Малата определение

ЧТО способность осуществлять окислительное фосфорилирование присуща исключительно митохондриям, что дыхание (т. е. окисление) и фосфорилирование могут быть разобщены с помощью определенных соединений, таких, как 2,4-динитрофенол, что подавляющее число точек фосфорилирования связано с цепью переноса электронов, а не с окислением на уровне субстрата и что число молей АТФ, образующегося на 1 г-атом поглощенного кислорода, т. е. отношение Р/0 для различных субстратов, подвергающихся одностадийному окислению, весьма близко к целым числам. Так, для превращения а-кетоглутарата в сукцинат было получено значение Р/0 4 для превращения малата в оксалоацетат, глутамата в а-кетоглутарат и 3-оксибутирата в ацетоацетат отношение Р/0 равно 3 для превращения сукцината в фумарат или малат это отношение равно 2. [c.394]

Отмытые и подсушенные с помош,ью кусочка фильтрова льной бумаги электроды полярографа осторожно опускают в кювету, заполненную 2 мл среды 1 (проба 1) до полного выхода пузырька воздуха. С помощью специального потенциометра устанавливают перо включенного самописца в исходное положение, соответствующее исходной концентрации кислорода в среде (в самописцах типа КСП-4 — в крайнее правое положение). Включают движение диаграммной ленты и, убедившись в отсутствии дрейфа, с помощью микропипетки добавляют в кювету 0,04—0,05 мл густой суспензии митохондрий (4—6 мг белка). В течение 40—60 с регистрируют медленное эндогенное дыхание и добавляют 0,02 мл сукцината (10 мМ), который вызывает небольшую стимуляцию дыхания. Через 40—60 с в кювету вносят раствор СаСЬ ( 100 мкМ). При этом дыхание сначала резко активируется, затем быстро снижается до исходного уровня. Добавку повторяют несколько раз до тех пор, пока стимуляция дыхания после каждого добавления сменяется четко выраженным торможением. Учитывая количество добавленного СаСЬ, оценивают его максимальную концентрацию, вызывающую обратимую стимуляцию дыхания. Для препарата интактных прочно сопряженных митохондрий (4—6 мг белка в кювете) эта концентрация обычно составляет 400—500 мкМ. В пробе 2 убеждаются в том, что выбранная концентрация СаСЬ вызывает обратимую стимуляцию дыхания с отчетливым выходом в контролируемое состояние. Для определения величины АДФ/О записывают следующую пробу. С этой целью в кювету со средой последовательно добавляют митохондрии, сукцинат и АДФ в концентрации от 300 до 400 мкМ (определение АДФ/О см. на с. 462). Проводят три аналогичных измерения с использованием в качестве субстрата окисления смесь глутамат—малат (по 5 мМ). В этом случае целесообразно уменьшить концентрацию добавляемого СаСЬ в 1,5—2 раза, а в среду инкубации предварительно добавить (непосредственно в кювету) 1 мМ НАД+ для предотвращения утечки эндогенных пиридиннуклеотидов. [c.452]

На рис. 17-1 приведена схема, помогающая понять общую организацию процесса переноса электронов и окислительного фосфорилирования. В каждом обороте цикла лимонной кислоты специфичные дегидрогеназы отщепляют от изоцитрата, а-кетоглутарата, сукцината и малата четыре пары атомов водорода. Эти атомы водорода в определенной точке отдают свои электроны в цепь переноса электронов и превращаются таким образом в ионы Н, которые поступают в водную среду. Электроны, переходя от одного переносчика к другому, достигают в конце концов цитохрома аяз, или цитохромоксидазы, при участии которой они и передаются на кислород— конечный акцептор электронов у аэробных организмов. Всякий раз, когда атом кислорода присоединяет два электрона, поступающие к нему по цепи переноса, из водной среды поглощаются два иона Н, равноценные тем, в которые превратились два атома водорода, отщепленные ранее дегидрогеназами в результате этого образуется молекула НгО. [c.508]

В табл. 25 сравниваются результаты определения молибдена полярографическим методом, обычным весовым методом и методом осаждения 8-оксихинолином по Пршибилу и Малату (стр. 154). [c.225]

Определение оксалат-, тартрат-, малат-, сукцинат-, салицилат>, бензоат- и цитрат-ионов. Для определения оксалат-ионов, основанного на реакции осаждения, используют нитрат серебра, нитрат свинца и хлорид бария [186]. Титрование разбавленных растворов ведут в присутствии спирта. Если осадителем служит ВаСЬ, определение возможно только в водно-спиртовой среде (1 1). [c.259]

При определении малат-ионов осадителями могут служить нитрат свинца, хлорид бария и нитрат лантана [189]. Титрование солей яблочной кислоты ВаСЬ ведут в водно-спиртовой среде (1 1). Осаждение нитратом лантана проводят в присутствии небольшого количества уксусной кислоты. Описано кондуктометрическое титрование яблочной кислоты ацетатом бария в водно-спиртовом растворе. [c.259]

Совместное их решение позволяет легко найти значения А з = = 5,7 10" М и 1 5 = 7,3 10- моль л" с". Используем опытные данные для малат-иона в целях определения Ур и [c.258]

Для определения концентрации образовавшегося малата в спектрофотометрическую кювету вносят 3 мл среды для измерения концентрации малата, добавляют 50 мкМ дихлорфенолиндофенол, 1 мМ феназинметосульфат, малатдегидрогеназу — 50 мкг/мл и аспартатамино-трансферазу — 50 мкг/мл. Определяют значение оптической плотности раствора при длине волны 600 нм, соответствующей максимуму поглощения окисленной формы ДХФИФ (емм ° =20). В кювету добавляют 50—100 мкл раствора малата и фиксируют уменьшение оптической плотности, связанное с восстановлением дихлорфенолиндофенола. Рекомендуется определить указанным методом концентрацию приготовленного по навеске раствора L-малата. Рассчитывают концентрацию образующегося в результате реакции окисления янтарной кислоты малата и определяют стехиометрическое соотношение окисленного сукцината к образованному малату в отсутствие и в присутствии разобщителя. [c.462]

Проведение определения. Тонкорастертый образец руды растворяют в концентрированной азотной кислоте и упаривают до объема 5 мл. После прибавления 5 мл концентрированной соляной кислоты пробу выпаривают досуха. В рудах, бедных молибденом, осадок растворяют в уксусной кислоте, в рудах, богатых молибденом, — в аммиаке. После добавления комплексона раствор фильтруют, доводят pH до 4,6 (аммиаком или уксусной кислотой) и нолярографи-руют. В табл. 22 сравниваются результаты определения молибдена полярографическим методом, обычным весовым методом и методом Пршибила и Малата [86] (осаждением 8-оксихинолином). [c.150]

С целью исследования донных отложений (р. Эльба) на содержание органических соединений серы (дибутилтиофен и его алкильные гомологи) их экстрагировали смесью толуол-метанол (1 3) в течение 40 ч [65 , а при селективном определении никотина в сигаретах табак экстрагировали в две стадии — сначала водным раствором, содержащим малаты или цитраты, а затем (после нейтрализации раствора) хлороформом [66]. В первом случае экстракт очищали на колонке с порошком активной меди (для удаления элементной серы) и разделяли на три фракции на колонке с оксидом алюминия, экстрагируя насыщенные углеводороды н-пентаном, ПАУ — толуолом, а гетероциклические соединения — смесью толуола и метанола. Во втором случае хлороформный экстракт никотина без предварительной обработки хроматографировали на капиллярной колонке с ФИД. Для улучшения воспроизводимости результатов определения никотина и уменьшения возможности возникновения артефактов, мешающих его идентификации, поверхность колонок из нержавеющей стали предварительно обрабатывали основаниями, снижающими адсорбцию никотина. [c.259]

Ход определения по Пршибилу и Малату [80]. К нейтральному раствору прибавляют достаточное количество комплексона и доводят раствор добавлением нескольких миллилитров ацетатного буферного раствора (3 части 50%-ного раствора ацетата аммония и 4 части 50 %-ной уксусной кислоты) до соответствующего значения pH. К 100 мл раствора приливают при кипячении 3 %-ный раствор оксина, прибавляя его лучше всего по каплям, пока раствор над осадком не окрасится в слабо-желтый цвет. Кипячение продолжают в течение 2—3 мин., горячий раствор фильтруют через стеклянный тигель № 3 или 4 и тщательно промывают осадок оксихинолята горячей водой до обесцвечивания фильтрата. Осадок сушат в течение одного часа при температуре 130—140°. [c.154]

Многие из вышеописанных электродов применялись для определения активности ионов кальция и в качестве индикаторных для титрования с ЭДТА [57, 60 ]. Речниц и Хсеу [60 ] использовали электрод фирмы Be kman при изучении констант образования малатов кальция (Ig Кобр 2,66), цитратов кальция (Ig Кобр — = 3,67) и Са-ДЦТА (транс-1,2-диаминоциклогексан-Л ,Л ,Л , Л -тетраацетат кальция, Ig Кобр = 12,65). [c.183]

Хорошо известно, что проявления метаболизма такого типа (типа САМ), т. е. ночная фиксация СОг и суточные колебания концентрации малата, наиболее выражены при низких ночных и высоких дневных температурах. Влияние температуры на эту систему отчасти связано с проходимостью устьиц для СОг. Так, в определенных условиях при низких температурах устьица в темноте раскрываются шире, Однако на эту связь между низкой температурой и раскрытием устьиц, вероятно, накладываются какие-то другие процессы, так как колебания интенсивности фиксации СОг сохраняются даже после удаления эпидер- мального барьера. [c.113]

ВИСЯТ от добавления Mn +, и наблюдаемая константа диссоциации комплекса Е — НАДФН согласуется с константой, определенной на основании изучения начальных скоростей [168, 169]. Во-вторых, комплекс Мп + — изоцитрат обеспечивает защиту НАД+-за-висимой изоцитратдегидрогеназы от инактивации п-хлормеркур-фенилсульфонатом, но ни изоцитрат, ни НАД+ ни сами по себе, ни в присутствии Мп +, ни в его отсутствие такую защиту не обеспечивают [170]. В-третьих, некоторые -из этих ферментов также катализируют металлзависимое декарбоксилирование аналогичных кетокислот, например оксалоацетата ( L-малат-фермент) [155, [c.464]

При pH 7 равновесие сильно сдвинуто влево тем не менее высокое отношение ЫАО+/ЫАВН в клетке, а также быстрое удаление оксалоацетата могут привести к тому, что суммарный процесс будет идти слева направо. Внутри клетки реакция, конечно, одновременно идет и в противоположном направлении, но в целом превалирует катализ в направлении образования оксалоацетата. Значительная доля присутствующего фермента используется для катализа обратной реакции, так что прямая реакция протекает в условиях, далеко не обеспечивающих достижения Ут х, Т. е. слабо зависит от количества присутствующего фермента. Так как целью является определение количества фермента, необходимо выбрать такие условия, когда обратная реакция не идет. Активность малатдегидрогеназы определяют непосредственно по образованию ЫАВН (или в обратной реакции по исчезновению ЫАОН), поскольку МАОН поглощает при 340 нм, тогда как у ЫАВ+ поглощение в этой области отсутствует (рис. 8.2). Фермент можно определять в термодинамически благоприятном направлении, используя оксалоацетат и КАОН при pH 7 или немного ниже. При этом получают определенное значение активности. Кроме того, активность фермента можно определять, вынуждая реакцию идти в прямом направлении. Это достигается 1) в присутствии высоких концентраций малата, обычно 50—100 мМ 2) при высоких значениях pH (9—110), так как в этих условиях образующиеся протоны связываются, и 3) путем удаления оксалоацетата в виде гид-разона [c.280]

Термины Сз- и С4-растения возникли, когда было выяснено различие между основными первичными продуктами фотосинтеза у определенных высших растений. Эта терминология была создана сразу же, как только были открыты Сграстения, еще задолго до того, как у них был установлен механизм фотосинтеза. У С4-растений углерод, исходно связавшийся в составе С4-КИСЛОТ, передается в ВПФ-путь фотосинтеза. Если С -расте-пия выдержать несколько секунд с СОа, то 70—80% радиоактивности обнаруживается в составе С -кислот — малата и аспартата. Лишь небольшая часть (1—5%) включенной метки выявляется в составе оксалоацетата (разд. 10.2). После установления пути фотосинтеза у С4-растеиий этому термину можно дать более строгое определение, учитывающее следующие свойства. [c.314]

У САМ-растений очеиь часто встречаются очеиь крупные ( 100—200 мкм в диаметре) клетки мезофилла, размер которых в несколько раз превышает размеры клеток мезофилла у Сз- или Сграстений. Вакуоли в таких клетках увеличены (так как в иих запасается малат) настолько, что иа долю цитоплазмы остается сравнительно мало места. Анатомическое строение листа у САМ-растений очень разнообразно. Сами по себе анатомические исследования мало что юворят о различиях между Сз- и САМ-растениями (в то время как растеиия семейства злаковых можио вполне определенно отнести либо к Сз-, либо к С4-растениям только на основании изучения особенностей анатомического строения здесь задача облегчается тем, что среди [c.489]

Есть несколько работ, в которых описана физиология устьиц у САМ-растений. При САМ-метаболизме устьица открываются ночью и закрываются днем. Поэтому крахмал в замыкающих клетках распадается только ночью, в результате чего образуется тот предшественник, который используется для синтеза малата. Днем крахмал вновь синтезируется. В этом случае можио выявить определенный параллелизм между наблюдаемой картиной обмена крахмала и тем, что происходит в ткани мезофилла в листьях САМ-растений. Поэтому очень интересно выяснить, сп-особны ли замыкающие клетки устьиц у таких растений осуществлять САМ-метаболизм. Следует отметить тот факт, что очень часто устьица у Сз- и Сграстений за- [c.528]

Представленные в табл. 11 данные по ЦРД для срезов печени сходны с результатами, полученными на гепатоцитах [2], где также была показана его зависимость от окисляемых субстратов. Из табл. И следует, что в обычных условиях (в отсутствие субстратов гидроксилирования) определенное количество кислорода, потребляемое клеткой, может быть связано с процессами немитохондриального окисления. Остаточное, нечувствительное к цианиду дыхание зависит от субстрата окисления. Оно минимально в присутствии глюкозы и сукцината (относительно исходного дыхания) и увеличивается в присутствии НАДФН или субстрата микросомального окисления амидопирина. Наименьшая чувствительность к K N и наибольшие относительное и абсолютное значения остаточного дыхания зарегистрированы в случае совместного добавления амидопирина и НАДФН. Однако, если амидопирин добавлен на фоне субстратов дыхательной цепи, смеси глутамата+малата или сукцината, значения ЦРД, характерные для последнего, не меняются. [c.132]

Активность изолированных митохондрий регистрировали полярографически с платиновым электродом закрытого типа (электрод Кларка) в ячейке объемом 1.4 мл (Трушанов, 1973) на полярографе ОН-105 (Венгрия). Для определения влияния БХШ 310 на функциональную активность комплексов дыхательной цепи использовали различные субстраты цикла трикарбоновых кислот для комплекса I - а-кетоглутарат и малат, для комплекса П - сукцинат, для комплекса Ш - НАДН и для комплекса IV -аскорбат плюс ТМФД (тетраметил-п-фенилендиамин). При окислении сукцината, НАДН и аскорбата для ингибирования транспорта электронов через комплекс I использовали ротенон (3 мкМ). Митохондриальные суспензии инкубировали 5-90 мин при О С. [c.11]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология