Конкурентные ингибиторы, влияние

Рис. 68. Влияние концентрации ингибитора на величину кажущейся константы Михаэлиса ферментативной реакции в случае связывания с активным центром фермента двух молекул конкурентного ингибитора

Исследования фермент-субстратных взаимодействий, особенно проведенные в последние 25 лет, подтвердили и расширили эти идеи. Ферменты, обладающие подлинной специфичностью и использующие только один субстрат, трудны для систематических исследований. Существует, однако, много ферментов с весьма широкой специфичностью. Для них становится возможным измерение влияния изменения структуры субстрата на /Скат и /(м в условиях, оптимальных для природного субстрата. Другим полезным подходом является использование соединений — конкурентных ингибиторов реакции. Последние представляют собой соединения, связывающиеся в том же участке фермента, что и субстрат, обычно в силу близости их структур, и тем самым мешающие протеканию реакции между ферментом и субстратом, так как занимают места, в обычных условиях занимаемые субстратом. Эффект ингибирования четко зависит от концентрации, и каждый отдельный ингибитор можно охарактеризовать, измеряя влияние изменения его концентрации на скорость ферментативной реакции. Эффективность процесса выражается посредством константы ингибирования /С , которая, подобно Кч, в пределе равняется константе диссоциации. [c.511]

Влияние примеси конкурентного ингибитора в препарате фермента. [c.241]

Как указывалось в гл. 2 (рис. 2.1), специфически сорбированный выделяемый фермент может быть освобожден из комплекса с пришитым аффинным лигандом либо при помощи раствора конкурентного ингибитора (биоспецифическое элюирование), либо при изменении среды. Последний метод является более общим как правило, меняют pH или ионную силу раствора. Хотя влияния таких изменений могут иметь сложный характер, Грейвс и Ву [3], выводя закономерности для освобождения фермента с аффинного [c.26]

Из уравнения следует, что изменение pH среды оказывает влияние лишь на сродство субстрата к ферменту (т. е. на величину Кт) и не влияет на максимальную скорость реакции. Здесь также видна аналогия в действии водородных ионов и других конкурентных ингибиторов. [c.108]

Рис. 41. Влияние высоких концентраций субстрата (этилацетурат, ЭА) на сорбцию химотрипсином обратимого конкурентного ингибитора К-ацетил-В-триптофана а — отношение растворимостей ами-

Конкурентное и неконкурентное подавление можно различить экспериментально, измеряя (в присутствии и в отсутствие ингибитора) влияние концентрации субстрата на скорость реакции. Необходимо помнить, что эти два вида подавления представляют собой крайние случаи обычно же результаты удовлетворяют некоторому промежуточному состоянию. Так, например, I может не соединяться с активным центром, но сродство между EI и S может отличаться от сродства В и S, так что а 1. Когда S и I конкурируют за данный активный центр, они могут присоединяться к Е в другом центре и влиять на сродство Е к I и (или) к S. Таким образом, соединение EIS не является запрещенным и, следовательно, а ф оо. [c.69]

Рассмотрим, далее, случай -конкурентного ингибирования. Конкурентный ингибитор лимитирующего фермента Ед будет вызывать накопление В точно так же, как и неконкурентный ингибитор, рассмотренный выше, но в этом случае регуляция системы может быть весьма эффективной и общая скорость процесса практически не изменится. Влияние конкурентных ингибиторов на другие ферменты системы будет, вероятно, столь же слабым. [c.248]

Сульфаниламиды — бактериостатические препараты. По механизму действия — это конкурентные ингибиторы некоторых микробных ферментов (см. разд. 4.4.1). Когда размножение бактерий под влиянием химиотерапии прекращается, защитные системы организма сами постепенно их уничтожают. Бактерицидные антибиотики, появившиеся после открытия Флеминга, действуют на патогенные микроорганизмы сильнее и быстрее. Они особенно эффективны при поражении центральной нервной системы или суставных полостей, т. е. в тех случаях, когда защитные системы организма практически бессильны. [c.225]

Конкурентными ингибиторами являются такие, которые кон-курируют с субстратом за место на ферменте. Поэтому при определении /С, необходимо учитывать влияние концентрации субстрата на скорость роста культур. В острых опытах определяют влияние ингибитора иа скорость роста при двух различных концентрациях субстрата. Конкурентные ингибиторы ие влияют на Хгп, но изменяют величину К.ч (рис. 6.13). [c.135]

ВЛИЯНИЕ КОНКУРЕНТНОГО ИНГИБИТОРА [c.90]

Следовательно, влияние конкурентного ингибитора на скорость ферментативной реакции состоит в том, что он увеличивает кажу- щееся значение i мв (1 -Ь ИК ) раз, уменьшает в то же число раз кажущееся значение / Гми оставляет без изменения величину V. [c.80]

Использование графиков, построенных в двойных обратных координатах для анализа данных, полученньк при исследовании ингибирования ферментативных реакций, позволяет легко отличать конкурентные ингибиторы от неконкурентных. Проводятся две серии опытов по определению скорости реакции при одной и той же концентрации фермента. В одной серии концентрация субстрата тоже остается постоянной и соответствующими экспериментальными методами определяется влияние повышения концентрации ингибитора на начальную скорость реакции Го. В другой серии, наоборот, концентрация ингибитора поддерживается постоянной, но используются разные концентрации субстрата. На основе данных, полученных в опытах той и другой серии, строят графики в координатах 1/И [c.247]

Ри . 8.3. Л. Влияние конкурентного ингибитора, содержащегося в препарате субстрата, на скорость реакции. Слева — график зависимости скорости реакции от концентрации субстрата справа — график зависимости обратных величин. Б. То же, что и на рис. А, но с неконкурентным ингибитором, содержащимся в субстрате. [c.283]

Выше было проанализировано влияние наличия конкурентного ингибитора на поведение кривой насыщения в двойных обратных координатах. Приведем результаты анализа влияния конкурентного ингибитора на поведение кривой насыщения в координатах Скэтчарда. Эти результаты были получены и исследованы в работе [34]. [c.421]

Рис 1.15. Влияние конкурентного ингибитора на кинетику транспорта субстрата молекулы которого проходят через мембрану [c.39]

Влияние взаимозависимых конкурентных ингибиторов на кинетические параметры ферментативной реакции. Схема двухстадийной [c.227]

Влияние взаимонезависимых конкурентных ингибиторов на кинетические параметры ферментативной реакции. Влияние двух взаимонё-зависимых конкурентных ингибиторов на двухстадийную ферментатив- [c.228]

Как видно из рис. 6.11, влияние конкурентного ингибитора на скорость реакции приводит к изменению Ку , максимальная скорость реакции при этом остается без изменения. Неконкурентное ингибирование связано со снижени-ем без изменения константы Мехаэлиса. [c.78]

Вывод, сделанный на основании рассмотренных результатов физико-химических исследований, характеризующих воздействие углеводородов на структуру белков, подтвердился и при изучении влияния углеводородов на биологическую активность ферментов (на примере некоторых протеаз). Углеводороды, солюбилизированные ферментами, тормозят протеолитические реакции пепсина, химотрипсина и трипсина. Однако углеводороды не влияют на лгаксимальную скорость гидролиза, а лишь увеличивают константу Михаэлиса. Эти результаты, а также литературные данные позволяют сделать вывод о том, что углеводороды, являясь конкурентными ингибиторами протеолитических ферментов, существенно не изменяют их структуры [163, 164]. [c.32]

Уравнение (VIII. 21) аналогично уравнению (VIII. 3), выражающему влияние конкурентного обратимого ингибитора на скорость ферментативной реакции. Эта аналогия вполне естественна. В соответствии со схемой реакций (стр. 105) водородные ионы выступают в качестве конкурентного ингибитора, присоединяясь к IEH+]-форме фермента (реакция, характеризующаяся константой диссоциации Кь)- В знаменателе уравнения (VIII. 21) это торможение [c.107]

Таким образом, из зависимостей к и кз от pH можно найти как к2 и 3, так и К н К-г (например, для прямой зависимости к йу от к угловой коэффициент равен К, г отсекаемый отрезок—/( 2). Определенные подобным образом значеиия рК равны 6,6—6,7 [12, 15], в то время как величина рКг составляет 7,2—7,4 (в водио-изопропанольных и водно-ацетоновых растворах) [12, 15, 16]. В ряде опытов были измерены константы Кт, к2 и кз гидролиза, катализируемого а-химотрипсииом, в смесях апротонных растворителей с водой [17]. Влияние органического растворителя в основном сводится к увеличенщо при этом константы скоростей уменьшаются незначительно. Предполагают, что апротонные растворители действуют как конкурентные ингибиторы, способность которых к ингибированию убывает в следующем ряду диоксан > ацетонитрил > ацетон > л етанол. [c.244]

Реакция, катализируемая уропорфириноген-I—синтетазой, неконкурентно тормозится формальдегидом, а также такими соединениями, как тг-хлормеркурибензоат, Hg + и Ag+, которые реагируют с сульфгидрильными группами. Некоторые аналоги ПБГ являются конкурентными ингибиторами в этой реакции. Ионы аммония и гидроксиламин оказывают слабое влияние на скорость потребления ПБГ, но способствуют накоплению полипиррольных промежуточных продуктов синтеза уропорфириногена I. [c.447]

В последнее время стало ясно, что монофункциональные реагенты лучше всего использовать совместно с бифункциональными, так как результаты таких исследований дают возможность оценить расстояние между участвующими в катализе функциональными группами глобулярной структуры фермента. Часто это оказывается единственным методом, позволяющим убедиться в том, что существенная для катализа группировка локализована в активном центре, а не выполняет какую-то структурную функцию [14]. Так, конкурентный ингибитор, взаимодействующий с одной из функциональных групп фермента, может ослабить действие даже необратимого реагента, специфичного в отношении другой групЦировки, если эти две группировки находятся в активном центре. Если эти два вида реакционноспособности могут быть совмещены в одной молекуле, то исследование влияния такого бифункционального реагента на активность фермента может помочь в оценке расстояния между группировками. При этих условиях наличие обратимого компонента может не ослабить, а усилить действие необратимого компонента. [c.224]

Обсуждается пpиыeниlJlo ть для количественной оценки влияния апротонных органических растворителей уравнения Клемента-Бендера,учитывающего изменение диэлектрической проницаемости среды и специфическое действие растворителя как конкурентного ингибитора фермента. [c.545]

В хемостате конкурентные и неконкурентные ингибиторы но-разному влияют на характер хемостатной кривой (рис. 6.14). В присутствии неконкурентных ингибиторов заметно изменение Хгп и постоянство К.Ч- в случае конкурентных ингибиторов видно возрастание К.ч при отсутствии влияния или слабом влиянии на [Хт- Часто ингибиторы обладают смешанным действием, изменяя одновременно и и 1 . [c.135]

Влияние истинного конкурентного ингибитора также необычно. Малат и суишнат являются структурными аналогами аспартата, которые предположительно конкурируют с аспартатом за места связывания на ферменте. [c.90]

Здесь с , как и ранее, представляет собой отношение Кав/Квв. Из этих уравнений видно, что хотя лиганд Ь напоминает обычный конкурентный ингибитор, его влияние на связывание X осложняется взаимодействием субъединиц.Что касается второго связывающего центра в белковой молекуле, то Ь действует исключительно-как ингибитор, так как /Сг монотонно падает с ростом [Ь]. Однако если /Свв> 2Кав (т. е. с < 1/2), то Ь при низких концентрациях действует как активатор, потому что в этом случае числитель выражения для К1 растет вначале с ростом [Ь] более круто, чем знаменатель. Влияние Ь на кооперативность связывания X совершенно ясно это видно из уравнения (7.14) независимо от того, что имеет место в отсутствие Ь— положительная или отрицательная кооперативность, повышение концентрации Ь сопровождается уменьшёнием кооперативности до полного ее исчезновения. [c.193]

Плохо обусловленные уравнения появляются при решении задач регрессионного анализа в тех случаях, когда данные содержат мало информации о некоторых из параметров или не содержат ее совсем. Например, конкурентные ингибиторы окаг вывают наибольшее влияние при низких концентрациях субстрата, и серия наблюдений, проведенных исключительно при высоких концентрациях субстрата, часто не позволяет оценить константу ингибирования, сколь бы велико ни было число измерений. При решении более сложных задач указанием на наличие плохо [c.258]

Конкурентный ингибитор может связываться только со свободным ферментом и не связывается с фермент-субстратным комплексом (рис. 2 А). При регуляции фермента по неконкурентному механизму эффектор мо-. жет сндзываться как со свободным ферментом, так и с фермеит-субст] атным комплексом (рис. 2 Б). Связывание такого регулятора происходит в специал,ьном учаг стке, который отличается от активного центра. Этот регулятор называется аллостерическим. Неконкурентные активаторы увеличивают, а ингибиторы уменьшают каталитическую активность фермента и, как правило, не влияют на сродство фермента к субстрату. В свою очередь, и субстрат не в состоянии усилить или ослабить величину данного регуляторного влияния. При регуляции, получившей название бесконкурентная , эффектор может связываться только с фермент-субстрат-ным комплексом, что приводит к изменению скорости катализа и Кы для субстрата (рис. 2 В). [c.13]

Конкурентное ингибирование может быть выявлено с помощью кинетического анализа следует изучить влияние концентрации ингибитора на зависимость V от [.З], используя уравнение Лайнуивера— Бэрка (11), как это показано на рис. 8.7. Действие конкурентных ингибиторов подчиняется следующему уравнению, в которое входят /С (константа диссоциации комплекса Е1) и [I] (концентрация I) [c.264]

Дипиридамол — конкурентный ингибитор фосфодиэстеразы и аденозиндезаминазы повышает концентрацию аденозина и цАМФ в тканях, умеренно потенцирует активность простациклина. Препарат увеличивает срок жизни тромбоцитов (при их ускоренном разрушении), незначительно уменьшает их агрегацию. Оказывает умеренное сосудорасширяющее действие, несколько снижает АД. Незначительно увеличивает ЧСС, не влияя на сердечный выброс и сократительную способность миокарда. Оказывает влияние на скорость выхода из костного мозга и продолжительность жизни тромбоцитов при приёме в дозах не менее 400 мг/сут. Не изменяет венозный кровоток и ПИ. [c.269]