Процесс преципитации

Классические методы иммунохимического анализа основаны на образовании антителами в присутствии антигена преципитата (осадка), однако для визуальной регистрации процесса преципитации необходимы высокие концентрации компонентов и длительное время проведения реакции. Результаты такого анализа не всегда можно однозначно интерпретировать и, кроме того, в большинстве случаев они носят качественный или полуколичественный характер. Кроме того, для многих одновалентных антигенов (гап-тенов), например гормонов, лекарственных соединений, эти методы непригодны. [c.5]

Особенно чувствительными в процессе диффузии в агаровом геле получаются реакции преципитации при взаимодействии бел- [c.241]

Старое представление (1940 г.) о структуре и процессе образования антител исходило из предположения, что вызывающая преципитацию или агглютинацию молекула антитела состоит из центральной части со строго определенной структурой и двух концевых участков. Концевые участки представляют собой полипептидные цепи, которые могут складываться в конформации, комплементарные по структуре гаптено- [c.451]

Химические кислотно-щелочные реакции, окислительно-восстановительные процессы, абсорбция, преципитация и т. д. Биохимические разлол<ение органических и неорганических усвояемых соединений организмами. Гибель или другая инактивация паразитических организмов [c.112]

В основе всех иммунологических реакций лежит один и тот же первичный процесс соединения антигена с антителом. Преципитация, агглютинация, цитолиз и другие более сложные реакции являются вторичным выражением этого процесса. Самой простой из всех реакций антигена с антителом является реакция преципитации растворенного антигена соответствующим антителом. Используя антигены, содержащие окрашенные группы, изотопы или какие-нибудь легко определимые химическим путем элементы, можно провести количественный анализ преципитата и установить его состав при различных условиях. Подобные исследования были проведены многими авторами, использовавшими такие меченые антигены, как гемоглобин, иодированные белкИ, фосфопротеиды, азобелки и гемоцианин. [c.342]

В данных методах совмещены электрофоретическая миграция антигенов в агарозе с последующей иммунопреципитацией в геле. В результате первого процесса происходит частичное разделение смеси антигенов, поскольку скорость их миграции в геле зависит от суммарного заряда при данном рП буферного раствора. Кроме того, отрицательно заряженные молекулы быстро мигрируют в гель, содержащий антитела, что ускоряет преципитацию и сводит к минимуму латеральную диффузию. [c.215]

Рассмотрим теперь сам процесс образования полос преципитации. Молекулы антител и антигена диффундируют из своих лунок радиально во всех направлениях. Их концентрации в геле убывают по мере удаления от лунок, но в любой точке они пропорциональны соответствующим исходным концентрациям. В какой-то точке, находящейся на прямой, соединяющей центры лунок антисыворотки и антигена, диффундирующие навстречу друг другу потоки антигенов и антител впервые встречаются. Вначале это не препятствует дальнейшей диффузии. Однако по мере возрастания концентраций в области перекрывания встречных потоков там образуется зона оптимального соотношения концентраций антител и антигена и начинается формирование преципитата. Это ограничивает дальнейшую диффузию в радиальном направлении, так как новые порции антител и антигена будут достигать этой зоны в том же самом оптимальном соотношении и тоже будут выпадать в осадок. Между противолежащими лунками образуется полоса преципитата, постепенно-удлиняющаяся симметрично в обе стороны. [c.125]

В периферических лунках могут испытываться различные смеси антигенов, например при обследовании процесса очистки одного из них. Картина преципитации будет более сложной и может содержать несколько полос, часть из которых будет плавно переходить друг в друга, а часть — пересекаться (см. рис. 30). [c.126]

Применение химических методов концентрирования н очистки вирусов основано на преципитации вирусных частиц под действием химических реагентов, К этой группе методов можно отнести также методы ферментативной обработки, с помощью которых гидролизуются балластные белки и свободные нуклеиновые кислоты в процессе очист ки. Применение химических методов для концентрирования и очистки вирусов животных может быть успешным только для определенных групп вирусов, устойчивых к химическим реагентам. [c.45]

Помимо аффинной хроматографии (которая иногда называется еще аффинной адсорбцией в геле) в крупномасштабных биотехнологических процессах для очистки продуктов все шире применяют аффинную преципитацию и аффинное разделение. [c.73]

Первый подход к проблеме химической защиты организма, как видно, имеет весьма общий характер. Но уже следующий напоминает нам о химии. Антигены химически взаимодействуют с антителами так, что в результате получаются осадки (процесс преципитации, т. е. осаждения), или скопления,— агрегаты крупных частиц (процесс агглютинации). Агрегат может состоять, например, из красных кровяных шариков — эритроцитов, тогда говорят о гемаглютинации. Отсюда был сделан вывод, что антитела способны связывать антигены в нескольких точках. Антитело имеет две точки связывания (бивалентно) или несколько таких точек (поливалентно). [c.184]

В узлах и междуузлиях кристалла, создавая структуры замещения и внедрения, но может происходить и накопление выпадающих атомов Си в области вдоль дислокации. Эти атомы образуют тем самым облака Коттрелла как промежуточный процесс преципитации (осаждения) зародышей новой фазы (Си). Особенно активно переходят в пустую полусетку , в позиции вырванного полулиста , атомы из облаков [c.585]

Образование коацерватов РЮР-9 относится к той группе процессов, которые стимулируются высокими температурами (при низкой температуре существует только одна фаза). Примерами подобных процессов являются полимеризация белков вируса табачной мозаики или гемоглобина, пораженного серповидноклеточной анемией, деление оплодотворенного яйца, преципитация поли-Ь-пролина выше 25 °С и другие. Лауффер [66] относит эти явления к разряду процессов переноса энтропии , предполагая, что их движущей силой является возрастание энтропии воды. Усиление гидрофобных взаимодействий также способствует протеканию этих процессов. [c.73]

Вопрос о механизме реакции антител с антигенами еще не получил полного разрешения. Несомненна, однако, существенная роль в этом процессе ионных, водородных и ван-дер-ваальсовых связей. Реакция эта, по крайней мере, двухстадийна. Первая стадия протекает очень быстро и не сопровождается видимыми изменениями. Она характеризуется довольно существенным тепловым эффектом ДЯ от 2 до 40 ккал/моль. Вторая стадия взаимодействия антигена с антителом длится часами. В различных системах она может протекать по-разному, сопровождаясь преципитацией (выпадением образовавшегося комплекса в осадок), агглютинацией (слипанием антигенных частичек), лизисом (растворением клеток), нейтрализацией токсинов и вирусов и т. п. [c.112]

ТОКСИН И антисыворотку, полученную от переболевшего животного (это можно проделать и вне живого организма, в пробирке), выпадает хлопьевидный осадок. Процесс осаждения антигена в этом случае называется преципитацией (от латинского ргаес1р11аге — осаждаться), а сам осадок — преципитатом (рис. 150). [c.324]

Возможно и другое решение проблемы ремонта поврежденной мембраны в ответ на увеличение концентрации ионов натрия в клетке. Опыт показывает, что вытекающая из поврежденной клетки протоплазма немедленно покрывается вновь возникающей липопротеидной мембраной (см., например, [5, 462]). Это происходит так быстро, что говорить о включении биосинтеза, как источника материала для новой мембраны, нельзя. Некоторый аварийный запас фосфолипидов и белков для быстрой сборки мембраны в клетках имеется. (Тем не менее биосинтезы должны быть включены для восполнения этих запасов). Процесс образования поверхностной мембраны при повреждении клетки был предметом глубоких исследований и широких обобщений Л. Гейльбруна [64, 396, 397]. Гейльбрун считал, что эта поверхностная реакция преципитации осуществляется при действии ионов кальция аналогично механизму свертывания крови. Новообразованию мембраны на вытекающей из клетки капле протоплазмы, в соответствии с этой гипотезой, происходит в результате превращения белка типа фибриногена в полимери-зующийся белок типа фибрина (и лишь затем по возникшему белковому каркасу выстраивается лилопротеидная мембрана). [c.102]

При обычном иммуноэлектрофорезе иммунодиффузию осуществляют так, как если бы это была двойная иммунодиффузия из расположенных под прямым углом канавок или из круглых лунок и канавок [80, 261, 952]. Однако разделенные при электрофорезе зоны не имеют четко очерченной формы, и вещества в них распределены неравномерно. Поэтому линии преципитации на иммуноэлектрофореграмме представляют собой более или менее удлиненные симметричные или асимметричные дуги. Удлинение дуг наблюдается, в частности, в тех случаях, когда в анализируемом образце содержатся вещества, обладающие одинаковой антигенной активностью, но разной электрофоретической подвижностью (наиболее известным примером подобных антигенов являются нормальные иммуноглобулины). Если антиген удерживается гелем (как, например, в случае микроглобулинов или ЛНП), то образуются линии преципитации неправильной формы. Иммуноэлектрофорез имеет более низкую чувствительность, чем двойная иммунодиффузия, поскольку в процессе электрофореза происходит разбавление антигенов вследствие расширения разделенных зон. [c.237]

Фельгенхауэр [370] проводил иммунофиксацию белков после микроэлектрофореза в полиакриламидном геле. Гель помещали в небольшие сосудики, содержавшие 50—60 мкл антисыворотки. Преципитация происходила при 4°С в процессе встряхивания сосудиков. Преципитаты окрашивали после удаления непрореагировавшего белка путем промывания гелей. Крейг и Вайхер [716] предложили аналогичную методику для столбиков геля обычных размеров. Коттон и Мильштейн [249] разде-, ляли белки методом изоэлектрофокусирования на пластинах полиакриламидного геля. Затем электрофореграммы покрывали полосками фильтровальной бумаги (ватман № 3 ММ), пропитанными антисывороткой в соответствующем разведении. Гель вместе с полосками фильтровальной бумаги инкубировали в течение 24 ч при 37 °С во влажной атмосфере. После интенсивного промывания гель окрашивали. При разделении радиоактивных антигенов высушенные гели подвергали радиоавтографии. [c.246]

Среди продуктов иммунной системы и в составе самих ее элементов имеется множество разнообразных химических соединений, которые, действуя в растворенном состоянии или на клеточных поверхностях, вызывают различные физические эф-фекты. Агглютинация, фагоцитоз, лизнс, преципитация, адгезия и узнавание — все это физические процессы, так как они обусловлены действием физических сил на определенные объекты, а не перестройкой химических связей. Все эти процессы на молекулярном уровне происходят при участии сил Ван-дер-Ваальса, без образования ковалентных связей. Методы, используемые физикой поверхностей, позволяют измерять силы ВаН Дер Ваальса, и поэтому онн пригодны для изучения физических последствий иммунологических процессов. Хотя прдмое применение методов физики поверхностей в иммунологии по существу еще только начинается, уже сейчас очевидно, что-этот подход может многое дать для понимания ряда очень-сложных на первый взгляд явлений. [c.122]

Описанная методика представляет собой микровариант метода Ухтерлони. Часто в качестве стекол для заливки геля используют предметные стекла микроскопа. В макрометоде, описанном самим Ухтерлони, гель заливают в чашки Петри на толщину 2—3 мм. Лунки и расстояния между ними делают больше, соответственно увеличивают и объемы реагентов. Полосы преципитации видны лучше, но процесс диффузии занимает значительно больше времени. [c.127]

В рассмотренном методе обнаружения антигенов после электрофореза в ПААГ путем их диффузии в слой агаройы иммунная реакция следовала за окончанием этой диффузии, когда снятую с ПААГ агарозную реплику вымачивали в специфической антисыворотке. Два процесса можно совместить во времени, если антисыворотку заставить диффундировать в гель навстречу диффузии антигена из белковых зон, полученных в результате электрофореза [Grabar, Williams, 1953]. При этом можно ожидать образования полос преципитации комплексов антиген — антитело, подобно тому как это имеет место при двойной радиальной иммунодиффузии по методу Ухтерлони. Для удобства наблюдения раствор антисыворотки следует заливать не сверху, а рядом с треком электрофореза, на некотором расстоянии от него, с тем чтобы оставалась свободная полоса ПААГ, где и будет происходить диффузия антигенов и антител навстречу друг другу. Поскольку расположение полос антигенов после электрофореза заранее неизвестно, антисыворотку, очевидно, придется заливать не в лунку, а в канавку, идущую вдоль всего трека. Кроме того, антисыворотку следует вносить в такую канавку только после окончания электрофореза, иначе преждевременная диффузия антител в гель может помешать завершению процесса электрофоретического фракционирования смеси белков. [c.134]

Принципиальное отличие от рассмотренных ранее процессов встречной иммунодиффузии по методу Ухтерлони и иммуноэлектрофореза состоит в том, что здесь концентрация антител в геле остается неизменной, в то время как там в зоне преципитации она увеличивалась за счет встречного потока диффундировавших в геле антител. Этим обеспечивалось поддержание эквивалентного соотношения концентраций в зоне преципитации, а следовательно, и ее неподвижность. Продвижение фронта преципитации в методе Лорелла продолжается вплоть до полного исчерпания запаса антигена, расходуемого на образование иммунных комплексов вдоль всего пути миграции. После этого фронт преципитации останавливается, а его расстояние от лунки может служить мерой количества антигена, исходно в ней находившегося. [c.141]

Прауз и соавторы предложили микромодификацию метода Лорелла. Весь процесс переносят в капилляры диаметром около I мм. Агарозу с антисывороткой полимеризуют в капилляре, а раствор антигена наносят на торец столбика геля, как при обычном электрофорезе в трубках. Опыт ведут в стандартном приборе для вертикального электрофореза. Здесь, разумеется, не образуется никаких ракет , поскольку поперечная диффузия антигена отсутствует, и это повышает чувствительность метода. Измеряют расстояние плоского фронта преципитации от начала геля после прекращения продвижения этого фронта, вдоль трубки в связи с исчерпанием антигена. Столбики гелей из серии капилляров выдавливают водой на покрытую агарозой пластинку, выравнивают их там по сетке подложенного снизу трафарета и закрепляют несколькими каплями расплавленной агарозы. В таком виде все столбики геля одновременно окрашивают. Удается обнаружить до 10 мкг белка-антигена при объемной концентрации неразбавленной антисыворотки в агарозе около 0,1%. [c.143]

Поскольку расстояние миграции фронта преципитации определяется только исходным количеством антигена, а объем его раствора роли не играет, то можно к каждому капилляру присоединить резервуар емкостью, например, в 5 мл и заполнить его разбавленным раствором антигена. Таким способом (разумеется, за счет увеличения продолжительности процесса) можно определить количество антигена в растворе с концентрацией 2X10" мкг/мл [Prause et al., 1978]. [c.143]

Замечательно, что два антигена, оказавшиеся в одной зоне, т. е. не разделившиеся в ходе первоначального электрофореза, как правило, легко обнаруживаются в процессе электроиммунного анализа во втором направлении. Соответствующие пики преципитации, накладываясь друг на друга, как бы просвечивают один через другой, поэтому, если они не совпадают в точности по высоте и форме, их можно не только различить, но и обмерить (рис. 38). Различие двух пиков по высоте и форме может быть обусловлено различием содержания антигенов в общей белковой зоне, неодинаковостью концентраций специфических для них антител в антисыворотке и, наконец, разницей эквивалентных отношений концентраций антигенов и антител, обусловливающих положения зон преципитации. Если же положения белковых зон после электрофореза для двух антигенов не совпадают, то их пики оказываются соответственно сдвинутыми один относительно другого, что еще больше облегчает их идентификацию. [c.144]

Гиалиноз. Гиалиноз представляет собой один из видов мезенхимальной белковой дистрофии, при которой в ткани вне клеток образуются однородные полупрозрачные плотные массы (гиалин), напоминающие гиалиновый хрящ. Гиалиноз объединяет различные процессы по происхождению, механизму развития и биологической сущности. Ведущими в его развитии являются деструкция волокнистых структур и повышение тканево-сосудистой проницаемости (плазморрагия) в связи с дис-циркуляторными (ангионевротическими), метаболическими и иммунопатологическими процессами. С плазморрагией связано пропитывание ткани плазменными белками и адсорбция их на измененных волокнистых структурах с последующей преципитацией и образованием белка — гиалина. Гиалиноз может иметь распространенный или местный характер и проявляться как в физиологи1 еских, так и патологических условиях. [c.191]

Потенциально фоточувствительные вирусы, такие, как миксовирусы, нужно защищать от света. Что касается рН-стабильности, то вирусы обычно наиболее стабильны от слабощелочных значений pH до их изоэлектрических точек. Для большинства вирусов наиболее оптимальны значения pH 6,7—7,6, Следует также избегать образования пены и гидродинамических воздействий, особенно в случае высокоочищенных препаратов вирусов. При длительных процедурах очистки, таких, как электрофорез и равновесное центрифугирование в градиенте плотности солей тяжелых металлов, необходимо к вирусной суспензии добавлять стабилизирующие коллоиды. Обычно добавляют очищенный альбумин сыворотки крови до концентрации 0,02% [272, 520] иди обезжиренную и лишенную комплемента сыворотку крови в концентрации 0,2% [268]. Также нужно избегать неблагоприятной концентрации ионов в окружающей вирус среде. Чтобы не произошла преципитация вируса, буферный раствор должен иметь значение pH, достаточно отличающееся от его изоэлектрической точки. На первых стадиях очистки нужно использовать буферы очень слабой ионной силы. Например, 0,01 М фосфатный буфер и 0,01 М цистеин при pH 7,0 более выгоден, чем буферы с высокой ионной силой. При работе с лабильными вирусами (вирус саркомы Рауса) хорошие результаты дает применение 0,02 М цитратного натриевого буфера (pH 6,7). В процессе очистки должна быть совершенно исключена бактериальная и грибковая контаминация при помощи тщательной стерильной обработки Это особенно важно, когда процесс концентрирования и очистки контролируется биологическим титрованием. Между отдельными стадиями очистки рост бактерий можно задержать снижением температуры, добавлением антибиотиков (100— 200 Ед/мл) или органических растворителей, например хлороформа в низких концентрациях. [c.30]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология