Рутин ферменты

Коммерческие приборы для рутинного определения мочевины работают на основе шарикового реактора с иммобилизованным ферментом. Раствор пробы пропускают через реактор. После подщелачивания раствора аммиак определяют с помощью газочувствительного аммиачного ИСЭ. [c.500]

Несмотря на то что флавоноиды присутствуют у некоторых растений в очень больших количествах и содержатся в тех или иных количествах во всех растительных тканях, об их распаде и превращениях под действием растительных ферментов почти ничего не известно. Было, однако, показано, что очень многие грибы и бактерии способны расщеплять флавонолы, такие, как, например, рутин, до простых фенолов и окиси углерода. Эти фенольные фрагменты могут выщелачиваться из опавшей листвы, попадать в почву и затем связываться в виде гуминовой кислоты — полимера, который, как известно, содержит фенольные остатки, соответствующие продуктам распада флавоноидов. [c.387]

В основе этих методов лежит способность ферментов рестрикции (рестриктаз) расщеплять ДНК на отдельные, довольно короткие нуклеотидные последовательности. В гл. 3 мы уже обсуждали использование рестриктаз для составления физической карты ДНК и получения фрагментов ДНК, нуклеотидная последовательность которых может быть определена непосредственно. Таким образом, если исследователь располагает участком ДНК, соответствующим, например, определенному гену, то определение его нуклеотидной последовательности сейчас уже представляется вполне рутинной, чтобы не сказать рядовой, процедурой. Используя эти данные, с помощью некоторых химических и биохимических методов можно разрывать молекулу ДНК и снова восстанавливать ее целостность практически в любом месте. [c.236]

В то же время уже более тридцати лет известно, что большинство найденных в природе белков при парентеральном введении в организмы другого вида действуют как антигены [38, с. 430] и результаты анализа продуктов гидролиза очищенных антител. .. показывают, что по своему аминокислотному составу антитела очень близки (если не идентичны) нормальным сывороточным 7-глобулинам [38, с. 438]. Измерение соотношения глобулин / альбумин проводится при рутинном анализе крови. Очевидно, что при недостаточном изменении свойств иммобилизованного белка не исключено его взаимодействие по типу антиген - антитело с 7-глобулинами плазмы крови, содержащимися в пробе. В случае анализа слюны в пробе неизбежно присутствуют ферменты, которые также могут сильно удерживаться и отрицательно воздействовать на привитые молекулы альбумина (разрушать их) в случае сохранения доступных участков с нативной структурой. [c.544]

Прежде чем закончить раздел о ДНК-полимеразах, применяемых в ПЦР, хочется дать небольшой комментарий по поводу концентраций ферментов в пробах, которые целесообразно применять при проведении реакции. В рутинных экспериментах в пробы объемом 25-100 мкл обычно добавляют 0,5-0,25 ед. фермента. Вообще, чем выше концентрация фермента в пробе, тем больше вероятность образования неспецифических продуктов. В то же время необходимо помнить, что амплификация, осуществляемая, в частности, Taq-ДНК-полимеразой, происходит по дистрибутивному механизму, т.е. в процессе синтеза особенно [c.200]

В области биотехнологии молекулярная генетика создает фундаментальные основы для создания продуцентов различного рода веществ по двум направлениям. Во-первых, в ходе идентификации новых генов человека и других организмов выявляются все новые биорегуляторы и их рецепторы, которые можно использовать в качестве лекарственных препаратов для ветеринарии и медицины. Во-вторых, совершенствуются системы экспрессии различного рода генов в разнообразных клетках и организмах, что в свою очередь создает две перспективы создание клеток (бактериальных и эукариотических) и организмов (растений и животных), продуцирующих различного рода вещества, которые далее могут использоваться как лекарства, пищевые добавки, ферменты в заводских процессах или компоненты диагностикумов или вакцин, а также для создания организмов с улучшенными свойствами, например, трансгенных растений, устойчивых к засухам или имеющих повышенную переносимость к засоленным почвам, или животных, устойчивых к инфекциям. Наиболее впечатляющим достижением в области создания новых продуцентов можно назвать создание живых ферментеров - животных, секретирующих лекарственные препараты в молоко. Развитие технологий создания трансгенных животных делает процедуру создания такого ферментера достаточно рутинной. Эти технологии базируются на достижениях генетики соматических клеток и в последнее время намечается тенденция использования для этих целей систем клонирования животных. Можно сказать, что развитие молекулярной генетики перевело биотехнологию на уровень целых организмов, заложило предпосылки экологически чистых технологических процессов и интенсивных сельскохозяйственных технологий. Это особенно важно ввиду намечающихся демографических и экологических кризисов перенаселенной планеты. [c.8]

Для рутинного тестирования ферментов (за исключением упомянутых выше термофильных ферментов) неудобно и физиологически неоправданно использовать высокие температуры. Более того, желательна определенная стандартизация температуры, при которой проводится определение активности. В химии стандартной температурой долгое время считалась температура 25°С (298°К), и сначала эта температура рекомендовалась и для определения ферментов. Однако исследователи, работа- [c.285]

Этот вводный параграф включен в данный раздел, чтобы показать, что очистку фермента можно проводить рутинным способом, совсем не измеряя содержание белка или измеряя его лишь в конечном препарате. Определение количества белка в ходе самого фракционирования нужно делать только в том случае, если знание концентрации белка имеет решающее значение для процесса очистки. Если же это не важно, то можно отобрать небольшие пробы и определить в них белок позже. [c.310]

В ферментных электродах ферменты обычно иммобилизуют, что позволяет уменьшить расход материалов для проведения рутинных анализов и исключить частую проверку ферментного препарата для получения воспроизводимых результатов. Кроме того, устойчивость фермента часто увеличивается при введении его в подходящий гелевый носитель. Например, электрод для определения мочевины с химически связанной уреазой на поверхности аммонийного ИСЭ может работать более 300 дней [16]. [c.120]

Хотя различные варианты калориметрии иногда используют в биохимическом ализе [5, 19, 23], в рутинном биоанализе она все же не находит широкого именения, что можно объяснить высокой стоимостью и сложностью приборов и ительностью эксперимента. Ряд исследовательских групп пытались разработать остые и менее дорогостоящие калориметры для рутинной работы с иммобилизован-[ми ферментами. Одним из первых был предложен калориметр с малым объемом , [c.457]

Описано несколько рутинных методов определения мочевины в сыворотке крови при помощи иммобилизованной уреазы [2, 9, 14, 37, 42]. Диапазон линейности этих методов весьма широк-от 0,01 до 200 ммоль/л [9]. Поскольку пробы сыворотки обычно разбавляли в 10 раз, концентрации в основном попадали в интервал 0,3-10 ммоль/л. В результате имелся значительный запас активности фермента, поэтому можно было ожидать, что стабильность работы системы будет высокой. Колонку с ферментом можно использовать несколько месяцев или для анализа нескольких сотен проб сывороток. На проведение одного анализа требуется всего [c.464]

К середине 1940-х годов пептидная теория белков Фишера и Вальд-шмидт-Лейтца была почти повсеместно принята. Встал вопрос о точном знании деталей химического строения, т.е. о конкретном порядке расположения аминокислот в белковых цепях. Впервые такое сложное исследование удалось провести в течение десятилетия (1945-1954 гг.) ф. Сенгеру, определившему аминокислотную последовательность инсулина. Вторым белком была рибонуклеаза А. Полная структура этого фермента расшифрована С. Муром, К. Хирсом и У. Стейном (1960 г.). Вскоре идентификация химичекого строения белков стала производиться с помощью автоматических секвенаторов и приобрела рутинный характер. Однако достижения в решении первой фундаментальной задачи проблемы белка не принесли удовлетворения. Сначала не вызывало сомнений, что химические и физические свойства белков получат свое объяснение, как только станет известно химическое строение их молекул. Однако основанная на опыте всей органической химии и биохимии надежда на то, что установление химического типа и строения молекул окажется достаточным для понимания хотя бы в общих чертах их специфического функционирования, не оправдалась. Тем самым определение структуры из конечной цели исследования превратилось в необходимый для последующего изучения белков начальный этап. Утвердилась мысль, что химическая универсальность и практически необозримое многообразие свойств соединений этого класса при строгой специфичности его отдельных представителей связаны с особенностями пространственных структур белковых молекул. [c.67]

Лля рутинных определений активности эндоглюканазы все шире используется КМЦ, окрашеш1ая ковалентно присоединенным красителем. Показания данного метода достаточно хорошо коррелируют с данными по определению вискозиметрической активности для целого ряда целлюлазных комплексов [3, 68]. Активность по окрашенной КМЦ обычно выражают в относительных единицах. Однако она может быть пересчитана в абсолютные единицы с использованием калибровочного графика, который получают индивидуально для каждого фермента. Методика определения активности приведена в разделе 5.6. [c.137]

Здесь следует заметить, что выяснение, какой (или какие) конкретно ферменты ответственны за метаболизм химического соединения, представляет отдельную и очень непростую задачу. Один из способов её решения описан в [9]. Очевидно, что определение фермента, метаболизирующего новый лекарственный препарат, а также вопросы, связанные с ингибированием или активацией ферментов, должны решаться на стадии разработки нового фармпрепарата. Однако в рутинной клинической практике всегда останется вопрос какова будет реакция конкретного пациента на приём данного лекарства или комбинацию лекарственных средств. [c.475]

Долгое время фенольные соединения считали конечными продуктами обмена веществ и сомневались в том, что они имеют физиологическое значение. Однако получены данные, что в некоторых случаях эти соединения участвуют в обмене веществ. Например, листья многих растений содержат фермент, обесцвечивающий антоцианы. Правда, продукт этой реакции до сих пор не идентифицирован. Проростки гречихи включают меченный по карбоксилу фенилаланин в рутин и цианидин при этом удельная активность рутина и цианидина после достижения максимума убывает, что свидетельствует об использовании их в обмене веществ. Между бензалькумарином скополетином и его гликозидом в тканях табака, по-видимому, существует динамическое равновесие. При этом на положение равновесия влияет содержание ауксина кинетина. Можно предположить, что скополетин и его гликозид участвуют в синтезе клеточных стенок [17]. [c.459]

Ланг и Вейланд [9] сообщили о выделении из печени и почек животных активной ферментной системы которая разрушает рутин и кверцетин в аэробных условиях. Этот фермент обнаружен в небольшом количестве в мозге и мышцах фермент полностью локализован в митохондриях. [c.372]

Как показали исследования, полифенолоксидаза из почек различных животных катализирует окисление пирокатехина, галловой кислоты, галаскорбина и катехинов. Фермент не окисляет рутина, кверцетина, резорцина, диметилового эфира пирогаллола, 4-метоксигалловой и аскорбиновой кислот. Он сходен с растительными фенолазами. [c.376]

Имеется достаточно примеров растений, у которых вместе встречаются антоцианидины и флавонолы, к которым присоединен один и тот же сахар это указывает на то, что соответствующий гликозидсинтезирующий фермент таких растений относительно неспецифичен и может действовать на оба типа пигментных субстратов. Здесь предполагается, что гликозилирование происходит вблизи конца пути синтеза флавоноидов. Это предположение подтверждается исследованиями Барбера [106, 107] по биосинтезу рутина, [c.129]

Несмотря на то что генетиками получен чрезвычайно интересный материал, который можно было бы использовать для выделения ферментов, энзимологическая сторона биосинтеза флавоноидов изучена недостаточно. Поиски у Antirrhinum фермента фенолазного типа, который бы катализировал специфическое гидроксилирование антоцианидинов и флавонолов, пока не увенчались успехом. До сих пор успехи достигнуты только в изучении энзимологии биосинтеза гликозидов флавонолов [1]. Но и в этих опытах выходы были очень низкими удалось продемонстрировать только синтез рутина (II) из кверцетина через 3-глюкозид путем использования субстратов, меченных [c.384]

Выше было показано, что окисление анион-радикалом кислорода флавонолов, в частности кверцетина и рутина, сопровождается характерными изменениями в их спектрах. Аналогичные изменения были зарегистрированы в спектрах кверцетина (рис. 2.30а) и рутина (рис. 2.306) в присутствии активированных асбестом перитонеальных макрофагов. При добавлении в среду инкубации фермента СОД (100 мкг/мл), катализирующего реакцию дисмутации О2, практически полностью ингибировалось окисление рутина, а окисление кверцетина — на 50 %. [c.142]

Флавоноиды не являются однородной группой соединений со сходными химическими свойствами, некоторые из них при определенных условиях могут окисляться молекулярным кислородом. Например, кверцетин и кемпферол легко окисляются в 0,02 М фосфатном буфере, значение pH которого доведено до 10 путем добавления тетраметилэтилендиамина (ТМЭДА) (см. рис. 2,6г), тогда как рутин, лютеолин, морин и дигидрокверцетин в этих условиях не аутооксидабельны. Поскольку в силу спиновых ограничений триплетная молекула кислорода не может непосредственно взаимодействовать с флавоноидами, можно предположить, что молекулярный механизм реакции аутоокисления кверцетина и кемпферола включает стадию образования АФК. С целью определения активных форм кислорода, участвующих в процессе автоокисления кверцетина в присутствии ТМЭДА, в среду инкубации добавляли СОД — фермент, катализирующий ре- [c.143]

Существует несколько родственных методов иммуноанализа без разделения реакционной смеси, в которых используют стерическое исключение высокомолекулярного субстрата из активного центра фермента. Разработан метод анализа энтеротоксина В из стафилококков с помощью антигена, меченного -ами-лазой (Morita, Woodburn, 1978). Из-за сложного измерения активности этот метод представляет ограниченный интерес с точки зрения рутинного использования в клинике. Нго и др. (Ngo et а ., 1981) ввели в употребление метод на основе белкового антигена, меченного флуорогенным субстратом -галактозидазы. Чтобы количественно определить в сыворотке антиген, ему дают возможность связаться с антителами в присутствии антигена, меченного субстратом, потом добавляют избыток -галактозидазы и измеряют степень гидролиза субстрата. [c.114]

Метод непрямого конкурентного анализа является вполне функциональным, хотя и весьма громоздким вследствие значительного числа этапов, составляющих процесс детектирования в a-ELISA. В лабораториях, где работают с a-ELISA, целесообразно использовать, этот метод для предварительного изучения принципиальных возможностей применения непрямого ИФА для тестирования данного антигена, поскольку для этого не потребуется приготовления каких-либо новых реагентов. Для последующей рутинной работы предпочтительно использовать конъюгат фермента с антителами к тестируемому антигену. [c.241]

В более поздних работах говорится также о том, что можио получить активно функционирующие хлоропласты и из протопластов мезофилла этих двух видов растений. В рутинных опытах использование протопластов для изучения ассимиляции СО2 у шпината и гороха не дает никаких преимуществ. В то же время этот прием очень удобен, когда нужно определить внутриклеточную локализацию каких-либо ферментов, поскольку ои позволяет получить большое (в процентном отношении) количество интактных оргаиелл. Ркпользоваиие шпината в научных исследованиях, по-видимому, связано с теми же трудностями, что и применение томатов и табака, а именно с большой вариабельностью получаемого растительного материала, обусловленной колебаниями условий выращиваиия, которые М Огут даже приводить к тому, что некоторые ткани становятся устойчивыми к ферментативной обработке. [c.555]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология