Растворители для хроматографии на бумаге

Для разделения веществ с помощью бумажной хроматографии нарезают полоски бумаги длиной 15— 30 см и шириной несколько сантиметров. На расстоянии 2—3 см одного из концов полоски бумаги наносят каплю исследуемого раствора и место старта отмечают простым карандашом. После испарения растворителя конец бумаги, на который нанесена проба, приводят в соприкосновение с растворителем (ПФ). Затем бумагу и растворитель помещают в закрытый сосуд (обычно цилиндр или стеклянный колпак), чтобы предотвратить потери при испарении. После прохождения растворителя через полоски бумаги ее вынимают, сушат и определяют положение различных компонентов, С этой целью опрыскивают бумагу соответствующими реагентами, которые с компонентами разделенной смеси образуют окрашенные соединения. Для обнаружения аминов или аминокислот, например, действуют раствором нингидрина, который с этими веществами образует соединение голубого или пурпурного цвета. [c.616]

Кроме колоночной хроматографии, широко реализуемой в разнообразных вариантах, получила распространение и плоскостная хроматография, особенно ее разновидность — бумажная хроматография. Она выполняется на специальной хроматографической бумаге, обладающей изотропностью по всем направлениям, равномерной плотностью и толщиной. На такую бумагу можно нанести осадитель или вещество с ионообменными свойствами, и тогда ее можно использовать для осадительной или ионообменной хроматографии. Хроматографическая бумага весьма гигроскопична, в ее порах и капиллярах при нормальных условиях удерживается более 20% влаги. Процесс разделения на такой бумаге напоминает распределительную хроматографию, в которой неподвижной фазой является вода. Процесс проводят в замкнутом сосуде с растворителем. На бумагу наносят разделяемую смесь и один край листа опускают в растворитель. Под действием капиллярных сил растворитель движется вдоль листа и захватывает разделяемые вещества, скорость переноса которых зависит от их коэффициентов [c.182]

Одномерная нисходящая хроматография. В верхней части цилиндра (см. рис. 79, б) укрепляют небольшую ванночку, в которую наливают подвижный растворитель, насыщенный неподвижным. На дно цилиндра помещают бюкс с неподвижным растворителем, насыщенным подвижным. Это создает в цилиндре атмосферу насыщенных паров, предотвращающих испарение растворителя с бумаги. [c.75]

В ряде случаев вместо восходящей или нисходящей хроматографии используют радиальную (круговую) хроматографию. Для этого в центре круглого бумажного фильтра проделывают небольшое отверстие и вставляют в него бумажный фитиль, который опускают в растворитель. Затем по кругу в центре фильтра наносят капли подлежащего исследованию раствора вещества и эталонной смеси, помещают фильтр в закрытый сосуд и дают растворителю подниматься по опущенному в него фитилю. При перемещении растворителя по бумаге происходит разделение компонентов анализируемой смеси. [c.45]

Разновидностью распределительной хроматографии является хроматография на бумаге, широко используемая в биохимических лабораториях, в том числе клинических, для разделения пептидов, аминокислот и других веществ (рис. 1.4). В качестве стационарной фазы при этом служит вода, адсорбированная целлюлозными цепями фильтровальной бумаги. Образец помещают на одном конце бумажной полосы, этим же концом бумагу погружают в подходящую смесь органических растворителей (например, бутанол-уксусная кислота-вода в определенных соотношениях). При движении растворителя по бумаге благодаря силе капиллярности происходит разделение компонентов смеси. Проявленную хроматограмму высушивают, а местоположение каждого из разделяемых веществ определяют химическими или физико-химическими методами. [c.28]

В 1944 г. Мартин и др. [7] предложили заменить инертный носитель фильтровальной бумагой, заложив тем самым экспериментальные основы распределительной хроматографии. Бумага удерживает в порах молекулы воды, сорбируя их из воздуха (неподвижный растворитель). При соприкосновении подвижного растворителя с бумагой, на которую нанесены хроматографируемые вещества, последние переходят в подвижную фазу и перемещаются с различными скоростями, вследствие чего и происходит их разделение. В настоящее время распределительная хроматография на бумаге нашла широкое применение для разделения различных веществ аминокислот, белков, углеводов, антибиотиков, неорганических веществ и др. [2, 3, 4, 7—10]. [c.74]

Распределительная хроматография на бумаге. Теория колоночной хроматографии была перенесена и в бумажную распределительную хроматографию. Бумага удерживает в порах воду (22%)—неподвижный растворитель, сорбируя ее из воздуха. Нанесенные на бумагу хроматографируемые вещества переходят в подвижную фазу и, перемещаясь с различными скоростями по капиллярам бумаги, разделяются. Однако определить значение Кр так, как это определялось в колоночном варианте, здесь невозможно, поэтому для количественной оценки способности разделения веществ на бумаге введен коэффициент представляющий собой отношение величины смещения зоны вещества (х) к смещению фронта растворителя (х ) (рис. 22), т. е. [c.79]

Распределительная хроматография на бумаге или ка колонках. По хроматографическому анализу углеводов существуют обширные исследования [25, 32, 33, 37]. Разработано несколько приемов разделения (хроматография нисходящая, восходящая, радиальная и др.). Предложено большое количество растворителей и приемов хроматографирования. Четкое разделение компонентов хроматографией на бумаге зависит от применяемой системы растворителей, марки бумаги, времени разделения, температурных условий и природы углеводного состава гидролизатов. Поэтому правильный выбор условий хроматографирования в каждом отдельном случае решает успех наилучшего разделения компонентов. [c.70]

Наиболее прост и удобен метод восходящей хроматографии, который осуществляется следующим образом, в стеклянный цилиндр или какой-либо другой подходящего объема сосуд, герметически закрывающийся пробкой (можно пользоваться вегетационными сосудами с пришлифованной стеклянной пластинкой и т. п.), наливают слоем 4—5 см подходящий растворитель. Хроматографическую бумагу разрезают на полоски шириной 5—6 см и такой длины, чтобы, будучи помещены в цилиндр, они могли быть подвешены строго вертикально (рис. 8). [c.21]

Бумажная хроматография может быть применена для разделения смесей органических и неорганических веществ. Иногда требуется предварительная пропитка бумаги солями, например нитратом аммония, для высаливания органического растворителя. В методах осадочной хроматографии бумагу пропитывают предварительно растворами осадителей (оксихинолином, иодидом калия и т. п.), при этом изменяется состав дифференцирующего растворителя, а также состав проявителя и конечная стадия определения. [c.70]

Однородные по плотности и толщине, химически чистые бумаги из целлюлозного волокна применяют для распределительной хроматографии. По скорости капиллярного впитывания растворителей различают бумаги быстрые, средние и медленные. Скорость капиллярного поднятия воды оценивают в мин/30 см или по Клемму в мм/30 мин. Быстрые мягкие бумаги (150—200 мм/30 мин) рекомендуются для быстрого разделения сравнительно несложных смесей. Средние бумаги (100—130 мм/30 мин) — универсальные, их применяют в хроматографической практике наиболее часто. Медленные плотные бумаги (70—90 мм/30 мин) обладают повышенной разделительной способностью, но из-за большой продолжительности разделения используют их только в особых случаях. [c.239]

При использовании II растворителя через бумагу предварительно пропускают фосфатный буфер (pH 12,0), после чего бумагу высушивают и используют для хроматографии. В I растворителе лучшее разделение аминокислот происходит в том случае, когда раствор первые два раза пропускают до конца листа бумаги, третий и четвертый раз до половины листа, а пятый раз снова до конца листа бумаги. [c.41]

При определениях сахаров проводят нисходящую хроматографию. Бумагу укрепляют в ванночке хроматографической камеры, в которую наливают растворитель, и плотно закрывают камеру. [c.78]

Коэффициент распределения вещества зависит от его растворимости в подвижном растворителе и от адсорбции его на целлюлозе. Механизм разделения смеси веществ с помощью хроматографии на бумаге заключается в следующем. На пути движения растворителя по бумаге помещают смесь веществ, подлежащих разделению. Растворитель, достигнув участка бумаги, на котором находится смесь веществ, начинает экстрагировать отдельные вещества и передвигать их по бумаге с различной скоростью. При движении по бумаге вещества группируются по скорости их движения, образуя ряд отдельных групп, каждая из которых содержит одно или несколько веществ. Величина скорости движения веществ по бумаге обусловлена величиной равнодействующей двух противоположно направленных сил силы сродства вещества к растворителю (растворимость) и силы адсорбции вещества на набухшей целлюлозе. Чем выше растворимость данного вещества в растворителе и чем быстрее передвигается растворитель по бумаге, тем больше сила, двигающая вещество в направлении движения растворителя. Сила адсорбции вещества на целлюлозе тормозит это движение. Величина и конфигурация молекул передвигаемых веществ оказывает влияние на скорость движения вещества и его отделение от других веществ. Коэффициенты распределения веществ различны при употреблении различных растворителей, поэтому для хроматографического разделения смесей различных веществ необходимо выбирать растворитель, обеспечивающий наиболее полное разделение веществ. [c.73]

Техника хроматографирования. Различают четыре вида хроматографирования на бумаге восходящая хроматография, нисходящая, многократная и двумерная. При восходящей хроматографии растворитель движется снизу вверх. Нижний конец хроматограммы при этом погружен в растворитель. При нисходящей хроматографии, наоборот, верхний конец хроматограмм погружен в растворитель. Направление движения растворителя по бумаге сверху вниз. [c.74]

Многократная хроматография может быть нисходящей и восходящей. Этот вид хроматографирования характеризуется повторностью пропускания растворителя по бумаге в выбранном направлении. После того как растворитель дойдет до конца хроматограммы, ее вынимают, высушивают и хроматографирование повторяют. Многократное хроматографирование применяют в том случае, когда надо разделить смесь веществ, имеющих очень близкие Rf, или смесь веществ, образующих размытые зоны — хвосты (например, при анализе сульфитных щелоков). При таком хроматографировании получают компактные пятна разделенных веществ. [c.74]

Большое значение приобрел вариант распределительной хроматографии, в котором в качестве сорбента используется бумажная пульпа или бумажные листы (хроматография на бумаге). Успех разделения зависит от различия скорости движения отдельных компонентов анализируемой смеси и скорости движения растворителя. Хроматография на бумаге применяется, например, для разделения редкоземельных элементов. [c.25]

В соответствии с направлением миграции системы растворителей по бумаге мы разделяем хроматографию по технике проявления на восходящую, нисходящую и радиальную, или круговую [6, 7]. Для разделения очень сложных смесей красителей применяют двумерную хроматографию. Для выделения больших количеств красителя из сложных товарных смесей используется препаративная БХ [1]. Метод проточной БХ для красителей не применяется. [c.70]

Рис. 422. Принцип хроматографии на бумаге, а—нисходящая хроматография (бумага подвешена на кювете с растворителем) б — восходящая хроматогра- фия (бумага погружена в растворитель нижннм концом).

В состав зольных элементов бумаги входят ионы меди, легко образующие комплексные соединения с ионами аминокислот. Хотя количество их и очень невелико, однако образование медного комплекса можно заметить в виде розового выступа впереди пурпурного пятна аминокислоты на бумаге. Образование этих комплексов можно предупредить, добавляя к растворителям вещества, осаждающие ионы меди или образующие с ней более прочные комплексные соединения. В качестве таких веществ были использованы сероводород, цианистый водород, аммиак и специальный реактив на медь, купрон (а-бензоиноксим). Можно также предварительно обработать применяемую для хроматографии бумагу разбавленным раствором K4[Fe N)g]. [c.158]

Рис. 4-44. Разделение низкомолекулярных соединений методом хроматографии на бумаге. Образец наносят на старт и высушивают, а затем, используя капиллярный эффект, пропускают сквозь бумагу смесь двух растворителей. Разные компоненты образца движутся по бумаге с различной скоростью, которая зависит от относительной растворимости исследуемых компонентов в растворителе, адсорбируемым бумагой сильнее

Можно пользоваться для хроматографии полумикроприбором. Обычную пробирку укрепляют в штативе и закрывают пробкой с разрезом, в который вставляют полоску хроматогра4)Н 1еской бумаги, несколько суженную книзу. На дно пробирки наливают растворитель. Полоска бумаги не должна касаться стенок пробирки. [c.521]

Изучение первых хроматографических работ Цвета позволяет достаточно четко представить себе основные этапы открытия им проявительного варианта хроматографии. Вначале Цвет проводил статические опыты по поглощению пигментов из раствора фильтровальной бумагой. Изменяя растворитель и смещая адсорбционные равновесия, - Цвет последовательно переводил вновь в раствор различные пигменты смеси- Затем вместо фильтровальной бумаги он использовал порошок адсорбента. Поскольку порошок надо было фильтровать, М. С.- Цвет стал помещать его в воронку с фильтром и постепенно перешел к использованию динамического режима, совместив операции фильтрования и адсорбции, и стал осуществлять разделение сначала по чисто фронтальному варианту. Поскольку в статических опытах Цвет использовал промывание растворителем фильтровальной бумаги с пигментом для отмывки от каротина, ученый после частичного разделения окрашенных слоев стал проводить промывку растворителем в динамических условиях и получил про-явительный вариант жидкостной хроматографии, сразу отметив преимущества этого варианта по четкости разделения по сравнению с фронтальным вариантом. [c.12]

Систематическому изучению хроматография алкалоидов на бумаге подвергнута в работе Рассмртрены разные системы растворителей. Для бумаги, импрегнированной формамидом, предложена сильно полярная система хлороформ-диэтиламин, 9 1, а также слабо полярная циклогексан-диэтиламин, 9 1. У первой из них для колхицина /1 0.96, у второй - / 0. Смеси этих систем дают в зависимости от соотношения все возможные промел гточные значения В статье приведен соответствующий график. Например, при соотношении хлороформ - циклогексан - диэтиламин, 5 4 1, 0.63 Для бумаги, импрегнированной формамидом, удовлетворительные значения для колхицина и колхамина - 0.59 и 0.23 найдены при [c.102]

Бумажная хроматография находит применение при анализе смолистых и асфальтовых веществ. Перед проведением анализа фильтровальную бумагу обрабатывают в течение 6 ч спирто-бензольной смесью в аппарате Сокслета для удаления возможных люминесцирующих веществ. После этого полоски бумаги шириной 1 см и длиной 15—20 см погружают в 5 лл 0,001 %-ного раствора исследуемых веществ (например нефтяных смол) в спирто-бензольной смеси. В таком положении образцы оставляют на 12—14 ч, в течение которых на бумаге образуется хроматограмма, а растворитель улетучивается. Бумагу облучают ультрафиолетовым светом и фотографируют на цветную нленку. Подобным способом С. Р. Сергиенко, Ю. А. Бедов, М. П. Тетерина и др. [76] изучали смолистые вещества, выделенные из ромашкинской нефти. [c.61]

Реактивы и аппаратура для бумажной хроматографии. Бумага. Фильтровальная бумага должна быть ровной, достаточно плотной, чтобы растворитель двигался не слишком быстро н не слишком медленно, химически чистой и достаточно чувствительной. Бумага не должна адсорбировать аминокислот. Эти.м свойствам удовлетворяют некоторые сорта ватманской фильтровальной бумаги — № 1, № 2, № 4, а также мунктелевская быстрая бумага Л Ь 0. ОВ. Обычная фильтровальная бумага хорошего качества может употребляться, если после испытания она будет давать-четкие пятна (не растянутые и без [c.391]

Хроматография на бумаге. — Этот метод, введенный Мартином и Синджем в 1944 г., используемый теперь iBo всех областях химии, применим, в частности, для идентификации компонентов смеси аминокислот с ди- и трипептидами, получаемой при частичном гидролизе белков и полипептидов. Компоненты гидролизата распределяются между одой, адсорбированной на целлюлозе и являющейся неподвижной фазой, и органическим растворителем, подвижной фазой (например, водный этиловый спирт, бутиловый спирт, фенол), которая движется вдоль листа вверх или вниз, — восходящий или нисходящий способы. Более липофильные аминокислоты сильнее увлекаются органическим растворителем, более гидрофильные —проявляют большую тенденцию связываться с неподвижной водной фазой. Гомологичные соединения, отличающиеся даже на одно метиленовое звено, движутся с различной скоростью и легко могут быть разделены. По окончании хроматографии бумагу высушивают н опрыскивают нин-гидрином для проявления аминокислот в виде окрашенных пятен. Нингидрин (2-гидрат индантриона-1,2,3) окисляет аминокислоты до R HO, NHa и СОг. Образующееся дигидросоединение при взаимодействии с аммиаком образует соответствующий пигмент [c.636]

Простейший прибор для хроматографирования на бумаге можно устроить из колбы Эрленмейера, закрытой хорошо пригнанной пробкой. С нижней стороны пробки посередине сделан разрез, в который вставляют полоску фильтровальной бумаги такой длины, чтобы ее нижний край был погружен в растворитель, налитый на дно колбы. Края бумажной полоски не должны прикасаться к стенкам колбы. Таким путем можно получить простейшую восходящую хроматограмму. Можно также пользоваться для хроматографии полумикроприбором. Для этого пробирку обычных размеров укрепляют в штативе и закрывают пробкой с разрезом, в который вставляют полоску хроматографической бумаги, несколько суженной книзу. На дно пробирки наливают растворитель. Полоска бумаги не должна касаться стенок пробирки. [c.624]

Хроматографическую бумагу нарезают листами 15 X 33 см. Применяют метод нисходящей хроматографии. Нижнему концу бумаги придают пилообразную форму для удобства стенания растворителя. Помещают бумагу в хроматографическую камеру и промывают свободно протекающей смесью ацетона и воды (3 1) в течение 12—24 час. Промытую и высушенную бумагу смачивают в 1%-м растворе очищенного соевого масла в этиловом эфире и снова высзтпивают на воздухе. На стартовую линию, расположенную в 7 см от верхнего края бумаги, наносят с интервалами в 2 см исследуемый экстракт и стандартные растворы. Экстракт наносят в шести точках в количестве 1, 2, 3, 5, 10 и 20 мкл посередине — 1 мкл стандартного 0.05 н. бензольного раствора ДДТ и рядом 1 мкл 0.05 н. бензольного раствора гексахлорана. Тщательно высушив нанесенные на бумагу растворы, хроматограмму помещают в хроматографическую камеру и в течение 30 мин. насыщают парами ацетона. После этого в ванночку быстро вливают смесь 3 частей ацетона и 1 части воды и проявляют хроматограмму. По окончании проявления на бумаге обозначают фронт подвижного растворителя и высушивают ее. [c.119]

Хроматография с надкислотными проявителями. Полоски ватмана № 1 размером 18,4X61 см смачивают 7% раствором (вес/объем) тяжелого минерального масла в эфире. После удаления эфира на хроматограммы наносят растворы жирных кислот. После того как растворитель испарится, бумагу нагревают в течение 5 минут в сушильном шкафу при температуре 80—90° в течение этого времени нанесенная проба растворяется в подвижном растворителе. [c.22]

Бумажную хроматографию использовали для определения растворимости антибиотиков [295—297, 617, 618]. Был предложен метод определения ионного характера антибиотиков по особенностям поведения при хроматографировании на забуференной бумаге (так называемая рН-хромато-графия ). Хотя этот метод не нашел широкого применения, его следует рассмотреть более подробно, так как в некоторых случаях он может быть полезным. Изучаемое вещество хроматографируют в органических растворителях на бумаге, обработанной буферными системами с различными значениями pH — 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 и 10 [301, 302]. При этом все антибиотики в зависимости от особенностей хроматографического поведения можно разделить на несколько групп. Для антибиотиков-кислот пенициллинов, саркомицина, новобиоцина, гладиоло-вой кислоты, микофеноловой кислоты, цефалоспорина Pi, цитринина, фомеци-на А, геодина и терреевой кислоты характерно уменьшение подвижности при увеличении pH (рис. 34, а) [111, 300—302]. Антибиотики-осно- [c.65]

В системах с изоамиловым спиртом можно хроматографировать водорастворимые красители всех химических классов. Процесс в этой системе сходен с распределительной хроматографией и выявляет различия коэффициентов распределения и растворимости красителей. Однако скорость движения растворителя по бумаге, которая обычно в случае распределительной хроматографии влияет на воспроизводимость результатов, в данном случае не оказывает какого-либо действия. Это было показано, когда данный растворитель применяли для хроматографии в центробежном поле, где скорость движения системы растворителей по бумаге возрастает во много раз. В табл. 3.2 для отдельных групп водорастворимых красителей показаны интервалы изменений значений Rf, определенные по данным для нескольких сотен красителей с известным химическим строением. Значения Rf относятся к системе с изоамиловым спиртом на бумаге ватмап № 1. [c.75]

Полученные экстракты подвергали хроматографическому разделению с помощью бумажно хроматографии [бумага леппи-градская медленная растворитель н-бутаиол—уксусная кислота (ледяная)—вода, 4 1 5, органическая фаза хроматограмма нисходящая]. В качество свидетелей наносили хлорогеновую и кофейную кислоты. [c.127]

Простейшая установка для хроматографии аминокислот состоит из герметической камеры , внутри которой устанавливается ванночка с растворителем, а над ней укрепляется кусок бумаги, опущенный одним концом в растворитель. Бумага не должна касаться стенок камеры. Рекомендуется изгибать бумагу в форме цилиндра, опустив его в растворитель таким образом получается восходящий поток растворителя по бумаге. Если, кроме этого, на полоску бумаги наложить еще определенную разность потенциалов, то можно добиться разделения аминокислот, в обычных условиях дающих смешанные зоны. Таким методом отделяют глютаминовую кислоту от аргинина, а аспарагиновую кислоту—от лизина. В этом случае пользуются амфионным характером аминокислот, так как при данном значении pH часть [c.157]

С НОВОЙ ПОЛОСКОЙ бумаги и проводили разделение с помощью нового растворителя. При круговой хроматографии опи накладывали анализируемый образец на небольшой кусочек бумаги овальной формы, который затем помещали в центре кружка бумаги и пропускали через него ток растворителя. При канедом пропускании растворителя кружок бумаги заменяли свежим, а снятый проявляли. [c.134]

Методика работы. Для разделения пептидов в количествах до 15 мг (15 мкмолей) обычно используют ватман № 1 или № 4. Для разделения больших количеств (до 50 мг) применяют ватман ЗММ. Предварительно следует промыть бумагу в течение ночи той системой растворителей, которая будет использована в дальнейшем. Для промывания применяют методику нисходящей хроматографии. Перед нанесением проб промытую бумагу высушивают. Для препаративной работы более удобна не восходящая, а нисходящая хроматография, так как последнюю можно вести более длительное время, что улучшает-качество разделения. Если растворителю дают возможность стекать с листа бумаги, то на нижнем крае листа следует заблаговременно вырезать зубчатые выступы, улучшающие стенание растворителя с бумаги. Вещество, подлежащее разделению по возможности освобожденное [c.120]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология