Справочник химика 21

Химия и химическая технология

Статьи Рисунки Таблицы О сайте English

Ингибиторы в препарате субстрата

    Для медицинской практики важно представление об антиметаболитах, которые являются конкурентными ингибиторами природных субстратов (точнее, ферментов, превращающих эти субстраты). Сульфаниламидные препараты вытесняют парааминобензойную [c.74]

    Возможно также, что препарат субстрата содержит ингибитор. Если это конкурентный ингибитор (что бывает чаще всего), то к сожалению, он обнаруживается только при сравнении данного препарата с другим, лучше очищенным препаратом. Математически эту ситуацию можно описать следующим образом. [c.282]


    Ри . 8.3. Л. Влияние конкурентного ингибитора, содержащегося в препарате субстрата, на скорость реакции. Слева — график зависимости скорости реакции от концентрации субстрата справа — график зависимости обратных величин. Б. То же, что и на рис. А, но с неконкурентным ингибитором, содержащимся в субстрате. [c.283]

    При неконкурентном ингибировании ингибитор необратимо реагирует с иным (по сравнению с тем, который атакуется субстратом) активным центром фермента, и за счет этого понижает активность, фермента. Максимальная скорость реакции ниже, чем з отсутствие ингибитора значение К остается неизменным. Действие лекарственных препаратов, ядов и ряда боевых отравляющих веществ основано на торможении действия ферментов. [c.660]

    Таким образом, можно конструировать лекарственные вещества, ингибирующие ферменты по конкурентному типу. Чтобы быть эффективным, ингибитор должен иметь высокое сродство к ферменту. В противном случае необходимо назначать большие дозы лекарственных препаратов, чтобы активно конкурировать с эндогенным субстратом за активный центр фермента. [c.77]

    Скорость ферментативной реакции, которая определяется количеством субстрата, прореагировавшего в единицу времени, находится в зависимости от количества субстрата, количества фермента и ряда других факторов (температуры, [Н+], присутствия продуктов ферментативной реакции, активаторов и ингибиторов, степени чистоты ферментного препарата). При малых количествах субстрата скорость ферментативной реакции возрастает пропорционально количеству субстрата при избыточных количествах субстрата — постепенно падает. При оптимальных или избыточных количествах субстрата скорость ферментативной реакции обычно прямо пропорциональна количеству фермента, таким образом скорость реакции возрастает вдвое при увеличе- [c.39]

    Современное состояние наших знаний в этой области достигнуто благодаря использованию целого ряда экспериментальных подходов. К ним относятся 1) применение более совершенного спектроскопического оборудования для измерения содержания переносчиков (НАД, флавопротеидов, цитохромов) и кинетики их восстановления и окисления в разнообразных дыхательных органеллах 2) использование разнообразных методов, позво-ляюш их удалять из митохондрии ферменты, участвующие в окислении субстратов, окислительном фосфорилировании и других реакциях, связанных с дыханием, с тем чтобы можно было исследовать лишь те реакции, которые ответственны за перенос электронов 3) дальнейшее дробление митохондрий и дыхательных субчастиц для получения комплексов дыхательных ферментов, свободных от структурных белков эти комплексы можно подвергать дальнейшей очистке для получения гомогенных препаратов и исследования свойств, функций и взаимосвязи их компонентов 4) воссоздание цепи переноса электронов с использованием вышеупомянутых препаратов совместно с растворимыми ферментами 5) использование ингибиторов дыхания. [c.389]


    Гиперболический характер рассматриваемой зависимости имеет значение также и для практики. В частности, поскольку для определения содержания фермента в препарате обычно используют субстрат в высокой концентрации, на результаты не влияют небольшие ошибки при отмеривании раствора субстрата, а также случайное присутствие ингибиторов данного фермента. Действительно, начальная скорость реакции прямо пропорциональна концентрации фермента при любой концентрации субстрата, за исключением крайнего случая, когда молярные концентрации субстрата и фермента по порядку величины близки. [c.41]

    Исследование зависимости скорости ферментативной реакции от таких условий, как концентрация субстрата, концентрация фермента, pH, температура, присутствие активаторов или ингибиторов может дать ценные сведения о строении и механизме действия ферментов. Измерение скоростей ферментативных реакций является также основой для определения и сравнения ферментативной активности разных препаратов и сравнения последней в условных единицах. [c.218]

    Аналогичные выводы вытекают из исследования ван дер Клота [83] об активном выходе натрия из изолированной мышцы лягушки. Эзерин (10-3 М) и неочищенный препарат ТЭПФ (5-10 М) тормозили выход натрия и в случае эзерина отмечен параллелизм между уровнем внутриклеточной холинэстеразы и потерей натрия при различной концентрации ингибитора (внутриклеточной холинэстеразой автор считал тот фермент цельной мышцы, который не разрушался под действием ионизированных ингибиторов, но гидролизовал этил-хлорацетат — весьма неадекватный субстрат, поскольку его специ- [c.178]

    Зависимость скорости реакции от удельной концентрации иммобилизованного фермента (количества активного фермента на 1 г носителя). Как видно из анализа уравнения (7), скорость реакции в диффузионной области не должна изменяться при возрастании удельной концентрации иммобилизованного фермента. Кроме того, скорость диффузионно-контролируемых реакций не должна также зависеть от таких факторов, как изменение pH, ионной силы, добавление ингибиторов и активаторов, которые оказывают специфическое влияние исключительно на ферментативные стадии (что легко проследить в случае нативного фермента). Следует, однако, учитывать, что для одного и того же препарата иммобилизованного фермента реакция со специфическим (высокореакционноспособным) субстратом может быть диффузионно контролируемой, а с неспецифическим субстратом (менее реакционноспособным) протекать в кинетической области. [c.104]

    Применение иммобилизованных ферментов, позволяющих проводить массовые химические анализы в отдельных пробах или в потоке (с многократным использованием одного и того же препарата фермента), в значительной степени снимает проблему высокой стоимости ферментных методов анализа и зачастую повышает точность аналитического метода. Существуют два общих подхода к аналитическому определению концентрации реагентов (субстратов) в исследуемой системе. В одном из них ферментативную реакцию доводят до полного израсходования определяемого вещества (или до установления в системе равновесия между исходными реагентами и продуктами реакции), регистрируя при этом изменение какого-либо подходящего физического или химического свойства системы, и по количеству образовавшегося продукта рассчитывают количество субстрата в исходном образце. Во втором подходе используют кинетические методы анализа для определения скорости появления продукта или исчезновения субстрата в ферментативной реакции и вычисление исходной концентрации субстрата по соответствующей калибровочной кривой. Этот метод применим также для определения концентрации эффекторов (ингибиторов или активаторов), присутствующих в реакционной системе. Оба данных подхода были реализованы на практике с применением иммобилизованных ферментов. [c.16]

    Применение аффинной хроматографии в качестве метода изучения взаимодействий находится еще на ранней стадии развития, несмотря на то что количественная аффинная хроматография была введена уже десять лет назад [1—3]. Действительно, количество исследований, касающихся методологических аспектов аффинной хроматографии, примерно равно количеству сообщений по применению этого метода в конкретных экспериментальных системах. Большинство этих исследований способствовало применению аффинной хроматографии для оценки равновесия с участием ферментов и модификаторов, ингибиторов или субстратов [1—12], но метод был также использован и для характеристики взаимодействий белок — лекарственный препарат [13], система антиген — антитело [14] и, в меньшей степени, белок-белковых взаимодействий [15, 16]. По существу метод заключается в иммобилизации биоспецифической реагирующей группы X на инертной хроматографической матрице (например, часто на сефарозе) и определении средневзвешенных величин объема элюирования Уа распределяющегося растворенного вещества А в ряде хроматографических экспериментов, в которых растворенное вещество мигрирует в присутствии различных концентраций лиганда 5, также специфически взаимодействующего с А и/или X, В некоторых примерах различные изменения значения Уа отражали конкуренцию между растворенными и иммобилизованными реагентами за одно и то же положение в А [2—5, 7—14] в других изменения в величинахГд были обусловлены наличием взаимодействия иммобилизованного реагента X с бинарным А5-комплексом, образованным растворенным веществом и растворимым лигандом [1, 6]. Цель количественной аффинной хром ографии — объяснить возникновение изменений в величинах Га в предложении существования тех или иных равновесий. Поскольку положение равновесия зависит от концентрации (в соответствии с законом действия масс), точное определение состава смеси реагентов, к которой относится Га, обеспечивает применение фронтальной хроматографии [3, 4]. [c.192]


    Если в препарате фермента содержйтся примесь конкурентного ингибитора, то схему ферментативной реакции при равновесных условиях образования комплексов фермент — субстрат и фермент — ингибитор следует записать в виде [c.241]

    АНТИФЕРМЁНТНЫЕ СРЕДСТВА (ингибиторы ферментов), подавляют активность ферментов и увеличивают в результате концентрацию их субстратов в организме. Специфичные А.с.-в-ва белковой природы, взаимодействующие только с определенными ферментами. Механизм этого взаимодействия м, б. конкурентным и неконкурентным. В первом случае препарат связывается с тем же активным центром фермента, что и субстрат. Последний, накапливаясь, начинает реактивировать фермент, вытесняя ингибитор. При неконкурентном механизме препарат фиксируется аллостерич. рецептором и для восстановления ф-цин фермента концентрация субстрата значения не имеет. [c.183]

    ИММОБИЛИЗбВАННЫЕ ФЕРМЕНТЫ (от лат. 1штоЫ-и8-неподвижный), препараты ферментов, молекулы к-рых связаны с матрицей, или носителем (как правило, полимером), сохраняя при этом полностью или частично свои каталитич, св-ва. И, ф, обычио не раств, в воде между двумя фазами возможен обмен молекулами субстрата, продуктов каталитич, р-ции, ингибиторов и активаторов. [c.215]

    Ингибиторы ферментов действуют на разных стадиях реакции. Сильно адсорбирующиеся вещества (Hg, НСМ, 8 и т. п.) блокируют активные центры разных ферментов независимо от структуры. Наоборот, антиметаболиты могут отравить из сотен ферментов одной клетки только один, оттого что их боковые цепи адсорбируются на структурно-близких выемках белковой части ферментов. Таким образом, антиметаболит должен иметь строение группы, адсорбированной на белковой части фермента, близкое к строению субстрата, более сильную здсорбируемость в индексной группе, но может содержать различные заместители. Строение отравляющей группы тоже не должно сильно отличаться от строения индексной группы субстрата для того, чтобы она могла уложиться на активный центр фермента. Примером могут служить сульфамидные препараты. [c.89]

    При этом необходимо иметь в виду, что, работая с неочищенными ферментными препаратами (гомогенатами или экстрактами мозга, мышц и т. д.) и используя в качестве субстрата ацетилхолин, исследователь не имеет возможности различить холинэстеразу и ацетил-холинэстеразу и определяет суммарную скорость реакции, связанную с действием обоих типов фермента. Для изучения свойств отдельных ферментов необходимо их препаративное разделение с соответствующим контролем индивидуальности. В практике работы принято использование специфических субстратов, расщепляющихся одним и не расщепляющихся другим типом фермента, либо использование специфических ингибиторов. В последнем случае, если ингибитор избирательно тормозит действие] одного из ферментов, можно в качестве субстрата использовать ацетилхолин. Для измерения активности ацетилхолинэстеразы в присутствии холинэстеразы принято использование в качестве субстрата ацетил-Р-метилхолина для измерения активности холинэстеразы — бутирилхолина. [c.142]

    Авторы использовали взаимодействие препаратов частично очищенных ферментов с диизопропилфторфосфатом, содержащим радиоактивный изотоп Р , и определяли степень снижения активности ферментов и фактическое количество присоединившихся молекул ингибитора (по Р ). Для учета неспецифического присоединения ингибитора к посторонним белкам проводилась реакция в условиях защиты фермента субстратом. При этом для холинэстеразы сыворотки крови лошади была получена величина Um 5-10 мин (температура 38°, pH 7,4). Возможно, что несколько меньшая величина Ум, полученная Коэном и сотрудниками, объясняется неполной защитой холинэстеразы субстратом от ингибирующего действия диизопро-пилфторфосфата (см. ниже). [c.167]

    Ингибирование карбоангидразы ацетазол-амидом. Карбоангидраза сильно ингибируется ацетазоламидом, применяемым как мочегонное средство и как препарат для лечения глаукомы, характеризующейся чрезмерным повьппением внутриглазного давления. В этих и других секреторных процессах карбоангидраза играет важную роль, поскольку она участвует в регуляции pH и содержания бикарбоната во многих жидкостях организма человека. На рисунке показана экспериментальная кривая, выражающая зависимость скорости реакции, катализируемой карбоангидразой от концентрации субстрата. При проведении опыта в присутствии ацетазоламида получается нижняя кривая. Исходя из анализа кривых и ваших знаний о кинетических свойствах конкурентных и неконкурентных ингибиторов ферментов, определите природу ингибирования ацетазоламидом. Объясните, на чем основано ваше утверждение. [c.271]

Рис. 22-25. Аллопуринол-ингибитор ксантиноксидазы. В результате небольшого изменения (показано на красном фоне) в структуре гипоксантина (субстрата фермента) получается мощный ингибитор фермента, обладающий лечебным действием. Аллопуринол, эффективный лекарственный препарат, был создан именно как конкурентный ингибитор ксантиноксидазы. Рис. 22-25. <a href="/info/75672">Аллопуринол</a>-<a href="/info/1320986">ингибитор ксантиноксидазы</a>. В результате <a href="/info/1461937">небольшого изменения</a> (показано на красном фоне) в структуре гипоксантина (<a href="/info/100484">субстрата фермента</a>) получается <a href="/info/1435528">мощный ингибитор</a> фермента, обладающий <a href="/info/513194">лечебным действием</a>. <a href="/info/75672">Аллопуринол</a>, эффективный <a href="/info/102880">лекарственный препарат</a>, был создан именно как <a href="/info/196476">конкурентный ингибитор</a> ксантиноксидазы.
    Например, рентгеноструктурный анализ превратился в жизненно важный инструмент при исследовании специфических механизмов действия лекарственных средств. Изучение строения субстратов, ингибиторов и антибиотиков дает информацию об особенностях геометрии рецептора, на котором связывается препарат. Это первый шаг при создании новых лекарственных средств. Примером может служить недавно проведенное определение способа связывания лекарственного препарата триостина А с фрагментом ДНК. [c.231]

    Для чувствительного определения галоген- и псевдогалоген-ангидридов кислот фосфора в общем достаточно 10 мин инкубации, для фосфорорганических инсектицидов продолжительность принята равной 30 мин. Поскольку как ингибирование, так и расщепление субстрата зависит от pH среды, необходимо во время инкубации ферментов с ингибиторами поддерживать соответствующее каждому ферменту оптимальное pH. В случае тетрама и аналогичных соединений, содержащих в молекуле третичную аминогруппу, ингибирование зависит от степени ионизации соединения. Так, при pH более 8,5 доля неионизированного соединения возрастает и угнетение уменьшается. Для получения воспроизводимых результатов необходимо применять ферменты со стандартизованной активностью. Наиболее широко используется лиофилизиро-ванная сыворотка крови лошади. При отсутствии готового препарата его можно относительно просто приготовить в лаборатории сублимационной сушкой жидкой сыворотки (сушка вымораживанием). [c.174]

    Другими часто используемыми для аналитических целей источниками фермента являются сыворотка крови человека, гемолизи-рованные эритроциты крови человека, крупного рогатого скота или лошади, или при работе с неспецифическими субстратами — гомо-генаты печени. По возможности выбирают препарат фермента, активность которого наиболее чувствительна к действию определяемого ингибитора. [c.175]

    С-концевую последовательность самой карбоксипептидазы В недавно определили Фольк и др. [9]. Фермент сперва денатурировали 0,2%-ным раствором додецилсульфата натрия, обрабатывали 0,005 М раствором о-фенантролина (ингибитор) и длительно диализовали против 0,02Л1 вероналового буфера pH 7,5, содержащего хлористый натрий (0,Ш). Денатурированный фермент инкубировали при 25° с карбоксипептидазой А (0,5% субстрата отношение фермент/субстрат-1 80) в присутствии 0,001 М диизопропилфторфосфата. Была установлена последовательность . ..- (Вал-Сер)-Асп (NH2)-Tpe. Из того же препарата после гидразинолиза с последующим динитрофенилированием (с.м. стр. 191) было получено  [c.189]

    Предположение основывалось на следующих соображениях 1. Для различных препаратов почки свиньи и в присутствии различных ингибиторов всегда отмечался параллелизм между гидролизом ДФФ, с одной стороны, и гидролизом Ы-ацетилпроизводных ва-лина, лейцина, метионина и аланина — с другой. 2. Оба фермента обладали одинаковой растворимостью, проявляли одинаковый рН-оптимум и одинаково реагировали на воздействие температуры, этанола и ионов металлов. 3. Опыты со смешанным субстратом свидетельствовали о существовании только одного фермента. 4. Оба фермента оказались неразделимыми при электрофорезе на бумаге. На основании этих данных Маунтер предположил, что нормальной функцией ДФФ-азы является гидролиз и синтез производных аминокислот. Этот вывод не совпадает с наблюдениями Коэна и Варринга, приведенными ниже. [c.145]

    Уилсон и Коэн нашли, что около 25"о общей холинэстеразы является внутренней , а остальная часть — наружной . Однако количественные определения в этих условиях очень затруднены, потому что в опытах на интактных препаратах никогда нельзя уверенно оценить концентрацию субстрата в местах расположения фермента, а насытить систему субстратом невозможно, так как известно, что избыток субстрата тормозит активность холинэстеразы. На рис. 33 представлены некоторые результаты исследования действия ингибиторов на холинэстеразу нерва краба (данные для ДФФ не приведены). Авторы считают, что ингибиторы могут быть разбиты на два класса а) простигмин, ТЭПФ и декаметоний, которые избирательно тормозят внешний фермент, и б) ДФФ и эзерин, которые угнетают как внутреннюю , так и внешнюю холинэстеразу. По мнению авторов, это объясняет тот факт, что вещества класса б блокируют нервную передачу, в то время как соединения класса а лишены этой способности. Необходимо отметить, что различие между простигми-ном и декаметонием, с одной стороны, и эзерином—с другой, выражено недостаточно четко (ТЭПФ является исключением). Приведенные данные трудно интерпретировать потому, что в них не видно зависимости между ионизацией и проницаемостью. Так, эзерин, который при pH 7 ионизирован на 91% (его рКа = 8,0 [143]), проникает легко, в то время как ТЭПФ не проникает, хотя он не ионизирован и, как известно, способен проникать через ионные барьеры [144]. Было бы интересно провести аналогичное исследование с более тщательным подбором условий в отношении концентрации веществ и времени их воздействия. При рассмотрении рис. 33 создается впечатление, что оба эти фактора выбраны несколько произвольно. Более серьезной проблемой является отсутствие данных [c.219]

    Биохимические реактивы в отличие от органических получают в основном микробиологическим синтезом в сочетании с методами биотехнологии, а также с экстракцией и тонким органическим синтезом. Основные биохимические реактивы и препараты - аминокислоты и их производные, пептиды и полипептиды, нуклеиновые кислоты, их компоненты и производные, ферменты, в том числе иммобилизованные. К ним относят также различные вспомогательные материалы и вещества для производства и использования препаратов - носители, активаторы, ингибиторы, субстраты, связуюище вещества, цеолиты, ионообменные смолы и т.п. Мировой ассортимент биохимических реактивов достигает по числу индивидуальных соединений 6-7 тыс. наименований, по числу товарных марок продукции - 10-14 тыс. и отличается большой изменчивостью. [c.63]

    Нарушения метаболизма пуринов и пиримидинов. Нарушения обмена пуринов. Подагра. При pH 5,75 в растворенном состоянии находят мочевую кислоту и ее натриевую соль (урат натрия) в эквимо-лярных количествах. При рН<5,75 основной формой является мочевая кислота, при рН>5,75 — урат натрия. О величине растворимого уратного пула можно судить по содержанию урата натрия в сыворотке крови (в норме 20—60 мг/л). При повышении этого показателя (гиперурикемия) и сдвиге pH в кислую сторону образуются кристаллы, чаще всего ведущие к острому или хроническому подагрическому артриту. В водных растворах мочевая кислота в 17 раз менее растворима, чем ее натриевая соль. При pH 5,0 насыщенный раствор уратов достигается при концентрации 150 мг/л, а при pH 7,0 в моче может раствориться в 10 раз больше уратов. Следовательно, интенсивность образования камней мочевой кислоты в мочевыводящих путях можно уменьшить, смещая pH мочи в щелочную сторону. В лечении подафы используют диету, бедную пуринами, а также аналог гипоксантина — аллопуринол. Этот препарат вначале действует в качестве субстрата ксантиноксидазы, а затем в качестве ее ингибитора (фермент гидроксилирует аллопуринол, превращая его в аллоксантин, который остается прочно связанным с активным центром). Это пример самоубийственного ингибирования, когда фермент превращает какое-то соединение в мощный ингибитор, который сразу же инактивирует фермент. [c.289]

    Когда клетки достигнут удовлетворительного роста, вводят вещество, которое должно служить субстратом. Если последнее представляет собой растворимое соединение, то его просто добавляют в виде стерильного водного раствора, тогда как нерастворимое в воде вещество должно быть внесено в среду в максимально диспергированном состоянии для того, чтобы площадь поверхности соприкосновения с микроорганизмом или с образуемыми им ферментами была наибольшей. Тонкое диспергирование нерастворимого в воде вещества часто достигается следующим образом соединение растворяют в асептических условиях в смешивающемся с водой органическом растворителе и затем постепенно добавляют при хорошем перемешивании к водной стерильной среде. При выборе органического растворителя и необходимого количества его следует обращать внимание на то, чтобы он не оказался ингибитором обмена у микроорганизма и не тормозил действие фермента в к.четочных препаратах. Для этой цели пригодны такие растворители, как этиловый и прониловый спирты, ацетон и диоксан. [c.17]

    Если АТР-синтетаза в норме не транспортирует из матрикса, то дыхательная цепь, находящаяся во внутренней митохондриальной мембране, при нормальных условиях переносит протоны через эту мембрану, создавая таким образом электрохимический протонный градиент, который в свою очередь приводит в действие АТР-синтетазу. При определенных условиях можно экспериментально продемонстрировать способность дыхательной цепи откачивать протоны из матрикса. Можно, например, обеспечить взвесь изолированных митохондрий подходящим субстратом для окисления, а поток протонов через АТР-синтетазу блокировать соответствующим ингибитором. В анаэробных условиях небольшая добавка кислорода к такому препарату вызовет вспышку дыхательной активности, которая будет длиться одну-две секунды-пока весь кислород не израсходуется. Во время такой вспьппки дыхания с помощью чувствительного рН-электрода можно зарегистрировать внезапное подкисление среды в результате выталкивания ионов из матрикса митохондрий. Через одну-две минуты pH вернется к первоначальному уровню, так как протоны проходят через мембрану обратно по различным медленным каналам (рис. 9-29). [c.28]

    Для восстановления функциональной активности митохондрий после быстрого замораживания — отогрева в среде без криопротектора необходимо в среду криоконсервирования добавить субстраты (сукцинат, глутамат), ионы магния, адениновые нуклеотиды или ингибиторы перекисного окисления и гидролиза липидов фосфолипазами (комплексоны Са +, местные анестетики, антиоксиданты). При использовании этих соединений значения биоэнергетических показателей восстанавливаются при инкубации суспензии митохондрий в физиологических условиях и достигают 70% от уровня контроля. Иногда возникает необходимость сохранять функцию митохондрий в составе срезов тканей (почки, печени, сердца и т. д.). С целью увеличения срока хранения срезов ткани почки и улучшения структурно-функциональ-пого состояния митохондрий тканевой препарат замораживают следующим способом охлаждают на первом этапе от 37 до 4°С со скоростью 5—7°С/мин, на втором — со скоростью 1 — 1,5°С/мин до —(6—8)°С и на третьем этапе — со скоростью 300—400°С/мин до —196°С, т. е. быстрым погружением ткани в жидкий азот. Перед замораживанием сред ткани инкубируют в растворе, содержащем сукцинат и глутамат натрия, аденозинтри-фосфат, цитохром с, ЭДТА, сахарозу и фосфат в следующих соотношениях (М)  [c.75]


Смотреть страницы где упоминается термин Ингибиторы в препарате субстрата: [c.404]    [c.543]    [c.642]    [c.42]    [c.40]    [c.530]    [c.478]    [c.291]    [c.172]    [c.317]    [c.154]    [c.478]    [c.29]    [c.269]    [c.575]    [c.109]    [c.137]    [c.83]   
Ферменты Т.3 (1982) -- [ c.0 ]




ПОИСК





Смотрите так же термины и статьи:

Субстрат



© 2024 chem21.info Реклама на сайте