Электроэндосмос

Кроме избыточных положительных ионов, мы имеем, конечно, также и другие носители электричества, которые обычным образом принимают участие в проведении тока и более или менее затушевывают описанное действие уже по той причине, что положительные и отрицательные ионы вообще не одинаково гидратированы. Поэтому концентрированные растворы мало пригодны для таких опытов. Здесь на электроэндосмос [c.154]

Рассмотрим теперь, что происходит, если жидкость проходит через пленку под влиянием приложенного электрического заряда, т. е. в случае электроэндосмоса. Это влияние наблюдается в том случае, если коррозия начинается в месте образовавшихся в пленке трещин при этом между отдельными участками пленки возникает разность потенциалов. Направление движения воды зависит 274 [c.274]

Фиг. 86. Механизм разрушения покрытия при электроэндосмосе.

Большинство работ по ИЭФ в геле выполнено с применением полиакриламидного геля, так как остальные употребляемые при электрофорезе гелеобразующие вещества содержат заряженные группы и, следовательно, при работе с ними возникает электроэндосмос, влияющий на результаты разделения. Правда, недавно появилась одна статья [631], в которой описаны способ очистки агарозы на QAE-сефадексе и применение этого очищенного препарата для ИЭФ в геле. [c.147]

Для получения воспроизводимых результатов очень важно выполнять следующие условия [353]. Изотахофорез следует проводить в трубке с совершенно одинаковым по всей ее длине внутренним диаметром, при постоянном составе ведущего электролита необходимо соответствующим образом предотвратить поя вление электроэндосмоса и гидродинамического тока жидкости, а также обеспечить равномерное охлаждение трубки буферная емкость ведущего электролита должна быть достаточно большой, чтобы препятствовать смещению зон pH в обратном направлении по сравнению с движением зон исследуемых веществ. [c.171]

Агароза — для большинства видов электрофореза требуется агароза с низким электроэндосмосом, ее же можно использовать для реакций диффузии. [c.199]

Электроосмос (электроэндосмос). Это явление обусловлено возникновением относительного заряда между молекулами воды буферного раствора и поверхностью носителя. Ионизация групп носителя и поверхностная адсорбция ионов буфера обычно приводит к образованию из молекул воды ионов гидроксония (Н3О ). Так как эти ионы заряжены положительно, они движутся к катоду, захватывая растворенные нейтральные вещества и убыстряя движе- [c.118]

Электрокинетические эффекты [1]. Относительное движение жидкости и твердого тела сопровождается электрическими явлениями, которые получили название электрокинетических. Эти явления обусловлены существованием разности потенциалов на поверхности раздела между двумя взаимно переме-щакэщимися фазами. Эта разность потенциалов носит название электрокинетического или чаще зета-потенциала, поскольку она обычно обозначается буквой С греческого алфавита. Если предположить, что потенциал обусловлен наличием двух электрически заряженных слоев противоположного знака НЗ. границе раздела твердое тело / жидкость, то при наложении электрического поля вдоль этой границы должно происходить-смещение одного слоя относительно другого. Если твердая фаза неподвижна, например представляет диафрагму, а жидкость может двигаться, то при наложении поля жидкость будет стремиться протекать сквозь поры диафрагмы. Направление движения жидкости должно зависеть от знака заряда жидкости по отношению к заряду твердого тела. Такое движение жидкости сквозь поры диафрагмы под влиянием наложенной э. д. с. было открыто в 1809 г. Рейссом и носит название электроэндосмоса или электроосмоса. [c.693]

Попытки применения пористых перегородок для более полного разделения слоев, как показали еще измерения Г итторфа, не приводят к благоприятным результатам, так как около них происходит добавочное изменение концентрации, вызванное электроэндосмосом. Помимо метода Гитторфа для из- [c.284]

Между электрокинетическим движением и движением в электрическом поле любой заряженно, частицы (например, иона в растворе) нет никакого принципиального различия. Эго признано многими авторами, но упор, который делают Мак-Бэйн и Лэйнг на этой тождественности, является вполне своевременным, так как некоторые авторы в своих работах, посвящённых -пoтeнциaлy начали терять из вида это обстоятельство. Если заряженными телами, движущимися в жидкости под действием электрического поля, являются малые частицы — ионы, то это движение называется электролитической миграцией и изучается в электрохимии. Разностям потенциалов вблизи и вокруг ионов уделялось мало внимания, пока не появилась теория Дебая-Гюккеля, после чего их значение получило должное признание. Если заряженные тела несколько крупнее — например, коллоидные частицы или частицы в суспензиях — явление называется катафорезом . В случае достаточно крупного твёрдого тела, соприкасающегося с жидкостью (капиллярная трубка, наполненная жидкостью или твёрдая перегородка, пропитанная жидкостью), принято говорить о движении жидкости, а не твёрдого тела, и это движение называется электроэндосмосом . Наконец, существуют также явления, обратные эндосмосу и катафорезу потенциалы истечения — электрические поля, возникающие при пропускании жидкости через капилляр или пористую перегородку, и эффект Дорна — возникновение градиента потенциала при падении взвешенных в жидкости частиц. Эти явления также принадлежат к разряду электрокинетических. Методы измерения скорости электрокинетического движения подробно описаны в некоторых из цитированных выше обзоров. К числу этих методов принадлежат (при катафорезе) различные виды У-образных трубок, в которых наблюдается перемещение границы суспензии методы, связанные с переносом, аналогичные методу Гитторфа по измерению числа переноса в электрохимии микроскопические кюветы, в которых наблюдается движение отдельных частиц с учётом движения дисперсионной среды в обратном направлении. Весьма остроумный, хотя и реже упоминаемый в литературе, метод Самнера и Генри заключается в наблюдении [c.452]

Еще в 1907 г. Фильд и Тигре [24] изучали электромиграцию коллоидов в агаровом геле, но серьезное применение этого метода к проблемам исследования структуры белка относится к 1946 г. когда Консден, Гордон и Мартин [25] исследовали смесь пептидов из гидролизатов шерсти. Гордон и др. [26] разработали метод для разделений белка в 1 6-ном агаровом геле. Особенностью их прибора является простое приспособление для непрерывного орошения буфером и эффективное охлаждение нижней поверхности тонкой стеклянной пластинки, которая служит опорой агарового геля. Когда используют буферные растворы с ионной силой ниже 0,05, на границе геля со стеклом возникает быстрый электроэндосмос. Другой недостаток метода заключается в трудности удаления из элюпро-ваннык белков последних следов агара. При помощи устройства, показанного на фиг. 86, можно добиться выхода белков из геля. Участок агара, содержащий белок, помещают на полоску влажного целлофана, лежащего в лотке, и концы целлофана приподнимают, оставляя вдоль края геля пространство шириной около 1 см. Белки перемещаются в электрическом поле в буфер, находящийся в пространстве между барьером из целлофана и гелем. [c.258]

По мнению Элма и Киттенбергера, в результате электроэндосмоса окрашенными образцами поглощается более 90% воды. [c.275]

При дроведении электрохимического восстановления на твердых катодах рекомендуется следующая методика. Сначала составляют католит в соответствии с условиями опыта. Если предполагают применять кислый католит, раствор составляют из кислоты желаемой концентрации, обычно из серной кислоты в воде или в неводном растворителе цоследний берут с водой или без нее, если органическое соединение нерастворимо в воде. Обычно для этой цепи применяют смеси этилового спирта и воды. Отношение количества растворителя к количеству воды можно изменять. Анопитом должна служить 10%-ная серная кислота, за исключением случаев работы с неводными растворами, когда вода не должна проникать в католит. Более крепкие растворы при нагревании выделяют пары, вызывающие чихание и кашель. Если восстановление предполагают проводить в щелочном растворе, католит желаемой концентрации готовят из едкого натра или едкого кали или из солей путем растворения в воде или в этиловом спирте спирт берут с водой или без нее, как и в случае кислых растворов. Уксуснокислый калий (без примесей ионов кальция и магния) является весьма удовлетворительной солью для применения в смесях спирта и воды. Он хорошо растворим в этиловом спирте (33 г/100 мл), следовательно, можно применять концентрированные растворы. Анолит для щелочного восстановления рекомендуется готовить из 40%-ного поташа. Найдено, что растворы низ- Ших концентраций подвергаются электроэндосмосу сквозь диафрагменный пористый сосуд в католит, вызывая высаливание органического соединения, растворенного в католите. [c.24]

Отслаивающее действие щелочи, которое позволяет пленке удаляться с поверхности при поглощении воды, возможно, объясняется так же, как это уже было сделано при рассмотрении щелочного отслаивания. Гей высказал предположение, что водорастворимые включения, присутствующие в слое краски, переходят в воду за счет осмотического давления, однако опыты Мэйна указывают на то, что здесь имеет место скорее электроэндосмос, а не обычный осмос, и что это явление требует выяснения, поскольку, если считать, что продвижение воды происходит за счет электроэндосмоса, то коррозия должна иметь место до возникновения пузырей, поскольку для движения воды здесь требуется электрический ток [34]. Последние [c.509]

ИЭФ можно проводить также в установке, созданной Йертеном [565, 566] для электрофореза со стабилизацией зон при помощи вращения разделительной колонки со скоростью 40 об/мин (см. рис. 6). Фокусирование осуществляют в кварцевой трубке, покрытой слоем метилцеллюлозы для предотвращения электроэндосмоса. Белковые полосы регистрируют путем сканирования трубки в ультрафиолетовом свете. [c.145]

Другой путь выявления белковых зон после ИЭФ — это сканирование гелей в ультрафиолетовом или видимом свете. Наибольшей точности удается достигнуть, понвидимому, при прямом сканировании гелей в процессе ИЭФ [215]. ИЭФ проводят в кварцевой трубке, покрытой изнутри метнлцеллюлозой для предотвращения электроэндосмоса [565, 566] и присоеди- [c.157]

Большинство преципитирующих антител относится к классу иммуноглобулинов О (1дО), обладающих лишь очень слабым отрицательным зарядом при pH 8—9. Поэтому электроосмоти-ческий поток смещает 1 0 к катоду. Электроэндосмос заметно уменьшается при замене агара агарозой. Путем подбора определенных соотношений агара и агарозы можно регулировать скорость эндосмоса, создавая тем самым оптимальные условия для электросинереза. Очевидно, что антитела следует помещать ближе к аноду, а антиген — ближе к катоду. Если расположить рядом несколько лунок с антигенами, то последние можно сравнивать между собой подобно тому, как это делается в методе двойной иммунодиффузии [186]. Видимые линии преципитации образуются в течение 1—2 ч. Избыток реагентов удаляют, продолжая электрофорез после образования преципитатов. При этом нет надобности отмывать гель перед окрашиванием, что позволяет в течение 3—4 ч получить полную картину окрашенных полос преципитации. [c.247]

Как уже отмечалось, ацетат целлюлозы является вполне подходящей средой для иммунопреципитации, поэтому его можно использовать также для электроиммуноанализа и в меньшей степени для перекрестного иммуноэлектрофореза. Существенное различие между ацетатом целлюлозы и агарозой состоит в том, что в первом практически отсутствует электроэндосмос. В результате при pH 8,6 большинство антител будет двигаться в электрическом поле к аноду. При анализе антигенов, подвижность которых лишь ненамного превышает подвижность антител, последние будут мигрировать в сторону, противоположную от зоны нанесения антигенов, что приведет к образованию пиков преципитации, лишенных базовой линии. Чтобы свести к минимуму подвижность антител, необходимо снизить pH буферного раствора. Электроиммуноанализ альбумина был осуществлен при pH 6,5 [717], а лактоферрина — при pH 7,4 [1125]. Белки сыворотки крови, обладающие подвижностью ог и ог-глобули-нов, удалось успешно разделить при pH 8,6, но для разделения трансферрина и иммуноглобулинов пришлось снизить pH до 7,4. [c.262]

Второй наиболее важный электрофоретический метод — это электрофорез в агаровом геле при pH 6,0—6,5 [ПОЗ]. В исходном методе рекомендуется наливать 1%-ный раствор агара в цитратном буфере на стеклянные пластинки размером 22Х Х13 см. Образцы наносят на маленькие кусочки фильтровальной бумаги, которые помещают в щели, вырезанные в агаровом геле, или просто накладывают на поверхность геля, и после того, как белки проникнут в гель, начинают электрофорез. Шнейдер [1141] описал метод электрофореза на предметных стеклах в агаровом геле, забуференном цитратом. Образцы наносят на гель в виде круглого пятна. Кроме того, на каждую пластинку следует наносить стандартный гемолизат (содержащий, как правило, НЬАЗ), поскольку положение компонентов варьирует в зависимости от величины электроэндосмоса. При перемещении к катоду гемоглобины располагаются в следующем порядке НЬР> НЬА>НЬ8>НЬС. Та же закономерность наблюдается и в отношении растворимости гемоглобинов при pH 6,0. Основное преимущество этого метода электрофореза состоит в том, что он позволяет отделять НЬС от НЬЕ и НЬ5 от НЬВ, а также определять малые количества НЬА в присутствии НЬР. Многие мутантные виды гемоглобина (О, В, Е, О, I [c.322]

Наиболее часто для определения фенотипа трансферрина используют электрофорез в крахмальном геле. Разделение проводят в боратном буфере Смитиса [1199] или в неоднородной трис-цитратной системе Паулика [1028]. Для установления фенотипа трансферринов животных применяют и другие буферные системы, в частности систему Аштона и Брейдена [65]. Спунер и Бакстер [1221] использовали буфер трис-какодиловая кислота (pH 7,45). Кроме того, с этой целью проводят электрофорез в полиакриламидном геле в трис-глициновом буфере при pH 8,8 [960] или при pH 9,3 [1275]. Наличие в сыворотке человека того или иного вариантного трансферрина обнаруживают также с помощью электрофореза в агаровом геле [630], а для подтверждения полученных результатов осуществляют во втором направлении иммуноэлектрофорез [424]. Однако в этом случае картина оказывается менее четкой, чем при электрофорезе в крахмальном или полиакриламидном геле. В последнее время стали применять другой подход вначале сыворотку подвергают изоэлектрофокусированию в геле из специальной марки агарозы (лишенной электроэндосмоса), а затем проводят электрофорез в геле, содержащем антитела [492, 631]. [c.346]

Рис. 6.10. Трафарет для лунок и канавок в случае проведения иммуноэлектрофореза на пластине 8X8 см. Показано расположение лунок для агарозы с низкой величиной электроэндосмоса, когда большинство аитигеиов мигрирует к аноду (например, белки сыворотки). Прн использовании гелей с высокой величиной электроэндосмоса для одновременного исследования анодных и катодных антигенов, лунки можно сместить к центру пластины

Рис. 6.11. Иммуноэлектрофореграмма сыворотки морской свинки, полученная с помощью полиспецифической кроличьей антисыворотки (агар с высокой величиной электроэндосмоса)

П. Свойства агара и агарозы и электроэндосмос. При ще лочных pH буфера агар несет незначительный отрицательный заряд, обусловленный ионизацией неорганических кислых групп. В результате гель приобретает постоянный заряд, сбалансированный ионами НзО растворителя. Это приводит к возникновению в жидкой фазе геля слабого катодного тока, называемого электроосмосом [12] или электроэндосмосом. Коммерческие препараты агара в отличие от агарозы обладают ярко выраженными электроэндосмотическими свойствами, и в результате Рг- и -глобулины, которые имеют в сыворотке при pH 8,6 сильный отрицательный заряд (это молекулы с самым низким значением р1), мигрируют к катоду (рис. 6.11). В этом нет большой беды, поскольку, правильно подобрав анионы буфера, можно разделить изучаемые антигены как в направлении к катоду, так и к аноду. Таким образом, работая с агаровыми гелями, лучше вырезать лунки в центре пластины, чтобы обеспечить миграцию белков к катоду. Часто наилучшее разделение иммуноглобулинов на классы достигается именно в агаровом геле. [c.220]

В отличие от агара некоторые коммерческие препараты агарозы обеспечивают гораздо меньший суммарный заряд геля и обладают низкими электроэндосмотическими свойствами. Следовательно, в такой агарозе миграция - бу- инов при pH 8,6 минимальна, однако антигены, мигрирующие к аноду, разделяются очень хорошо. Агароза с низким электроэндосмосом идеально подходит для методов, в которых антигены электрофоретически мигрируют при pH 8,6 в гель, содержащий антитела (ракетный или двумерный ИЭФ, см. разд. 4.2 л 4.3), или когда антитела перемещаются по направлению к [c.220]

В каждую трубку с помощью гамильтоновского шприца вносят пробы объемом 5—40 мкл. При нанесении проб не следует взмучивать слой мочевины, который образуется на гелях в процессе полимеризации. Наличие этого слоя облегчает вход пробы в гель. После нанесения проб аппарат подключают к источнику питания и устанавливают требуемое напряжение. Для нормального разделения достаточно 14 000 В-ч,. что достигается при соблюдении оптимального режима 800 В в течение 17,5 ч. При больших значениях вольт-часов на щелочном конце гелей из-за электроэндосмоса может происходить искривление полос. Этот эффект будет более подробно обсуждаться в разд. IV. [c.208]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология