Экспериментальные методы ионообменной хроматографии

Существенные экспериментальные трудности, которые до последнего времени ограничивали исследования в области белковой химии, в значительной степени обусловливались отсутствием простых и надежных способов анализа аминокислот. Лишь благодаря развитию за последние два десятилетия ионообменной и распределительной хроматографии удалось разработать автоматический метод количественного анализа аминокислот с использованием окисления аминокислот нингидрином и фотометрирования продуктов реакции [9]. Однако стремительное развитие химии белков и пептидов, среди которых обнаружены важнейшие биорегуляторы и антибиотики, уже сейчас предъявляет новые требования по чувствительности и быстроте анализа. Сложность аппаратурного оформления и дороговизна эксплуатации, безусловно, ограничивают применение автоматического анализатора Мура и Штейна и в значительной степени обусловливают интерес к разработке новых методов аналитического определения аминокислот, свободных от указанных недостатков. [c.252]

В этой главе мы рассмотрели теории, которые объясняют размывание хроматографических зон. Эти теории являются основополагающими для понимания любого хроматографического метода. К тому же они имеют большую практическую ценность, давая хорошее объяснение возможных влияний многих различных экспериментальных переменных. Однако следует уделять внимание не только теоретическим обоснованиям процессов, происходящих в хроматографической колонке. Как уже было показано, детектор и система записи являются жизненно важными дополнениями в хроматографических измерениях, а сам хроматографический процесс является только частью в общей аналитической системе, которая сочетает разделение и количественное измерение. Такие системы находят огромное практическое применение в современном химическом анализе. В гл. 17 будут рассмотрены четыре специфических примера тонкослойная хроматография, газо-жидкостная хроматография ионообменная хроматография и молекулярно-ситовая хроматография. [c.551]

Метод ионообменной хроматографии в настоящее время широко используется для получения чистых препаратов редкоземельных элементов (РЗЭ) [1—4]. Известно большое число различных методик хроматографического разделения смесей РЗЭ, но многие из них носят эмпирический характер. Наряду с этим в литературе имеется ряд сообщений, посвященных выбору условий хроматографического разделения смесей. Мейер и Тонкине [5] использовали теорию тарелок для описания процесса элюирования РЗЭ раствором лимонной кислоты теоретические кривые вымывания совпали с опытными. Метод расчета применим также для определения чистоты РЗЭ, разделяемых при помощи процесса элюирования. Корниш [6], используя выражение, данное Глюкауфом для высоты, эквивалентной теоретической тарелке (ВЭТТ), применил теорию тарелок для предсказания условий разделения смесей ряда элементов. В работах Масловой, Назарова и Чмутова [7,8] была рассчитана величина ВЭТТ для процесса вымывания церия раствором молочной кислоты, что дало возможность произвести расчет кривой элюирования и установить условия получения элемента с заданной степенью чистоты. В работе тех же авторов [8] на примере разделения церия и прометия молочной и пирофосфорной кислотами был проведен расчет процесса градиентного элюирования РЗЭ, с использованием теории Фрейлинга. Расчет удовлетворительно совпадает с экспериментальными данными. В работах Еловича и сотр. [9—12] получено выражение для расчета процесса разделения близких по свойствам элементов. На примере разделения трансурановых элементов при помощи ЭДТА показано решающее значение комплексообразования по сравнению с обычным ионным обменом. В работах Материной, Сафоновой и Чмутова[13] рассмотрена возможность применения фронтального анализа в ионообменной комплексообразовательной хроматографии. Авторы изучали процесс комплексообразования в зависимости от pH среды. Маторина [14] изучила зависимость равновесного коэффициента разделения от pH [c.170]

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ ИОНООБМЕННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ [c.116]

Предполагалось, что дикетопиперазины вкраплены в пептидную цепь и разделяют ее на небольшие отрезки. Переломным и решаюш им явился 1941 г., когда Гордон, Мартин и Синдж предложили применять для разделения продуктов гидролиза белков метод хроматографии на бумаге. Появившиеся вслед затем методы электрофореза, противоточного распределения и метод ионообменных смол позволили исследователям получить необходимый для обоснования теории строения белка экспериментальный материал. [c.521]

До настоящего времени хроматографические явления изучались и рассматривались применительно к нуждам хроматографического анализа, а также для изучения некоторых ионообменных процессов в почвах, различных биологических объектах и т. д. [1, 2]. В последние годы область применения идей и методов хроматографии распространяется и на геологию. В частности, работа такого рода проводится в лаборатории экспериментального рудообразования Института геологии и геофизики СО АН СССР [3-7]. [c.261]

Метод хроматографии на бумаге как в экспериментальном, так, в известной степени, и теоретическом отношении очень близок к методу ТСХ, описанному в разд. 1.3.3. Так же как в ТСХ, разделение основано на распределительном и ионообменном механизмах, бумагу также можно импрегнировать твердыми адсорбентами, жид- [c.78]

В книге не обсуждаются вопросы ионообменной хроматографии, гель-проникающей хроматографии, разделений в слое методом электрофореза. Ссылки на бумажную хроматографию даются только тогда, когда прослеживаются интересные параллели с классической тонкослойной хроматографией. В любом случае основное влияние уделено адсорбционной хроматографии. Я умьшшенно пошел на такое ограничение, чтобы иметь возможность проверять обсуждаемые вопросы экспериментально (поскольку это моя специальность) и тем самым оказать максимальную помощь читателю. [c.19]

Наибольшее количество работ по хроматографическому анализу фторсодержащих соединений относится к ионообменной хроматографии. Экспериментально установлено, что катиониты не адсорбируют и не изменяют концентрацию фтор-иона. Анионитами фтор-ион адсорбируется труднее, чем фосфаты, сульфаты, сульфиты, арсениты и другие анионы, что дает возможность разделить их. В анализе нашли применение различные иониты [1—7]. Описан метод, основанный на сорбировании F , Р0 и этилендиаминтетраацетатных комплексных анионов сильно- [c.141]

В дальнейшем хроматографический метод был значительно усовершенствован, разработана его теория и уточнены условия применения в решении многообразных аналитических задач. Это работы Е. Н. Гапон и Т. Б. Гапон [25, 26] по осадочной хроматографии, теоретическое исследование Шилова [394], Фукса [101, 102], Дубинина ж Чмутова [109], Жуховицкого и Туркельтауба [42], экспериментальные работы по ионообменной хроматографии Сенявина [89, 90] и адсорбции — Киселева [52] и многие другие. [c.11]

Развиваемый послойный метод располагает большими возможностями для характеристики процесса динамики ионного обмена и ионообменной хроматографии в отсутствие и в присутствии комплексообразующих реагентов. Он позволяет раздельно определять концентрации катионной и комплексной форм компонентов смеси на любой стадии процесса, равновесные концентрации ионов в растворе и их распределение по слою ионита. Для примера приведем расчетные и экспериментальные данные по очистке кальция от стронция (при соотношении разделяемой смеси 1 1, нри концентрации металлов 0,0Ш и величине vim = 100) в присутствии 1%-ного раствора ЭДТА в качестве комплексообразующего реагента при исходных значениях pH 4 4,5 и 5, что отвечает разным степеням закомплексованности исследуемых ионов и, как следствие, различной степени очистки одного компонента от другого. На рис. 4 представлены выходные кри- [c.95]

Так называемая обращенно-фазовая хроматография тРНК в действительности представляет собой сочетание методов распределительной и ионообменной хроматографии. Если использовать неподвижную фазу, адсорбированную на инертной матрице, а элюирование проводить в градиенте концентрации соли, то В ходе хроматографии будут непрерывно меняться коэффициенты распределения тРНК между подвижной и неподвижной фазами, т. е. таким образом в экспериментальные условия вводится дополнительный параметр. Такая методика разделения хРНК описана в работе [56]. В качестве инертного носителя авторы использовали сефадекс G-25, неподвижная водная фаза [c.172]

Успешное применение любой из описанных многочисленных модификаций (см. стр. 136) метода анализа смесей аминокислот ионообменной хроматографией зависит главным образом от тщательного выполпепия экспериментальной процедуры. Подробности эксперимента описаны в оригинальных работах, и целесообразно посвятить определенное время отработке выбранного метода, прежде чем переходить к модификациям. Описание деталей выполнения анализа выходит за рамки этой главы, целью которой является обсуждение специальных проблем, возникающих ири аминокислотном анализе гликонротеинов, и связанных с ним структурных соображений. Многие из этих трудностей возникают не нри самом анализе, а в процессе первоначальной обработки гликопротеина, особенно при гидролизе. При расщеплении иолипептидпых цепей белка на аминокислоты появляется возможность для многих побочных реакций, включающих разложение аминокислот. [c.121]

Динамическая модификация метода адсорбции — хроматография существует около 70 лет. Однако методы хроматографии низкомолекулярных веществ не могли быть непосредственно применены для хроматографии таких высокомолекулярных соединений, как белки, нуклеиновые кислоты и особенно вирусов. Этому предшествовала большая экспериментальная работа но выбору и синтезу сорбентов и разработке новых хроматографических методов. Из методов адсорбционной хроматографии наиболее удачным оказался метод хроматографии на фосфате кальция, предложенный Тизелиусом в 1954 г. [799]. Оя был использован для очистки вируса гринна, герпеса, иолиов уса, энцеф ало миокардита, арбо виру сов и многих других. Но наибольшего успеха достигли Петерсон и Собер [636], В 1956 г. они синтезировали ионообменники на основе целлюлозы. Принципиальным преимуществом целлюлозных сорбентов по сравнению с ионообменными смолами явилась возмож- [c.44]

Потребовалось выполнить исключительно большую экспериментальную работу по выбору п синтезу сорбентов и изучению условий проведения хроматографических процессов, прежде чем были созданы современные весьма изяш,ные хроматографические методы фракционирования макромолекул. Затруднения, возникшие при разработке этих методов, связаны прежде всего с необратимостью сорбции и малой емкостью сорбции белков. Период поисковых работ включал изучение распределительной хроматографии [1, 4] и молекулярной сорбционной хроматографии, в том числе весьма удачный для своего времени разработанный Тизелиусом метод хроматографии на фосфате кальция [2] и высаливающий хроматографический процесс [3], в котором емкость сорбции белков резко увеличивалась при высоких концентрациях электролита в растворе. Все эти методы, однако, уступили свое место высокоэффективной хроматографии белков на некоторых типах ионообменных смол, на модифицированных целлюлозах и методу гельфильтрации на сефадексах. Имеется значительное число обзоров по хроматографии белков, среди которых наиболее подробными являются статьи Циттла [4] и Мура и Штейна [5]. [c.188]

Как и в любом другом аналитическом методе, в жидкостной хроматографии одинаково важное значение имеют и правильность ме-годики, и талант экспериментатора. Поэтому нет ничего удивительного, что экспериментальные условия, которые дают идеальные результаты для одного анализа, иногда не подходят для другого подобного анализа. Например, заменяя одну партию ионообменной смолы на другую, иногда для достижения оптимальных результатов необходимо изменять условия хроматографирования. Хорваш [1], Узиел [4], Кох [5] и Бартиш [6—8] описали некоторые важные соображения, которыми они руководствовались, определяя, какие параметры необходимо регулировать для получения оптимальных результатов в описанных здесь разделениях. Как правило, приведенные -ниже параметры следует изменять в том порядке, как они записаны. Хотя для достижения оптимальных результатов очень часто оказывается достаточным изменить только один параметр, е некоторых случаях бывает необходимо одновременно или последовательно изменять два или более параметров. [c.303]

Экспериментальные исследовапип динамики ионного обмена и образования ионообменных хроматограмм, подтверждающие теорию хроматографии Е. Н. Гапона, приводились уже в печати. Автором были проведены исследования динамики ионного обмена с применением изотопного метода [31, 32], Е. С. Жунахина [31] провела экспериментальное исследование образования ионообменных хроматограмм трех ионов при помощи слоистых колонок. [c.37]

Для специалиста в области классической хроматографии наибольший интерес представят, конечно, первые главы, содержащие основные данные о приемах работы и аппаратуре. Осуществить разделение смесей растворов веществ, как мы уже говорили, можно и обычными колоночными методами, и в последующих главах автор рассматривает все виды колоночной хроматографии - адсорбционную. распределительную, ионообменную и гель-фильтрационную. Однако он постоянно возвращается к спещ1фике исследований при высоких давлениях и дает весьма полезные указания об особенностях применения в каждом случае хроматографии при высоких давлениях, позволяющей ускорить процесс анализа. Предлагаемая вниманию читателей книга насыщена экспериментальным материалом главным образом из области органической и биологической химии, отличается компактностью изложения и, несомненно, будет полезна для дальнейшего развития метода советскими исследователями. [c.5]

Ионообменные, в том числе хроматографические, методы выделения, очистки и разделения сложных смесей органических веществ приобрели исключительно широкое распространение как в области экспериментальных исследовашга, так и в промышленной практике. Получение многих аминокислот, полипептидов, белков, нуклеотидов, нуклеиновых кислот, выделение и очистка антибиотиков, витаминов, гормонов, алкалоидов стали немыслимы без использования ионообменных процессов, часто в сочетании с гелевой хроматографией. В нодавляюш,ем большинстве случаев процесс осуш ествляется на ионитах, принадлежащих к числу синтетических нерастворимых нолиэлектролитов с различной степенью набухания. Можно без преувеличения сказать, что ионообменные процессы как метод избирательного извлечения или метод анализа применяются во всех отраслях химии и биологии. [c.3]

Справочник химика 21

Химия и химическая технология