Бумажная хроматография, расщепление

В конце 40-х — начале 50-х годов нашего века химикам удалось обстоятельно проанализировать с помощью метода бумажной хроматографии смеси аминокислот, полученные при расщеплении ряда белков. В результате удалось установить общее число остатков каждой аминокислоты, содержащихся в молекуле белка, однако порядок расположения аминокислот в полипептидной цепи при этом определить, естестве шо, было нельзя. Английский химик Фредерик Сенгер (род. в 1918 г.) изучал инсулин — белковый гормон, состоящий примерно из пятидесяти аминокислот, распределенных между двумя взаимосвязанными пол и пептидными цепями. Сенгер расщепил молекулу на несколько более коротких цепей и проанализировал каждую из них методом бумажной хроматографии. Восемь лет продолжалась кропотливая работа по складыванию мозаики , но к 1953 г. был установлен точный порядок расположения аминокислот в молекуле инсулина. Позднее таким же способом было установлено детальное строение даже больших молекул белка [c.130]

Смесь пептидов, образующихся в результате использования различны> методов расщепления, сначала должна быть разделена, и каждый из пептидов очищен. Целевой компонент перед анализом последовательности должен быть гомогенен по данным как минимум четырех различных методов разделения ионообменной хроматографии, электрофореза, бумажной или тонкослойной хроматографии и противоточного распределения. [c.366]

Количеств, анализ А. основан на восстановит, расщеплении азогруппы при титровании р-рами VSO , Ti l3, Sn l2 и др. применяются также колориметрич., спектрофо-тометрич. и др. оптич. методы. Качеств, контроль осуществляется тонкослойной и бумажной хроматографией. [c.57]

Следует отметить, что при пиролитическом расщеплении получаются вещества с большим временем удерживания, чем СОа (на-пример, СаНе при пиролизе этиловых эфиров), которые, однако, здесь не рассматривались, поскольку их удаление из колонки требует более высоких температур, что привело бы к удлинению всего процесса. Эти составные части остаются в колонке в адсорбированном состоянии они могут быть оттуда удалены нагреванием по окончании рабочего цикла. При пиролизе возникают и продукты конденсации, которые еще менее нелетучи, чем соединения, подвергнутые пиролизу и обычно откладывающиеся на стенке у входа колонки. Их можно собрать, растворить и дальше идентифицировать (например, при помощи бумажно хроматографии). [c.62]

Разработаны микрометоды для полной идентификации антоцианов, включая определение вида сахара и места его присоединения. Эти методы основаны на бумажной хроматографии гликозидов (в нескольких обычных растворителях), агликонов, сахаров и коричных кислот, получающихся при гидролизе (Харборн [175]), с последующим изучением спектров гликозидов и агликонов [176]. Антоцианы поглощают в видимой области при 500—550 ммк в 0,01%-ном растворе соляной кислоты в метаноле в ультрафиолетовой области полоса менее интенсивна. Положение максимума в видимой области изменяется в зависимости от значения pH и типа растворителя, поэтому существенным является использование указанных выше стандартных растворителей. Антоцианы с 3, 4 -диоксигруппой обнаруживают батохромный сдвиг в присутствии хлористого алюминия. Соотношение сахар — агликон в антоцианах определяют спектрофотометрически 1) путем установления вида сахаров после разделения кислотных гидролизатов на бумаге и опрыскивания фосфатом анилина 2) путем спектрофотометрического определения концентрации антоцианидина в гидролизате. Место присоединения и природа сахарных групп (если присутствуют ди- и трисахариды) определяют изучением сахаров, образующихся после расщепления молекулы путем окисления перекисью водорода и перманганатом калия (Чандлер и Харпер [177]), а также при частичном кислотном или ферментативном гидролизе. [c.65]

Превращение одних стабильных радикалов в другие затрудняет расшифровку спектров ЭПР, так как спектры радикалов накладываются. Для разделения стабильных радикалов была использована бумажная хроматография [38]. При окислении ионола двуокисью свинца образуется смесь радикалов. Методом бумажной хроматографии смесь удалось разделить на два компонента и записать спектр ЭПР каждого из них. Один из радикалов дает спектр, состоящий из квадруплета (расщепление 11,4 э), каждая компонента которого представляет триплет (расщепление 1,7 э), соответствующий структуре [c.247]

Особого внимания заслуживает попытка разделения продуктов реакций расщепления с помощью методов бумажной хроматографии. [c.643]

Для установления структуры полисахаридов ГМЦ применяются в комплексе химические, биохимические, хроматографические и спектроскопические методы. Исторически первыми среди них получили развитие химические методы деструкции (кислотный гидролиз, окисление моносахаридов с расщеплением гликольных группировок) или модификации полисахаридов с последующей деградацией (метилирование). Для определения продуктов деградации широко используются хроматографические методы (бумажная, тонкослойная, газожидкостная хроматография) большую роль в последние годы играет масс-спектроскопия, которая применяется не только для идентификации производных, полученных при анализе полисахаридов методом метилирования, но и для анализа олигосахаридов непосредственно после нх перевода в летучие производные. И, наконец, в арсенал современных методов прочно вошла спектроскопия С-ЯМР — недеструктивный метод анализа структуры, позволяющий решить задачу установления строения полисахарида с минимальным использованием традиционных химических методов либо без них. Рассмотрим кратко характеристику этих методов. [c.58]

Для разделения этой смеси использовалась бумажная хроматография. В качестве подвижной фазы для элюирования использовались толуол, этиловый спирт и четыреххлористый углерод. Из окисляющегося углеводородного раствора фенола отбирались пробы и наносились в виде полоски вблизи нижнего края ленты фильтровальной бумаги. После высушивания лента опускалась нижним краем в растворитель, служащий подвижной фазой. Наилучшее разделение происходило при элюировании 96%-ным этиловым спиртом. В этом случае нанесенная полоска раствора окисленного фенола четко разделялась на два фронта нижний — оранжевый, с = О, и верхний — желтый, Rf 1. Типичная хроматограмма приведена на рис. 54. После высушивания хроматограмма разделялась на участки, каждый из которых помещался в резонатор спектрометра ЭПР, а затем записывались спектры ЭПР. Показано, что первый, желтый участок хроматограммы дает спектр ЭПР, в точности совпадающий со спектром ЭПР первичного радикала (рис. 9,а,стр. 57).Второй, оранжевый участок дает спектр, представляющий собой несколько асимметричный дублет с соотношением интенсивностей 1 1 и расщеплением 14,5 э (рис. 55,а). После смачивания этого участка бумаги растворителем (бензол, толуол, ССЦ) этот спектр превращался в другой, изображенный на рис. 55,6. Как мы видели ранее, такой спектр дают радикалы фенола, образующегося в качестве основного продукта при окислении 2,6-дитретбутил-4-метил-фенола в результате изомеризации его первичных радикалов. [c.164]

Из данных табл. 4 видно, что соединения, содержащие первичную и вторичную аминогруппу в -и -положениях, способны перегруппировываться в К-замещенные аминоалкилтиолы при pH 7,5. Методом восходящей бумажной хроматографии было доказано, что и в данном случае образование тиолов имеет место лишь в результате перегруппировки, а не вследствие гидролитического расщепления С—5-связи. [c.224]

Окисление надмуравьиной кислотой приводит к разрыву этих мостиков с образованием групп SOgH. При этом получаются две фракции А и Б, каждая из которых подвергалась систематическому расщеплению с образованием пептидов. Последние были разделены при помощи метода бумажной хроматографии и другими методами после установления их строения оказалось возможным определить последовательность аминокислот в канедой из двух цепей. Цепь А содержит 21, а цепь Б — 30 аминокислот. Гидролиз природного инсулина химотрипсином, экстрактом поджелудочной железы и кислотами, т.е. в условиях, в которых не разрушаются связи S—S, привел в дальнейшем к получению пептидов, в которых эти мостики сохраняются. Эти пептиды разделяли ионо-форезом на бумаге и определяли их строение. При этом пришли к заключению, что из шести цистеиновых остатков инсулина четыре находятся в цепи А и два — в цепи Б. Последние обеспечивают связь с цепью А при помощи двух цистеиновых остатков цепи А, тогда как два остальных цистеиновых остатка цепи А образуют меньший цикл. Кроме того, было установлено, что из шести амидных групп молекулы три принадлежат аспарагиновым, а три — глутаминовым остаткам. Таким путем пришли к следующему строению инсулина быка [c.432]

Следующим важным шагом после восстановительного расщепления является идентификация продуктов реакции. Разумеется, могут быть использованы различные методы, основанные на определении физических констант, однако необходимая при этом операция выделения аминов или их производных из сложной реакционной смеси делает всю. процедуру весьма трудоемкой. В литературе имеются примеры подобной препаративной работы 6,7]. Первые попытки использования бумажной хроматографии 14—17, 19—25] и тонкослойной хроматографии [26] дали многообещающие результаты. Бумажная хроматография оказалась более подходящим методом. Ее преимуществом по сравнению с газожидкостной и жидкостной хроматографией высокого давления является возможность проведения цветных реакций. При использовании бумажной хроматографии вместо тонкослойной возникает меньше трудностей, связанных с высокой концентрацией солей, кислот и щелочей в наносимых на хроматограммы растворах. [c.299]

Анализ фенолформальдегидных смол и их компонентов. Метод бумажной хроматографии применен к анализу фенолформальдегидных смол [210], открытию в них новолаковых компонентов [211], анализу резоловых компонентов [212]. Кретц [213] описал метод открытия малых количеств фенольных смол с эфирными мостиками (0,1—0,05) путем расщепления их при действии галоидоводородов. Определена [214] зависимость между вязкостью и содержанием растворителя в фенол формальдегидных реакционных смесях.Описан [215] кондуктометрический метод определения гексаметилентетрамина в фенолформальдегидных смолах. [c.582]

В некоторых случаях бумажную хроматографию использовали для контроля содержания антибиотиков в биологически неактивных или малоактивных препаратах примеси пенициллинов в препаратах 6-АПК [215], хлортетрациклина в продуктах его деградации [216], канамицина С среди продуктов его расщепления [217]. Было показано, что биологическая активность некоторых партий альбонурсина связана с незначительной примесью высокоактивного антибиотика альбофунгина [218]. [c.32]

Бумажная хроматография неоценима при определении строения красителей. Ее главное назначение — идентификация продуктов деградации, например после восстановительного расщепления и гидролиза при помощи соляной кислоты. Кроме того, для определения строения красителя можно использовать результаты хроматографического анализа (аддитивные значения А- м). Идентифицированы при помощи БХ продукты расщепления красителей, извлеченных с текстильных волокон [120]. БХ применялась также для идентификации продуктов деградации красителей [14, 121]. Эти методы приспособлены для азокрасителей (комплексы с металлами, активные красители и азопигменты) [43, 5] метод идентификации продуктов деградации настолько усоверщенствован, что все реакции идентификации можно проводить после разделения продуктов деградации непосредственно на хроматограмме, т. е. устранен сложный процесс выделения продуктов, необходимый при анализе строения классическими методами. [c.97]

Названные выше три типа стереоселективных процессов лежат в основе хроматографических методик расщепления рацематов а) газо-жидкостной распределительной хроматографии на оптически активных стационарных фазах и противоточного распределения с участием оптически активного экстрагента б) ионообменной хроматографии на оптически активных ионитах и в) газо-адсорбционной, жидкостно-ад-сорбциопиоп, в ТО М числе бумажной хроматотр афия, где используются твердые диссимметрические сорбенты. Низкая стереоселективность процессов, лежащих в основе этих хроматографических методик, не позволила создать эффективных препаративных способов получения оптически активных соединений. [c.46]

Деструкция простых ациламиноантрахинонов также может быть осуществлена либо путем гидролиза в соляной кислоте при 180 °С в запаянных ампулах в течение 1—2 ч [49], либо посредством пирогидролиза [51]. Для определения строения аминоантрахинонов более пригоден процесс гидролиза, тогда как пирогидролиз предпочтительнее для идентификации отщепляющихся от ациламиногруппы кислот. При действии соляной кислоты в указанных условиях наблюдается побочная реакция — галогенирование простых аминоантрахинонов. Если пирогидролиз ациламиноантрахинонов проводить по методу, описанному в разделе 1.2, летучие продукты, образовавшиеся в результате расщепления амидной связи, конденсируются на холодных стенках стеклянной трубки. Кислота обычно получается с хорошим выходом. В небольших количествах в конденсате присутствуют также простые летучие антрахиноновые производные. Для идентификации кислот используют бумажную, тонкослойную или газожидкостную хроматографию. Повторив операцию несколько раз, часто можно получить количества продукта, достаточные для проведения после дальнейшей очистки элементного или спектрального анализа. [c.307]

В настоящее время большинство описанных выше приемов вытеснены методами хроматографии и электрофореза. Применяли адсорбцию на смеси древесного угля с целитом с последующим элюированием водным этанолом [24, 251, однако полученные результаты не всегда воспроизводимы [26]. Другие авторы удаляли аминокислоты и низшие пептиды с помощью дауэкса-50 X 8 или зеокарба 225, трехмерная структура которых почти полностью исключает возможность сорбции гликопептидов [6, 25]. Хорошее отделение гликопептидов от аминокислот и других пептидов было достигнуто путем хроматографии продуктов протеолитического расщепления орозомукоида на колонке с бумажным порошком со гмесью к-пропанол — этанол — вода — уксусная кислота (5 15 5 0,75) в качестве растворителя [27]. Во многих случаях высокую степень очистки дает электрофорез на колонках типа описанных Поратом [28], в которых в качестве удерживающей фазы используется целлюлоза, подвергнутая этанолизу. Ли и Монтгомери [19] подвергали такую целлюлозу обработке борогидридом натрия, что приводило к более инертному материалу с низким электроэндоосмотическим фактором. [c.242]