекомендуют использовать цетавлон в физиологических солевых растворах. Зоны разделенных соединений обнаруживают, окрашивая пластинки толуидиновым синим. С этой целью 40 мг красителя растворяют в смеси 20 мл дистиллированной воды и 80 мл сухого ацетона. Пластинки выдерживают в этой смеси 15 мин, после чего ополаскивают 1 %-ным раствором уксусной кислоты до обесцвечивания фона. Эти же авторы описали другой метод окрашивания, а также метод окрашивания белков и мукополисахаридов. [c.574]

При разделении макромолекул используют модифицированные природные полимеры, которые по ионообменной емкости и другим свойствам обычно более пригодны для этой цели, чем искусственные смолы. В случае декстрана и агарозы можно контролировать степень их поперечного связывания и размеры частиц, регулируя тем самым сжатие и набухание ионообменников и обеспечивая их высокую емкость для макромолекул при высоких и средних скоростях потока. [c.198]

Для иммобилизации ферментов используют захват их полиакриламидным гелем и иными полимерами при полимеризации составляющих их мономеров, а также захват гелями, возникающими при желатинизации природных полимеров, например полисахаридов морских водорослей присоединение ферментов к целлюлозе, сефарозе, сефадексу, крахмалу, декстрану, агарозе и другим полисахаридам, активированным цианбромидом и другими агентами привязку ферментов к стеклянным бусинкам через диазосоединение ковалентное связывание фермента с азидными и гидразидными группами сополимера акриламида и акрилгидразина (энзакрила) и других носителей соединение фермента с гидратированными оксидами металлов, производными поливинилового спирта, альдегидными и диазогруппами модифицированных фенольных полимеров, силикагелями и многими другими материалами. [c.141]

Смотреть страницы где упоминается термин Агарозы модифицированные: [c.64] [c.262] [c.111] [c.170] [c.120] [c.180] [c.185] [c.354] [c.448] [c.209] [c.125] [c.186] [c.211] [c.247] [c.190] [c.192] [c.77] [c.77] [c.15] [c.116] [c.92] [c.108] [c.142]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология